{"id":100333,"date":"2018-03-11T10:21:46","date_gmt":"2018-03-11T10:21:46","guid":{"rendered":""},"modified":"2018-03-11T10:21:46","modified_gmt":"2018-03-11T10:21:46","slug":"aislamiento-y-caracterizacion-de-cepas-de-penicillium-roqueforti-a-partir-de-distintas-variedades-de-queso-azul-analisis-de-la-actividad-proteola%c2%adtica-y-eliminacion-de-la-produccion-de-micotoxin","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/microbiologia\/aislamiento-y-caracterizacion-de-cepas-de-penicillium-roqueforti-a-partir-de-distintas-variedades-de-queso-azul-analisis-de-la-actividad-proteola%c2%adtica-y-eliminacion-de-la-produccion-de-micotoxin\/","title":{"rendered":"Aislamiento y caracterizacion de cepas de penicillium roqueforti a partir de distintas variedades de queso azul. an\u00e1lisis de la actividad proteol\u00edtica y eliminaci\u00f3n de la producci\u00f3n de micotoxinas."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Mar\u00eda  Angeles Fernandez Bodega <\/strong><\/h2>\n<p>Para la realizaci\u00f3n de la presente tesis doctoral se han tenido en cuenta dos de los aspectos m\u00e1s caracter\u00edsticos de la especie f\u00fangica penicillium roqueforti. En primer lugar, su uso en la industria alimentaria como principal microorganismo utilizado en la elaboraci\u00f3n del queso azul. Y en segundo lugar su capacidad para sintetizar toda una serie de metabolitos secundarios t\u00f3xicos, conocidos con el nombre de micotoxinas. p. Roqueforti es el hongo utilizado desde la antig\u00ed\u00bcedad en la fabricaci\u00f3n de quesos azules. En la regi\u00f3n de los picos de europa se producen quesos azules tanto de manera artesanal, como de forma industrial. En el primer caso el queso es colonizado por la cepa o cepas f\u00fangicas aut\u00f3ctonas durante su maduraci\u00f3n en cuevas naturales de la zona, mientras que en los quesos elaborados de manera industrial, el hongo es adicionado a la leche en forma de un preparado comercial de esporas. en el presente trabajo se han aislado cepas de p. Roqueforti a partir de cuatro variedades espa\u00f1olas de queso azul, tres variedades artesanales (cabrales, bejes-tresviso y valde\u00f3n) y una variedad de queso azul elaborada de forma industrial (valde\u00f3n industrial). Se comprob\u00f3 que todas las cepas de p. Roqueforti aisladas de las variedades de queso azul y la cepa utilizada como control, p. Roqueforti cect 2905, presentan las caracter\u00edsticas morfol\u00f3gicas t\u00edpicas descritas para este hongo filamentoso, despu\u00e9s de un periodo de incubaci\u00f3n de 7 d\u00edas a 25 \u00c2\u00ba c en los medios de cultivo cya y mea. Adem\u00e1s, el an\u00e1lisis de las secuencias correspondientes al adn que codifica el arn ribosomal confirm\u00f3 que todas las cepas aisladas pertenecen a la especie p. Roqueforti. Por otro lado, el an\u00e1lisis del perfil de restricci\u00f3n del adn mitocondrial permiti\u00f3 diferenciar, en primer lugar, las cepas aisladas del queso de la cepa control, p. Roqueforti cect 2905; en segundo lugar permiti\u00f3 distinguir las cepas presentes en las variedades artesanales de queso con respecto a la cepa utilizada en la elaboraci\u00f3n industrial. Finalmente, el an\u00e1lisis fenot\u00edpico de cada una de las cepas (an\u00e1lisis de las actividades proteol\u00edtica y lipol\u00edtica, secreci\u00f3n de aspartil-proteasa y an\u00e1lisis de la producci\u00f3n de andrastinas y micotoxinas) confirm\u00f3 las diferencias que existen entre la cepa utilizada en la fabricaci\u00f3n industrial del queso azul y el conjunto de cepas aisladas de las variedades artesanales. entre las micotoxinas producidas por p. Roqueforti se encuentran la toxina pr, y la roquefortina c. La roquefortina c, presente en el queso azul en concentraciones muy bajas, es una micotoxina neurot\u00f3xica, mientras que la toxina pr, que sufre un proceso de degradaci\u00f3n durante la maduraci\u00f3n del queso azul, tiene actividad mutag\u00e9nica. Ambas micotoxinas son producidas tambi\u00e9n por el hongo p. Chrysogenum, cuyo genoma ha sido recientemente secuenciado (van den berg, et al., 2008). Este hecho facilita en gran medida el estudio de la ruta de bios\u00edntesis de estas dos micotoxinas en ambas especies del g\u00e9nero penicillium. en el presente trabajo se han obtenido mutantes no productores de aristoloqueno y toxina pr en la cepa p. Roqueforti cect 2905 por silenciamiento del gen ari1, resultado que verific\u00f3 la hip\u00f3tesis de que en p. Roqueforti el aristoloqueno es la mol\u00e9cula precursora de toxina pr. Por su parte, p. Chrysogenum wisconsin 54-1255 presenta una copia homologa a la del gen ari1 de p. Roqueforti y su nivel de expresi\u00f3n es similar en ambos hongos. Sin embargo, no ha sido posible detectar la producci\u00f3n de aristoloqueno ni de toxina pr en p. Chrysogenum mediante cromatograf\u00eda en capa fina, utilizando las condiciones de cultivo puestas a punto para el caso de p. Roqueforti.  en cuanto al estudio de la bios\u00edntesis de roquefortina c, se ha encontrado en el genoma de la cepa p. Chrysogenum wisconsin 54-1255 una agrupaci\u00f3n g\u00e9nica presumiblemente implicada en la bios\u00edntesis de roquefortina c y meleagrina. Esta agrupaci\u00f3n incluye los genes dmaw2 y dps que codifican respectivamente una dimetilaliltript\u00f3fano-sintasa y una dip\u00e9ptido sintetasa. El an\u00e1lisis de la citada agrupaci\u00f3n g\u00e9nica y de la estructura secundaria de estas prote\u00ednas permiti\u00f3 dilucidar la ruta de bios\u00edntesis de roquefortinac\/meleagrina en el citado hongo. Esta ruta se confirmo gracias a la obtenci\u00f3n de mutantes de p. Chrysogenum silenciados en los genes dmaw2 y dps cuya producci\u00f3n de roquefortina c y meleagrina era sustancialmente menor a la cuantificada en la cepa control p. Chrysogenum wisconsin 54-1255. Finalmente, se han identificado tambi\u00e9n en el genoma de p. Roqueforti cect 2905 dos genes, dmaw2 y dps, hom\u00f3logos a los que codifican la dimetilaliltript\u00f3fano-sintasa y la dip\u00e9ptido sintetasa implicadas en la s\u00edntesis de roquefortina c y meleagrina en p. Chrysogenum. Adem\u00e1s, p. Roqueforti posee un segundo gen dmaw, dmaw1, que presenta homolog\u00eda con las dimetilaliltript\u00f3fano-sintasas implicadas en la bios\u00edntesis de ergoalcaloides en claviceps purpurea y aspergillus fumigatus. El silenciamiento del gen dmaw1 en la cepa p. Roqueforti cect 2905 afecta tambi\u00e9n a la producci\u00f3n de roquefortina c y otra serie de compuestos alcaloides, pero no a la producci\u00f3n de meleagrina. Por lo que se piensa que en p. Roqueforti la dimetialaliltript\u00f3fano-sintasa implicada en la s\u00edntesis de meleagrina, esta codificada por el gen denominado dmaw2, al igual que ocurre en p. Chrysogenum.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Aislamiento y caracterizacion de cepas de penicillium roqueforti a partir de distintas variedades de queso azul. an\u00e1lisis de la actividad proteol\u00edtica y eliminaci\u00f3n de la producci\u00f3n de micotoxinas.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Aislamiento y caracterizacion de cepas de penicillium roqueforti a partir de distintas variedades de queso azul. an\u00e1lisis de la actividad proteol\u00edtica y eliminaci\u00f3n de la producci\u00f3n de micotoxinas. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Mar\u00eda  Angeles Fernandez Bodega <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Le\u00f3n<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 16\/04\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Ana G\u00f3mez Rodr\u00edguez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Miguel angel Asensio perez <\/li>\n<li>Jos\u00e9 Luis Barrero fuente (vocal)<\/li>\n<li>baltasar Mayo p\u00e9rez (vocal)<\/li>\n<li>Juan  Jos\u00e9 Rubio coque (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Mar\u00eda Angeles Fernandez Bodega Para la realizaci\u00f3n de la presente tesis doctoral se han tenido en cuenta 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