{"id":100604,"date":"2018-03-11T10:22:12","date_gmt":"2018-03-11T10:22:12","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/papel-wnt-en-la-hematopoyesis-embrionaria\/"},"modified":"2018-03-11T10:22:12","modified_gmt":"2018-03-11T10:22:12","slug":"papel-wnt-en-la-hematopoyesis-embrionaria","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/barcelona\/papel-wnt-en-la-hematopoyesis-embrionaria\/","title":{"rendered":"Papel wnt en la hematopoyesis embrionaria"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Cristina Ruiz  Herguido <\/strong><\/h2>\n<p>Varios son los estudios que demuestran un papel regulador importante de la v\u00eda can\u00f3nica de wnt en los progenitores y c\u00e9lulas madre hematopoy\u00e9ticas en la vida adulta (willert, k. Et al., 2003; reya, t. Et al., 2003; zhao, c. Et al., 2007). Todos estos estudios demuestran que  la v\u00eda can\u00f3nica de wnt y su correcta se\u00f1alizaci\u00f3n son cr\u00edticos para mantener la homeostasis normal de las hsc tanto in vitro como in vivo pero se desconoce su papel en la generaci\u00f3n de las primeras hsc durante el desarrollo embrionario. el objetivo principal de esta tesis doctoral es determinar el posible papel de la v\u00eda can\u00f3nica de wnt en la fomaci\u00f3n de hsc en el embri\u00f3n de rat\u00f3n. en primer lugar, se analiz\u00f3 el patr\u00f3n de expresi\u00f3n de los ligandos de la v\u00eda de wnt mediante rt-pcr cuantitativa en la regi\u00f3n de la agm, la cual incluye la aorta dorsal. para estudiar en detalle la expresi\u00f3n de los ligandos wnt en la aorta dorsal y saber qu\u00e9 c\u00e9lulas exactamente los estan expresando se realizaron hibridaciones in situ. Algunos ligandos se expresaban en las c\u00e9lulas endoteliales de la aorta y tambi\u00e9n en el mes\u00e9nquima adyacente y mesonefros, mientras que otros daban un patr\u00f3n de expresi\u00f3n negativo. sabiendo que algunos ligandos wnt se expresaban en el endotelio de la aorta dorsal y en los clusters hematopoy\u00e9ticos el siguiente paso fue analizar si la v\u00eda can\u00f3nica de wnt estaba activada en estas c\u00e9lulas.   la presencia de la \u00edY-catenina (principal efector de la v\u00eda can\u00f3nica de wnt) en el n\u00facleo correlaciona con la activaci\u00f3n de la v\u00eda can\u00f3nica de wnt por ello, se realizaron inmunofluorescencias en cortes transversales de embriones a d\u00eda de desarrollo e10.5. Se obtuvo un claro marcaje en la membrana de las c\u00e9lulas del endotelio de la aorta pero s\u00f3lo algunas de ellas ten\u00edan marcaje nuclear (no mostrado). Para saber si las c\u00e9lulas del endotelio que tienen activada la v\u00eda can\u00f3nica de wnt son hsc se realizaron dobles inmunofluorescencias en embriones a d\u00eda e10.5. Se utilizo c-kit como marcador de hsc y su expresi\u00f3n queda restringida a los clusters hematopoy\u00e9ticos (los cuales contienen las hsc). Todas las c\u00e9lulas del endotelio presentan un claro marcaje en la membrana y s\u00f3lo unas pocas tienen marcaje nuclear. Mientras que las c\u00e9lulas c-kit+ no presentaban marcaje nuclear las c\u00e9lulas endoteliales presentes en la base de los clusters s\u00ed sugiriendo que los progenitores que dan lugar a los clusters hematopoy\u00e9ticos tienen activada la v\u00eda can\u00f3nica de wnt.  para estudiar el efecto que esta causando la activaci\u00f3n de la v\u00eda en estas c\u00e9lulas se realizaron cultivos de explante utilizando agms a diferentes d\u00edas de desarrollo y trat\u00e1ndolas con activadores (sb216763 o fratide) e inhibidores (pkf115-584) de la v\u00eda can\u00f3nica de wnt. Se escogio este tipo de cultivos porque mantienen y amplifican las hsc y tras 3 d\u00edas en cultivo se analizaron los progenitores hematopoy\u00e9ticos mediante el ensayo de cfcs o c\u00e9lulas formadoras de colonias. La activaci\u00f3n de la v\u00eda produjo un aumento del n\u00famero total de progenitores hematopoy\u00e9ticos mientras que la inhibici\u00f3n disminuyo drasticamente la formaci\u00f3n de estos progenitores sugiriendo que la v\u00eda can\u00f3nica de wnt esta involucrada en la generaci\u00f3n de estos progenitores. En diversos estudios se ha demostrado la existencia de un precursor comun en el endotelio de la aorta capaz de producir tanto c\u00e9lulas hematopoy\u00e9ticas y endoteliales conocido con el nombre de hemangioblasto. Con el fin de investigar si la v\u00eda de wnt esta regulando la decisi\u00f3n entre endotelio o c\u00e9lula hematopoy\u00e9tica se aislaron por citometr\u00eda de flujo c\u00e9lulas endoteliales (cd31+\/cd45-) a partir de agms a e11.5 y se mantuvieron en cultivo l\u00edquido, trat\u00e1ndolas con sb y frat para activar la v\u00eda de wnt. En las gr\u00e1ficas de la figura 4 se resumen los resultados obtenidos que muestran como la activaci\u00f3n de la v\u00eda can\u00f3nica de wnt produjo una disminuci\u00f3n de las c\u00e9lulas endoteliales (cd31) aumentando la poblaci\u00f3n hematopoy\u00e9tica (cd45). Estos resultados correlacionan con los obtenidos al inhibir la v\u00eda utlizando cultivos de explante en los que obtuvimos un claro aumento de c\u00e9lulas endoteliales y una disminuci\u00f3n de la poblaci\u00f3n hematopoy\u00e9tica. por \u00faltimo, estudiamos la hematopoyesis de los embriones mutantes apc, que tienen mutada una copia del gen apc y por tanto tienen una mayor activaci\u00f3n de la v\u00eda can\u00f3nica, con el fin de estudiar de una manera m\u00e1s fisiol\u00f3gica la v\u00eda de wnt. Se estudiaron las hsc de la agm y del h\u00edgado fetal y se vio que la capacidad de auto renovaci\u00f3n de las hsc presentes en la agm e h\u00edgado fetal de los embriones mutantes estaba severamente afectada utilizando ensayos de transplante secundario a ratones irradiados. objetivos logrados o conclusiones \u00c2\u00bf\talgunas c\u00e9lulas del endotelio de la aorta dorsal tienen activada la v\u00eda can\u00f3nica de wnt y probablemente esta activaci\u00f3n este involucrada en la generaci\u00f3n de las c\u00e9lulas madre hematopoy\u00e9ticas (hsc). \u00c2\u00bf\tm\u00e1s espec\u00edficamente, la v\u00eda can\u00f3nica de wnt podr\u00eda estar afectando la decisi\u00f3n entre los linajes hematopoy\u00e9tico y endotelial durante la generaci\u00f3n de las hsc. \u00c2\u00bf\tlos embriones mutantes apc tienen afectada la autorenovaci\u00f3n de las hsc.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Papel wnt en la hematopoyesis embrionaria<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Papel wnt en la hematopoyesis embrionaria <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Cristina Ruiz  Herguido <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Barcelona<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 30\/04\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Anna Bigas Salvans<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: cristina Pujades corbi <\/li>\n<li>sergio Querol giner (vocal)<\/li>\n<li>  (vocal)<\/li>\n<li>  (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Cristina Ruiz Herguido Varios son los estudios que demuestran un papel regulador importante de la v\u00eda can\u00f3nica [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[951],"tags":[117389,138077,204827,183675],"class_list":["post-100604","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-barcelona","tag-anna-bigas-salvans","tag-cristina-pujades-corbi","tag-cristina-ruiz-herguido","tag-sergio-querol-giner"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/100604","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=100604"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/100604\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=100604"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=100604"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=100604"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}