{"id":100860,"date":"2018-03-11T10:22:30","date_gmt":"2018-03-11T10:22:30","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-del-estres-oxidativo-en-espermatozoides-epididimarios-crioperservados-del-ciervo\/"},"modified":"2018-03-11T10:22:30","modified_gmt":"2018-03-11T10:22:30","slug":"estudio-del-estres-oxidativo-en-espermatozoides-epididimarios-crioperservados-del-ciervo","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/fisiologia-veterinaria\/estudio-del-estres-oxidativo-en-espermatozoides-epididimarios-crioperservados-del-ciervo\/","title":{"rendered":"Estudio del estres oxidativo en espermatozoides epididimarios crioperservados del ciervo"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> \u00c1lvaro Efren Dominguez Rebolledo <\/strong><\/h2>\n<p>Los bancos de germoplasma tienen una gran importancia para la gesti\u00f3n y conservaci\u00f3n de rumiantes silvestres. En el caso del ciervo rojo, su importancia socioecon\u00f3mica exige el uso de t\u00e9cnicas de reproducci\u00f3n asistida, para lo cual es imprescindible mejorar nuestros conocimientos sobre la fisiolog\u00eda esperm\u00e1tica y la preservaci\u00f3n seminal. En la presente tesis, se ha abordado esta problem\u00e1tica desde la perspectiva del impacto del estr\u00e9s oxidativo en los espermatozoides epididimarios descongelados de esta especie, as\u00ed como su prevenci\u00f3n. El estr\u00e9s oxidativo puede provocar una p\u00e9rdida considerable de calidad esperm\u00e1tica, habiendo siendo estudiado en numerosas especies y proponi\u00e9ndose diversas soluciones, generalmente basadas en la suplementaci\u00f3n de las dosis seminales con sustancias antioxidantes. en una primera etapa, realizamos un estudio para determinar si el lavado post-descongelaci\u00f3n de los espermatozoides, una t\u00e9cnica rutinaria de procesamiento seminal, induc\u00eda estr\u00e9s oxidativo o un incremento en la vulnerabilidad de \u00e9stos. Determinamos que ni la diluci\u00f3n ni la centrifugaci\u00f3n-resuspensi\u00f3n sin cambio de medio provocaban un estr\u00e9s oxidativo detectable, ni un incremento en la vulnerabilidad de los espermatozoides a un estr\u00e9s oxidativo inducido. No obstante, el lavado (centrifugaci\u00f3n y cambio de medio) increment\u00f3 el da\u00f1o producido (movilidad, estado mitocondrial, viabilidad y roturas en adn) al incubar en presencia de un inductor de estr\u00e9s oxidativo. La presencia del antioxidante trolox (un an\u00e1logo de la vitamina e) evit\u00f3 este da\u00f1o, indicando un posible efecto beneficioso de estos aditivos durante el manejo de los espermatozoides post-descongelaci\u00f3n. en un segundo experimento, comprobamos el efecto de varias sustancias antioxidantes durante la incubaci\u00f3n post-descongelaci\u00f3n de los espermatozoides. Los antioxidantes elegidos fueron el \u00e1cido lipoico, la melatonina, la crocina y trolox. La incubaci\u00f3n a 37 \u00c2\u00b0c (4 h) increment\u00f3 la concentraci\u00f3n de especies reactivas  del ox\u00edgeno (ros) intracelulares y redujo la movilidad esperm\u00e1tica, siendo estos efectos mayores al aplicar estr\u00e9s oxidativo ex\u00f3geno, el cual adem\u00e1s aument\u00f3 los niveles de peroxidaci\u00f3n lip\u00eddica y el da\u00f1o al adn. La aplicaci\u00f3n de trolox (1 y 0,1 mm) evit\u00f3 la mayor parte de los efectos negativos de la incubaci\u00f3n y del estr\u00e9s oxidativo ex\u00f3geno. El \u00e1cido lipoico no tuvo ning\u00fan efecto protector. En el caso de la melatonina, pudimos apreciar un efecto positivo por encima de 1 mm, reduciendo las ros intracelulares, la lipoperoxidaci\u00f3n y anulando los da\u00f1os al adn. La crocina estimul\u00f3 la movilidad esperm\u00e1tica y redujo el da\u00f1o al adn, aunque elev\u00f3 las ros en muestras no sometidas a estr\u00e9s oxidativo, e increment\u00f3 los niveles de peroxidaci\u00f3n lip\u00eddica. Los resultados de este experimento sugieren la idoneidad del trolox, incluso a bajas concentraciones, y la posible utilidad de la melatonina como antioxidante en el semen descongelado. La crocina queda pendiente de futuros experimentos, para evaluar los resultados, en parte contradictorios, obtenidos en esta tesis. en un tercer estudio, determinamos el efecto de dosis crecientes de per\u00f3xido de hidr\u00f3geno (h2o2) sobre los espermatozoides descongelados y lavados. Tras una incubaci\u00f3n de 2 h a 37 \u00c2\u00b0c, encontramos que los espermatozoides apenas fueron afectados a dosis hasta 100 \u00c2\u00b5m de h2o2, encontrando un efecto negativo a 200 \u00c2\u00b5m. Este efecto consisti\u00f3 principalmente en la disminuci\u00f3n de la movilidad y en un incremento del da\u00f1o al adn esperm\u00e1tico (determinado mediante scsa). Este estudio muestra que los espermatozoides de ciervo podr\u00edan tener cierta resistencia al da\u00f1o oxidativo, incluso en ausencia de antioxidantes. No obstante, no podemos descartar da\u00f1os m\u00e1s sutiles, especialmente en el adn. en ese estudio, no conseguimos detectar un incremento apreciable de la peroxidaci\u00f3n lip\u00eddica, que fue evaluada mediante la prueba de las tbars (especies reactivas del \u00e1cido tiobarbit\u00farico). Por lo tanto, nos planteamos estudiar la sensibilidad y repetibilidad de esa prueba en espermatozoides de ciervo, compar\u00e1ndola con las sondas fluorescentes bodipy 581\/591 c11  (b581) y bodipy 665\/676 c11 (b665), dise\u00f1adas para detectar peroxidaci\u00f3n lip\u00eddica. Hay que destacar que esta ha sido la primera vez que se ha comunicado el uso de b665 con espermatozoides. Ambas sondas fluorescentes fueron analizadas mediante citometr\u00eda de flujo y en un lector de placas (fluor\u00edmetro), para comparar la idoneidad de estas t\u00e9cnicas para este an\u00e1lisis. La t\u00e9cnica de tbars detect\u00f3 un incremento de peroxidaci\u00f3n lip\u00eddica s\u00f3lo cuando los espermatozoides se incubaron a tiempos largos con sustancias oxidantes (per\u00f3xido de hidr\u00f3geno e hidroper\u00f3xido de terc-butilo) a altas concentraciones, mostrando una repetibilidad y sensibilidad mediocres. Ambas sondas bodipy mostraron una buena repetibilidad y sensibilidad, especialmente al ser analizadas mediante citometr\u00eda de flujo, pudiendo detectar peroxidaci\u00f3n lip\u00eddica en distintas condiciones de incubaci\u00f3n. La lectura en fluor\u00edmetro produjo resultados satisfactorios, aunque algo menos sensible que la citometr\u00eda, y podr\u00eda ser una alternativa de bajo coste para evaluar peroxidaci\u00f3n lip\u00eddica mediante estas sondas fluorescentes. en varios de los experimentos de esta tesis, se aprovech\u00f3 para estudiar la variabilidad individual al da\u00f1o oxidativo, al utilizar muestras de distintos machos. En el primer experimento, determinamos que las muestras de distintos machos presentaban distintos grados de resistencia al estr\u00e9s oxidativo tras el lavado post-descongelaci\u00f3n. Este estudio se retom\u00f3 al analizar la resistencia de los espermatozoides a dosis crecientes de h2o2. Cuando se evalu\u00f3 el efecto de este oxidante sobre muestras procedentes de machos individuales, encontramos grandes diferencias tanto en la respuesta al estr\u00e9s oxidativo como a la incubaci\u00f3n (incluso en ausencia de \u00e9ste). Estos resultados pueden tener gran relevancia en el desarrollo de protocolos de manipulaci\u00f3n y preservaci\u00f3n de muestras esperm\u00e1ticas, ya que las muestras vulnerables podr\u00edan requerir un tratamiento especial, a pesar de observarse una buena resistencia en otras muestras.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio del estres oxidativo en espermatozoides epididimarios crioperservados del ciervo<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio del estres oxidativo en espermatozoides epididimarios crioperservados del ciervo <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 \u00c1lvaro Efren Dominguez Rebolledo <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Castilla-la mancha<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 13\/05\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>brea Garde Lopez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Luis Anel rodr\u00edguez <\/li>\n<li>milagros cristina Esteso diez (vocal)<\/li>\n<li>Fernando Juan Pe\u00f1a vega (vocal)<\/li>\n<li>inmaculada Parrilla riera (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de \u00c1lvaro Efren Dominguez Rebolledo Los bancos de germoplasma tienen una gran importancia para la gesti\u00f3n y conservaci\u00f3n [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center 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