{"id":101218,"date":"2018-03-11T10:22:58","date_gmt":"2018-03-11T10:22:58","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/valoracion-de-la-capacidad-de-criopreservacion-espermatica-del-semen-porcino-mediante-tecnicas-de-choque-a-frigore-y-termorresistencia\/"},"modified":"2018-03-11T10:22:58","modified_gmt":"2018-03-11T10:22:58","slug":"valoracion-de-la-capacidad-de-criopreservacion-espermatica-del-semen-porcino-mediante-tecnicas-de-choque-a-frigore-y-termorresistencia","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/porcinos\/valoracion-de-la-capacidad-de-criopreservacion-espermatica-del-semen-porcino-mediante-tecnicas-de-choque-a-frigore-y-termorresistencia\/","title":{"rendered":"Valoraci\u00f3n de la capacidad de criopreservaci\u00f3n esperm\u00e1tica del semen porcino mediante t\u00e9cnicas de choque a frigore y termorresistencia."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Ra\u00fal Gonz\u00e1lez Urdiales <\/strong><\/h2>\n<p>La utilizaci\u00f3n de semen porcino criopreservado para la inseminaci\u00f3n artificial comercial podr\u00eda reportar numerosas ventajas, tales como el mayor control sanitario, la gran disponibilidad espacio\/temporal, la estabilidad frente a variaciones clim\u00e1ticas o la posibilidad de incorporar a las explotaciones gen\u00e9tica de alto valor con un coste m\u00e1s reducido, pero en la pr\u00e1ctica su uso se ve muy restringido, principalmente por la sustancial reducci\u00f3n del rendimiento reproductivo que presenta con respecto a las dosis seminales refrigeradas. Por este motivo, y dado que la realizaci\u00f3n de una criopreservaci\u00f3n \u00f3ptima del semen ha sido considerada como un prerrequisito esencial para la utilizaci\u00f3n de esta t\u00e9cnica de conservaci\u00f3n a nivel comercial, los trabajos de investigaci\u00f3n han ido dirigidos a intentar perfeccionarla.   la amplia variabilidad en los resultados obtenidos con semen de verraco en cuanto a la supervivencia celular frente a procesos de enfriamiento y descongelaci\u00f3n, dadas las notables diferencias existentes no s\u00f3lo entre razas sino tambi\u00e9n entre individuos, hace que sea necesario realizar una selecci\u00f3n de animales basada en la capacidad de criopreservaci\u00f3n de su semen, y aunque se ha apuntado una posible influencia gen\u00e9tica en esta variabilidad posdescongelado, hasta el momento no existen publicaciones que recojan modelos de selecci\u00f3n gen\u00e9tica basados en la congelabilidad del semen; de hecho, \u00fanicamente se ha englobado a los diferentes animales estudiados en categor\u00edas de buenos y malos congeladores con base en las caracter\u00edsticas seminales posdescongelado, sin haber conseguido extraer buenas relaciones entre \u00e9stas y otras que definan a los verracos de forma previa a la congelaci\u00f3n\/descongelaci\u00f3n del semen. Por otro lado, la existencia de variaciones tras la descongelaci\u00f3n entre eyaculados de un mismo verraco, hecho que parece responder a cambios de las propiedades bioqu\u00edmicas de los espermatozoides como consecuencia, entre otras causas, de variaciones en la frecuencia de colecci\u00f3n o de la \u00e9poca del a\u00f1o, hace que la determinaci\u00f3n de alg\u00fan indicador de la capacidad de criopreservaci\u00f3n de un eyaculado en sus caracter\u00edsticas seminales antes de congelar, resulte tanto o m\u00e1s interesante que la propia selecci\u00f3n de animales.  en este sentido, el principal objetivo de este trabajo ha sido determinar la eficacia de sencillas pruebas de laboratorio en la predicci\u00f3n de la supervivencia esperm\u00e1tica al proceso de criopreservaci\u00f3n, para lo cual fueron desarrollados dos experimentos en un intento de identificar factores relacionados con la variabilidad posdescongelado en 40 eyaculados procedentes de 8 verracos (5 congelaciones por verraco) de dos razas diferentes (large white [20 congelaciones] y landrace [20 congelaciones]). En el primero de ellos, se evaluaron pruebas que habitualmente se emplean en las valoraciones seminales que se efect\u00faan en los centros de ia comerciales sobre el semen fresco, tratando mediante ellas de relacionar la adaptaci\u00f3n de las c\u00e9lulas a determinadas situaciones de estr\u00e9s (osm\u00f3tico, por calor, o por fr\u00edo) con la resistencia que manifiestan al proceso completo de criopreservaci\u00f3n. La capacidad de adaptaci\u00f3n a un estr\u00e9s osm\u00f3tico fue valorada por medio de pruebas de host (de 30 y 60 minutos de incubaci\u00f3n) y de ort (de 60 y 120 minutos de incubaci\u00f3n) con soluciones hiposm\u00f3ticas ajustadas a 100mosm\/kg, la de adaptaci\u00f3n a un estr\u00e9s por calor, mediante la incubaci\u00f3n de las muestras seminales diluidas a 39 \u00c2\u00bac durante 7 horas, evaluando la integridad de las membranas plasm\u00e1tica y acros\u00f3mica, as\u00ed como el porcentaje de movilidad (con y sin cafe\u00edna) a la hora y media (t1,5), a las tres (t3), a las cuatro horas y media (t4,5) y a las siete horas (t7); y finalmente, en la resistencia esperm\u00e1tica a un descenso brusco de temperatura, se valoraron esos mismos par\u00e1metros tras someter las muestras a temperaturas de 0 \u00c2\u00bac durante 5 minutos en diferentes momentos: a los 10 minutos de comenzar una incubaci\u00f3n a 20 \u00c2\u00bac (s0), a la hora (s1), a las dos (s2), a las tres (s3) y a las cinco horas (s5).   por su parte, en el segundo experimento se analiza si las caracter\u00edsticas del movimiento de los espermatozoides en semen fresco, y en cada uno de esos puntos de referencia establecidos en el estr\u00e9s por calor (termorresistencia) o por fr\u00edo (choque por fr\u00edo), muestran evidencias de la capacidad de criopreservaci\u00f3n de los eyaculados; para ello, se efectu\u00f3 un estudio pormenorizado de la cin\u00e9tica esperm\u00e1tica a trav\u00e9s del an\u00e1lisis individualizado de los par\u00e1metros que nos aporta el sistema isas\u00c2\u00ae de proiser r+d y tambi\u00e9n de forma conjunta mediante el estudio de subpoblaciones esperm\u00e1ticas, para lo cual utilizamos un procedimiento compuesto por un agrupamiento no jer\u00e1rquico inicial mediante el m\u00e9todo de las k-means, para posteriormente aplicar el algoritmo de agrupamiento jer\u00e1rquico aglomerativo de ciampi et al. (2007).   la aproximaci\u00f3n a la relaci\u00f3n existente entre la congelabilidad de los eyaculados y las caracter\u00edsticas que \u00e9stos presentan en cada una de las pruebas realizadas, se ha efectuado analizando la respuesta que a ellas han tenido los eyaculados clasificados en funci\u00f3n de su capacidad de congelaci\u00f3n (buena, media o mala congelabilidad), as\u00ed como por medio de coeficientes de correlaci\u00f3n y an\u00e1lisis de regresi\u00f3n m\u00faltiple.  dentro de la bater\u00eda de pruebas que habitualmente se realizan de forma rutinaria a un eyaculado, la concentraci\u00f3n, la normalidad morfol\u00f3gica de las c\u00e9lulas y la integridad de la membrana plasm\u00e1tica y la de la acros\u00f3mica fueron en este estudio las m\u00e1s relacionadas con la capacidad de criopreservaci\u00f3n, presentando coeficientes de correlaci\u00f3n de hasta r=0,677 en el caso de la concentraci\u00f3n del eyaculado. La utilizaci\u00f3n de este tipo de pruebas de rutina result\u00f3 muy interesante, ya que consigui\u00f3 explicar por medio del an\u00e1lisis de regresi\u00f3n m\u00faltiple un 55,6% de la variabilidad posdescongelado a partir de las tres primeras variables de las cuatro citadas.   en cuanto al estr\u00e9s osm\u00f3tico, la respuesta al ort result\u00f3 m\u00e1s determinante que la del host, tanto por haber conseguido detectar de una forma m\u00e1s eficiente una respuesta estad\u00edsticamente diferente de los grupos de buenos, medios y malos congeladores, como por presentar una mayor relaci\u00f3n con los \u00edndices posdescongelaci\u00f3n calculados, mostrando coeficientes de correlaci\u00f3n con todos ellos en un rango que oscila de r=0,412 a r=0,557. Sin embargo, y a pesar de la importancia de adaptaci\u00f3n de la c\u00e9lula a las variaciones osm\u00f3ticas del proceso de criopreservaci\u00f3n, en la supervivencia esperm\u00e1tica al mismo, no pudimos determinar, a partir de estas pruebas, m\u00e1s de un 21,6% de la variabilidad mostrada por las muestras seminales descongeladas.  por su parte, la termorresistencia no parece ser una prueba recomendable para tratar de estimar la congelabilidad de los eyaculados, puesto que a medida que avanza el tiempo de permanencia a 39 \u00c2\u00bac, se ven disminuidos tanto los coeficientes de correlaci\u00f3n como el porcentaje de variabilidad que es posible explicar por medio de la regresi\u00f3n m\u00faltiple (de un 25,8% en el t1,5 a un 12,6% en el t7). En cambio, el sometimiento de las muestras seminales a un descenso brusco de temperatura experiment\u00f3 el efecto contrario, pues la incubaci\u00f3n a 20 \u00c2\u00bac, aparte de conferir a las muestras una mayor resistencia al choque a frigore, permit\u00eda pasar de resultados no m\u00e1s importantes que los del resto de pruebas a, posiblemente, los m\u00e1s interesantes, tanto respecto al comportamiento de los grupos establecidos en funci\u00f3n de su aptitud frente a la criopreservaci\u00f3n, como en cuanto a los coeficientes de correlaci\u00f3n obtenidos (llegando a valores de r=0,803) o a los resultados recogidos con la regresi\u00f3n m\u00faltiple que, con la inclusi\u00f3n de un \u00fanico par\u00e1metro en los modelos establecidos, se incrementaron de un 29,5% en el s0, a un 58,3% en el s5.   en el segundo experimento se recoge en las muestras descongeladas un incremento con respecto al semen fresco de pr\u00e1cticamente todos los par\u00e1metros cin\u00e9ticos (excepto el wob), caracteriz\u00e1ndose aquellos eyaculados con una mayor capacidad de criopreservaci\u00f3n por velocidades (vcl, vsl y vap) significativamente m\u00e1s elevadas. La capacidad de predicci\u00f3n de la congelabilidad que mostraron los par\u00e1metros cin\u00e9ticos individualizados, tanto en semen fresco como en los diferentes tiempos de incubaci\u00f3n de la termorresistencia no fueron esencialmente superiores a los obtenidos en el primer experimento con esas mismas muestras, si bien destaca la inclusi\u00f3n de la bcf en todos los modelos de regresi\u00f3n establecidos, sugiriendo una posible relevancia de este par\u00e1metro como indicador de la resistencia al proceso de congelaci\u00f3n\/descongelaci\u00f3n. A partir de las caracter\u00edsticas cin\u00e9ticas de las c\u00e9lulas despu\u00e9s de sufrir un choque por fr\u00edo se recogieron coeficientes de correlaci\u00f3n de hasta 0,589, probablemente por la similitud existente entre el da\u00f1o celular provocado por este choque y el ocasionado por la criopreservaci\u00f3n, si bien, al contrario que en el primer experimento, a medida que transcurre la incubaci\u00f3n todos los indicadores analizados en busca de relaciones con la congelabilidad van disminuyendo de forma considerable, pasando de una explicaci\u00f3n m\u00e1xima de la variabilidad posdescongelado del 48,3% en el s1 a un valor m\u00ednimo de 7,9% tras el s5.   la determinaci\u00f3n de subpoblaciones se efectu\u00f3 a partir de los valores de los par\u00e1metros cin\u00e9ticos de las muestras reci\u00e9n recogidas (t0), agrupando a los espermatozoides en tres subpoblaciones (sp1, sp2 y sp3) con caracter\u00edsticas cin\u00e9ticas diferenciadas, de modo que en la sp1 se incluyeron las c\u00e9lulas que presentaban movimientos progresivos y una alta velocidad lineal, en la sp2 las que describ\u00edan trayectorias sinuosas y mostraban una velocidad circular elevada, mientras que la sp3 englobaba espermatozoides con unos par\u00e1metros cin\u00e9ticos degradados. El porcentaje relativo de estas subpoblaciones var\u00eda tanto tras el proceso de criopreservaci\u00f3n, increment\u00e1ndose la sp1 y disminuyendo la sp3, como con la termorresistencia, caracteriz\u00e1ndose por un aumento de la sp1 y una disminuci\u00f3n de las otras dos, aunque la sp3 sufre un incremento considerable en el t7, as\u00ed como tras los choques por fr\u00edo, con los que sufre un incremento espectacular la sp2 y un descenso la sp1 y la sp3. No obstante, a partir de la variaci\u00f3n de estas subpoblaciones no se obtuvo una mejor predicci\u00f3n de la congelabilidad que con los par\u00e1metros cin\u00e9ticos analizados de forma individual, ni en el t0, ni en la termorresistencia, ni mediante los choques por fr\u00edo, con explicaciones m\u00e1ximas de la variabilidad posdescongelado de un 7,8, un 10,3 y un 24,7%, respectivamente, si bien se deduce a partir de las correlaciones calculadas, la importancia de un determinado tipo de movimiento esperm\u00e1tico, fundamentalmente tras el choque por fr\u00edo, como se evidencia en las correlaciones positivas con la congelabilidad de la sp2 y las negativas de la sp1.   atendiendo a la importancia mostrada por el choque a frigore en cuanto a una posible predicci\u00f3n de la congelabilidad de un eyaculado, se desarroll\u00f3 un tercer experimento con el fin de ahondar en algunos aspectos que pueden incidir en la resistencia esperm\u00e1tica al enfriamiento, como el estado de maduraci\u00f3n esperm\u00e1tica, el plasma seminal (ps) y el diluyente comercial empleado en la diluci\u00f3n de las muestras, adem\u00e1s de determinar la influencia sobre la supervivencia esperm\u00e1tica a la criopreservaci\u00f3n del incremento de la resistencia al fr\u00edo generado al aumentar el tiempo de incubaci\u00f3n previo.   para analizar la influencia de la presencia de gotas citoplasm\u00e1ticas como indicadora de inmadurez, se evalu\u00f3 a lo largo de tres horas de incubaci\u00f3n a 20 \u00c2\u00bac la variaci\u00f3n porcentual, con respecto a los valores del eyaculado, que experimentaban los espermatozoides vivos clasificados como morfol\u00f3gicamente normales, los que manten\u00edan una gota citoplasm\u00e1tica distal o proximal en su estructura y los de otras categor\u00edas morfol\u00f3gicas, concluyendo que la presencia de una gota citoplasm\u00e1tica en la estructura de c\u00e9lulas eyaculadas puede ser considerada un indicador de inmadurez, como consecuencia de la menor sensibilidad mostrada por \u00e9stas frente al choque por fr\u00edo, lo cual ser\u00eda indicativo de que no han sufrido los procesos de maduraci\u00f3n epididimaria que incrementan la susceptibilidad al descenso t\u00e9rmico, que tienen lugar en las porciones distales del cuerpo del epid\u00eddimo y, por tanto, tampoco los que acontecen en una zona posterior, con las posibles repercusiones negativas que ello tendr\u00eda sobre la fertilidad.  por otra parte, para analizar la influencia del diluyente comercial empleado as\u00ed como de la presencia del plasma seminal (ps), se dividi\u00f3 la fracci\u00f3n rica de los eyaculados empleados en seis porciones, tres dilu\u00eddas con bts y las otras tres con mr-a, y en cada caso a una de las tres le fue retirado el ps por centrifugaci\u00f3n en un primer momento tras la eyaculaci\u00f3n, a la segunda instantes antes de realizar cada choque y la tercera permaneci\u00f3 en contacto con \u00e9l durante toda la prueba, concluyendo que tanto la composici\u00f3n del diluyente comercial empleado como la presencia del ps en las muestras influyen de forma determinante en la resistencia celular; as\u00ed, la utilizaci\u00f3n de mr-a result\u00f3 mucho m\u00e1s adecuada que la de bts para este fin, posiblemente por el contenido en bsa y ciste\u00edna del primero, y tambi\u00e9n result\u00f3 conveniente la presencia de plasma seminal, pues se obtuvieron mayores porcentajes de integridad de las membranas acros\u00f3mica y plasm\u00e1tica a partir de la hora de incubaci\u00f3n en las muestras que se mantuvieron en contacto con \u00e9l, pero mostrando una tendencia a empeorar si el ps continuaba durante la realizaci\u00f3n de los choques a frigore.  por \u00faltimo, al modificar el protocolo de criopreservaci\u00f3n aumentando el periodo de estabilizaci\u00f3n a 15 \u00c2\u00bac de 3 horas a 6, 12 y 24 horas, se observ\u00f3 un notable incremento en la resistencia de las membranas plasm\u00e1tica y acros\u00f3mica, tanto al choque por fr\u00edo como al proceso completo de congelaci\u00f3n\/descongelaci\u00f3n, a medida que aumentaban las horas de permanencia a la citada temperatura, si bien no ser\u00eda positivo llegar hasta las 24 horas, a tenor del marcado descenso en la movilidad esperm\u00e1tica observado en este punto, tanto tras el choque y tras la criopreservaci\u00f3n, as\u00ed como por el manifiesto descenso en la calidad de las muestras seminales por el mero hecho de mantenerlas en refrigeraci\u00f3n durante tanto tiempo.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Valoraci\u00f3n de la capacidad de criopreservaci\u00f3n esperm\u00e1tica del semen porcino mediante t\u00e9cnicas de choque a frigore y termorresistencia.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Valoraci\u00f3n de la capacidad de criopreservaci\u00f3n esperm\u00e1tica del semen porcino mediante t\u00e9cnicas de choque a frigore y termorresistencia. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Ra\u00fal Gonz\u00e1lez Urdiales <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Le\u00f3n<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 28\/05\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jes\u00fas Pel\u00e1ez  Garc\u00eda De La Puerta<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: f\u00e9lix P\u00e9rez p\u00e9rez <\/li>\n<li>Manuel Castej\u00f3n limas (vocal)<\/li>\n<li>carles Soler vazquez (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 felix P\u00e9rez  guti\u00e9rrez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Ra\u00fal Gonz\u00e1lez Urdiales La utilizaci\u00f3n de semen porcino criopreservado para la inseminaci\u00f3n artificial comercial podr\u00eda reportar numerosas 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