{"id":101461,"date":"2010-09-06T00:00:00","date_gmt":"2010-09-06T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/complejos-proteicos-de-membrana-externa-de-neisseria-meningitidis-analisis-estructural-y-capacidad-antigenica\/"},"modified":"2010-09-06T00:00:00","modified_gmt":"2010-09-06T00:00:00","slug":"complejos-proteicos-de-membrana-externa-de-neisseria-meningitidis-analisis-estructural-y-capacidad-antigenica","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/santiago-de-compostela\/complejos-proteicos-de-membrana-externa-de-neisseria-meningitidis-analisis-estructural-y-capacidad-antigenica\/","title":{"rendered":"Complejos proteicos de membrana externa de neisseria meningitidis: an\u00e1lisis estructural y capacidad antig\u00e9nica."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Juan Marzoa Fandi\u00f1o <\/strong><\/h2>\n<p>La infecci\u00f3n meningoc\u00f3cica es importante problema de salud mundial, que causa muertes al a\u00f1o e importantes secuelas. De los principales serogrupos (a, b, c, y y w135) causantes de la enfermedad, el serogrupo b es el \u00fanico que no dispone de una vacuna eficaz. Las vacunas contra los serogrupos a, y y w135 est\u00e1n constituidas por polisac\u00e1ridos capsulares de estos serogrupos, y a\u00fan siendo efectivas, muestran algunos problemas como la escasa protecci\u00f3n en ni\u00f1os, principal grupo de riesgo. La conjugaci\u00f3n del polisac\u00e1rido capsular contra el serogrupo c a una prote\u00edna transportadora ha supuesto un importante avance en la protecci\u00f3n contra este serogrupo consiguiendo una buena protecci\u00f3n en todos los grupos de edad. Sin embargo, la baja inmunogenicidad del polisac\u00e1rido capsular del serogrupo b y la gran variabilidad antig\u00e9nica que presentan los ant\u00edgenos inmunodominantes subcapsulares han limitado la eficacia de las formulaciones probadas contra este serogrupo a la cepa hom\u00f3loga con la que han sido elaboradas.  a causa de estos problemas, en los \u00faltimos a\u00f1os se han desarrollado estrategias alternativas. Los principales candidatos obtenidos son prote\u00ednas o lipooligosac\u00e1ridos de membrana externa, aunque los dise\u00f1os ensayados, basados en prote\u00ednas purificadas, prote\u00ednas recombinantes sintetizadas a partir de secuencias gen\u00e9ticas o ves\u00edculas e membrana externa (omvs) no han sido suficientemente efectivos o lo han sido contra cepas espec\u00edficas. nuestra hip\u00f3tesis es que muchos de los epitopos importantes para la adquisici\u00f3n de la inmunidad natural que presenta la mayor\u00eda de la poblaci\u00f3n adulta podr\u00edan ser de naturaleza conformacional y estar situados en complejos proteicos de membrana externa de los meningococos, no contemplados en muchos de los an\u00e1lisis en profundidad que actualmente se llevan a cabo. por lo tanto, como objetivos planteados en este trabajo son el estudio del complexoma de membrana externa de n. Meningitidis, la caracterizaci\u00f3n de los complejos proteicos m\u00e1s relevantes y el an\u00e1lisis de sus caracter\u00edsticas antig\u00e9nicas para finalmente se evaluar el inter\u00e9s de los complejos proteicos estudiados como ant\u00edgenos vacunales frente al meningococo. para al an\u00e1lisis del complexoma de la membrana externa de los meningococos hemos utilizado una novedosa t\u00e9cnica especialmente dise\u00f1ada para este tipo de estudios denominada high resolution clear native electrophoresis (hrcne), as\u00ed como las electroforesis bidimensionales nativa (2-d hrcne\/hrcne) y desnaturalizante (2-d hrcne\/sds-page), caracterizando la composici\u00f3n de los complejos proteicos por espectrometr\u00eda de masas. Posteriormente, tras conocer los principales complejos proteicos, se purificaron desde el gel por eluci\u00f3n pasiva para obtener en ratones sueros inmunes anti-complejos, as\u00ed como sueros inmunes anti-ves\u00edculas de membrana externa salvajes y mutantes, para analizar la funcionalidad de los anticuerpos generados. Los ensayos realizados con este fin fueron los ensayos de actividad bactericida del suero, de uni\u00f3n de anticuerpos a la superficie bacteriana, de deposici\u00f3n del componente del complemento c3b, de deposici\u00f3n del componente del complejo de ataque a membrana, y de actividad opsonofagoc\u00edtica del suero, estos cuatro \u00faltimos medidos por citometr\u00eda de flujo. el an\u00e1lisis prote\u00f3mico revel\u00f3 la idoneidad de las t\u00e9cnicas empleadas para el estudio del complexoma de la membrana externa de n. Meningitidis, superando a otras previamente utilizadas en nuestro laboratorio, como la blue native electrophoresis, y permiti\u00f3 detectar la presencia de 12 complejos proteicos mayoritarios. Tres de estos complejos son asociaciones homom\u00e9ricas de las prote\u00ednas chaperonina de 60 kda, glutamina sintetasa y cetol-\u00e1cido reductoisomerasa, y nueve son complejos de porinas, correspondientes a hom\u00f3meros de la porina porb y tres tipos de asociaciones heterom\u00e9ricas de las porinas pora y porb, y las prote\u00edna rmpm: pora\/porb, porb\/rmpm y pora\/porb\/rmpm. En menor proporci\u00f3n tambi\u00e9n se detectaron hom\u00f3meros de pora y complejos de alto peso molecular formados por pora\/porb\/rmpm\/mip. La existencia de esta gran diversidad de complejos proteicos de porinas sugiere, bien la presencia simult\u00e1nea en la membrana externa de complejos con igual composici\u00f3n proteica pero con diferente estequiometr\u00eda, o bien la participaci\u00f3n de otras prote\u00ednas en dichos complejos. La utilizaci\u00f3n de cepas mutantes nos permiti\u00f3 tambi\u00e9n confirmar el papel crucial de la porb en el mantenimiento de la integridad de los complejos de porinas. del total de complejos detectados se obtuvieron cinco sueros anti-complejos: el suero anti-cxchap, obtenido tras la inmunizaci\u00f3n con el complejo de la chaperonina de 60 kda, y los sueros anti-cxabr, anti-cxbr y anti-cxab, anti-cxb, obtenidos tras la inmunizaci\u00f3n con los complejos formados por pora\/porb\/rmpm, porb\/rmpm y pora\/porb  y porb respectivamente. Del mismo modo se obtuvieron sueros inmunes contra omvs salvajes y defectivas en las prote\u00ednas pora, porb, rmpm o feta.  todos los complejos purificados son accesibles en superficie e inducen respuestas que promueven la deposici\u00f3n del componente del complemento c3b, la formaci\u00f3n del complejo de ataque a membrana y la actividad bactericida. La escasa reactividad cruzada de los sueros anti-complejos de porinas reduce su inter\u00e9s vacunal a la protecci\u00f3n frente la cepa hom\u00f3loga. la alta reactividad cruzada del suero anti-cxchap en los ensayos de uni\u00f3n de anticuerpos a superficie, deposici\u00f3n de c3b, deposici\u00f3n de mac y actividad opsonofagoc\u00edtica sugiere que las prote\u00ednas chaperonina de 60 kda y mip pueden ser ant\u00edgenos con gran inter\u00e9s como componentes vacunales.  la eliminaci\u00f3n de la pora (inmunodominante y variable) en las omvs, as\u00ed como de las prote\u00ednas porb, rmpm o feta, permite mantener una excelente uni\u00f3n de anticuerpos a superficie, deposici\u00f3n de complemento y actividad opsonofagoc\u00edtica incluso contra las cepas heter\u00f3logas. Solamente la ausencia de anticuerpos contra la pora produce la perdida de la actividad bactericida del suero anti-omvs.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Complejos proteicos de membrana externa de neisseria meningitidis: an\u00e1lisis estructural y capacidad antig\u00e9nica.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Complejos proteicos de membrana externa de neisseria meningitidis: an\u00e1lisis estructural y capacidad antig\u00e9nica. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Juan Marzoa Fandi\u00f1o <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Santiago de compostela<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 09\/06\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>M. Sandra S\u00e1nchez Poza<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Mar\u00eda isabel Bern\u00e1rdez hermida <\/li>\n<li>cristina Madrid xufr\u00e9 (vocal)<\/li>\n<li>felix Elortza basterrika (vocal)<\/li>\n<li>Carlos Mart\u00edn monta\u00f1\u00e9s (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Juan Marzoa Fandi\u00f1o La infecci\u00f3n meningoc\u00f3cica es importante problema de salud mundial, que causa muertes al a\u00f1o [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[38249,36606,977,2714],"tags":[7141,117692,144624,206202,56521,206203],"class_list":["post-101461","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-bacterias","category-biologia-molecular-de-microorganismos","category-santiago-de-compostela","category-vacunas","tag-carlos-martin-montanes","tag-cristina-madrid-xufre","tag-felix-elortza-basterrika","tag-juan-marzoa-fandino","tag-m-sandra-sanchez-poza","tag-maria-isabel-bernardez-hermida"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/101461","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=101461"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/101461\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=101461"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=101461"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=101461"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}