{"id":101791,"date":"2018-03-11T10:23:42","date_gmt":"2018-03-11T10:23:42","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/analisis-bioqua%c2%admico-y-bioinformatico-aplicado-a-la-protea%c2%adna-itih4-en-patologa%c2%ada-del-s-n-c-y-leucemias-resistentes-a-la-apoptosis\/"},"modified":"2018-03-11T10:23:42","modified_gmt":"2018-03-11T10:23:42","slug":"analisis-bioqua%c2%admico-y-bioinformatico-aplicado-a-la-protea%c2%adna-itih4-en-patologa%c2%ada-del-s-n-c-y-leucemias-resistentes-a-la-apoptosis","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica\/analisis-bioqua%c2%admico-y-bioinformatico-aplicado-a-la-protea%c2%adna-itih4-en-patologa%c2%ada-del-s-n-c-y-leucemias-resistentes-a-la-apoptosis\/","title":{"rendered":"An\u00e1lisis bioqu\u00edmico y bioinform\u00e1tico aplicado a la prote\u00edna itih4 en patolog\u00eda del s.n.c. y  leucemias resistentes a la apoptosis"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Alvaro Sebasti\u00e1n Yague <\/strong><\/h2>\n<p>En nuestro laboratorio se identific\u00f3 una nueva prote\u00edna de fase aguda en el cerdo, la major acute-phase protein, pig-map, a finales de los 90 y desde entonces se viene trabajando para elucidar su funci\u00f3n. Esta prote\u00edna forma parte de una familia de inhibidores de proteasas caracter\u00edstica del suero sangu\u00edneo humano. Por consenso, se la ha nombrado como la nueva cadena pesada h4 de la familia iti (itih4). En el contexto de dos acciones concertadas y un proyecto europeo, nuestro laboratorio ha estudiado la respuesta de itih4 y otras prote\u00ednas de fase aguda (pfa) como haptoglobina, prote\u00edna c-reactiva, apo a-1, en modelos animales (porcino y bovino) y en situaciones fisio-patol\u00f3gicas (infecciones v\u00edricas y bacterianas, estr\u00e9s, entre otras). Tanto la regulaci\u00f3n de la expresi\u00f3n de la itih4 como de la haptoglobina, depende de  la il-6 en el h\u00edgado, lugar donde se sintetizan. la respuesta a la agresi\u00f3n (infecci\u00f3n, inflamaci\u00f3n&#8230;) De las pfa var\u00eda seg\u00fan la especie. Por ejemplo, la itih4 muestra cambios significativos en porcino y moderados en bovino. En la especie humana, su concentraci\u00f3n s\u00e9rica en pacientes con infarto agudo de miocardio, s\u00f3lo aumenta 2 veces su concentraci\u00f3n. esta prote\u00edna tambi\u00e9n muestra grandes variaciones en cuanto a estabilidad dependiendo de la especie, siendo la m\u00e1s estable la prote\u00edna de origen porcino. En el caso de la prote\u00edna humana se ha descrito la generaci\u00f3n de fragmentos derivados de itih4 por acci\u00f3n de calicre\u00ednas in vitro. En el suero de pacientes con diferentes tipos y estadios de c\u00e1ncer, se han detectado p\u00e9ptidos derivados de itih4 generados por la acci\u00f3n de proteasas tumorales. Adem\u00e1s, resultados recientes de este laboratorio, presentados en la tesis doctoral de la dra. Idoia alonso (diciembre 2009), confirman esta proteolisis asociada a fenotipo tumoral in vitro, en c\u00e9lulas de mcf-7 y jurkat. por otra parte, otra de las l\u00edneas de investigaci\u00f3n de nuestro grupo de trabajo es la caracterizaci\u00f3n de las subl\u00edneas leuc\u00e9micas de fenotipo altamente proliferativo y resistentes a apoptosis (jhp y jws) que se generaron en  nuestro laboratorio a partir de las c\u00e9lulas de la leucemia humana tipo t jurkat en el a\u00f1o 1996 (Martinez-lorenzo 1996). Desde entonces han sido utilizadas para estudiar diferentes mecanismos de apoptosis inducidos por drogas. con estos antecedentes, en el presente trabajo, se han abordado dos l\u00edneas generales de actuaci\u00f3n que han discurrido de manera interrumpida en el tiempo de la investigaci\u00f3n: i. Por un lado, el estudio de la prote\u00edna de fase aguda itih4 en sueros normales y procedentes de patolog\u00edas del snc (hcums, zaragoza), para lo cual ha sido necesario la purificaci\u00f3n de la prote\u00edna y de reactivos espec\u00edficos (antisueros y anticuerpos) para poder conocer la concentraci\u00f3n de itih4 en suero por an\u00e1lisis inmunoqu\u00edmicos; as\u00ed como el estudio molecular para la obtenci\u00f3n de las construcciones (vector ptarget-itih4) encaminadas a la transfecci\u00f3n posterior de l\u00edneas celulares tumorales en cultivo (cos, hek293t, entre otras) y poder obtener  prote\u00edna en cantidades suficientes para  abordar en un futuro estudios estructurales (se han realizado pruebas preliminares de cristalizaci\u00f3n de la prote\u00edna) as\u00ed como la obtenci\u00f3n de las jurkat parentales y de las subl\u00edneas derivadas transfectadas con itih4 de forma permanente (o de momento, de forma transitoria)  para abordar los estudios de apoptosis, y finalmente, se ha realizado un an\u00e1lisis bioinform\u00e1tico de uno de sus dominios (von willebrand) en relaci\u00f3n con su posible interacci\u00f3n con prote\u00ednas del complemento. ii. Para la caracterizaci\u00f3n de las subl\u00edneas hiperproliferativas, se ha generado una herramienta inform\u00e1tica leucochip v2.0, que organiza el an\u00e1lisis de la expresi\u00f3n g\u00e9nica diferencial obtenida en base a un array comparativo con las jurkat parentales y adem\u00e1s, se ha realizado el an\u00e1lisis bioqu\u00edmico de la bionerg\u00e9tica y, de su relaci\u00f3n con la apoptosis de estas subl\u00edneas en relaci\u00f3n con las parentales. en el apartado siguiente de conclusiones, se recogen las principales aportaciones obtenidas en ambas l\u00edneas de actuaci\u00f3n. Como en todo trabajo por investigaci\u00f3n, es mucho el camino que se recorre, pero lo es m\u00e1s el que queda por recorrer. Por esta raz\u00f3n, a continuaci\u00f3n, se hace referencia a las l\u00edneas de trabajo futuras que se han delineado en parte, en el apartado anterior, que servir\u00edan para la continuaci\u00f3n de esta tesis doctoral y que tendr\u00edan como objetivo principal el estudio de la interacci\u00f3n de itih4 y otras pfa con c\u00e9lulas tumorales en cultivo. para ello, se utilizar\u00e1n diversas aproximaciones experimentales. Dado que se dispone de la experiencia previa en el estudio de la apoptosis y su relaci\u00f3n con la bioenerg\u00e9tica en las c\u00e9lulas jurkat, jhp y jws, y en el presente trabajo se han fijado las condiciones para realizar transfecciones transitorias con la prote\u00edna, se realizar\u00e1n dichas transfecciones y se estudiar\u00e1 c\u00f3mo afecta la sobreexpresi\u00f3n de  la itih4 a los mecanismos de apoptosis en estas c\u00e9lulas. Estas l\u00edneas celulares se han elegido por su capacidad de producir proteasas funcionales, susceptibles de degradar la itih4 y posiblemente otras pfa. De este modo, se pretende tambi\u00e9n analizar el posible papel de los fragmentos de las prote\u00ednas en la regulaci\u00f3n de la apoptosis y sobre la bioenerg\u00e9tica celular.  a pesar de los estudios que se han realizado por nuestro grupo y por otros, de momento, poco se sabe acerca de su funci\u00f3n de esta prote\u00edna. Se ha descrito que la itih4 puede producir inhibiciones en la acci\u00f3n de c\u00e9lulas inflamatorias y puede tener un papel relevante durante la regeneraci\u00f3n de c\u00e9lulas hep\u00e1ticas. Adem\u00e1s, en un trabajo realizado en colaboraci\u00f3n con la dra. Sylvie blond (center for pharmacelutical biotechnoly, university of illinois at chicago, usa) se describe la existencia de interacciones estables de la itih4 con una chaperona, la htj1, prote\u00edna del ret\u00edculo plasm\u00e1tico, h\u00f3mologa a la humana, mtj1\/erdj1. Esta uni\u00f3n podr\u00eda proteger a la itih4 de la acci\u00f3n de proteasas como la calicre\u00edna.  por otra parte, el estudio del gen de la itih4 revela la existencia en la prote\u00edna de tres dominios: i) un dominio vit en el extremo n-terminal, que se encuentra en las ribonucleoprote\u00ednas de los complejos vault que est\u00e1n implicados en translocaciones entre el n\u00facleo y el citoplasma y se sobrexpresa en tumores resisitentes a tratamiento con f\u00e1rmacos, ii) un dominio central von willebrand de tipo a, presente en prote\u00ednas relacionadas con la adhesi\u00f3n celular como son los receptores de integrinas, en factores del complemento y en inhibidores de proteasas y, iii) un tercer dominio correspondiente a la cadena pesada de la familia de las iti en el extremo c-terminal.  Si consideramos que, en conjunto \u00f3 alguno de estos dominios estructurales, la localizaci\u00f3n celular de la itih4 y la interacci\u00f3n de la prote\u00edna con otros factores prote\u00edcos, pueden estar relacionados con la funci\u00f3n de esta prote\u00edna, se abordar\u00e1n diferentes estrategias experimentales para su estudio. Estas estrategias consistir\u00e1n principalmente en  transfecciones celulares con construcciones de la prote\u00edna, adici\u00f3n de la prote\u00edna entera o fragmentos de ella, inmunoprecipitaciones, y estudios de apoptosis celular, entre otras.  los resultados que se obtengan permitir\u00e1n avanzar en la comprensi\u00f3n de los mecanismos biol\u00f3gicos en los que participa la prote\u00edna itih4 en c\u00e9lulas neopl\u00e1sicas en comparaci\u00f3n con c\u00e9lulas normales o de baja malignidad.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>An\u00e1lisis bioqu\u00edmico y bioinform\u00e1tico aplicado a la prote\u00edna itih4 en patolog\u00eda del s.n.c. y  leucemias resistentes a la apoptosis<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 An\u00e1lisis bioqu\u00edmico y bioinform\u00e1tico aplicado a la prote\u00edna itih4 en patolog\u00eda del s.n.c. y  leucemias resistentes a la apoptosis <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Alvaro Sebasti\u00e1n Yague <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Zaragoza<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 18\/06\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Mar\u00eda Iturralde Navarro<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: javier Naval iraberri <\/li>\n<li>Jos\u00e9 ramon Ara callizo (vocal)<\/li>\n<li>bruno Contreras moreira (vocal)<\/li>\n<li>M\u00aa Jos\u00e9 Mart\u00ednez lorenzo (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Alvaro Sebasti\u00e1n Yague En nuestro laboratorio se identific\u00f3 una nueva prote\u00edna de fase aguda en el cerdo, 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