{"id":101978,"date":"2018-03-11T10:23:57","date_gmt":"2018-03-11T10:23:57","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/variaciones-de-la-secuencia-del-gen-cyp1b1-en-glaucoma-primario-de-angulo-abierto-mecanismos-geneticos-de-patogenicidad-y-relacion-genotipo-fenotipo\/"},"modified":"2018-03-11T10:23:57","modified_gmt":"2018-03-11T10:23:57","slug":"variaciones-de-la-secuencia-del-gen-cyp1b1-en-glaucoma-primario-de-angulo-abierto-mecanismos-geneticos-de-patogenicidad-y-relacion-genotipo-fenotipo","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/oftalmologia\/variaciones-de-la-secuencia-del-gen-cyp1b1-en-glaucoma-primario-de-angulo-abierto-mecanismos-geneticos-de-patogenicidad-y-relacion-genotipo-fenotipo\/","title":{"rendered":"Variaciones de la secuencia del gen cyp1b1 en glaucoma primario de angulo abierto: mecanismos geneticos de patogenicidad y relaci\u00f3n genotipo-fenotipo"},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de Mar\u00eda Pilar Lopez Garrido <\/strong><\/h2>\n

El glaucoma es una neuropat\u00eda \u00f3ptica que produce una p\u00e9rdida progresiva e irreversible de visi\u00f3n como consecuencia de la apoptosis de las c\u00e9lulas ganglionares de la retina. Constituye la principal causa de ceguera en los pa\u00edses desarrollados. El factor de riesgo m\u00e1s importante es la presi\u00f3n intraocular (pio) elevada. Existen muchos tipos de glaucoma, el glaucoma primario de \u00e1ngulo abierto (gpaa) es el m\u00e1s frecuente de todos y cl\u00ednicamente se caracteriza por un \u00e1ngulo iridocorneal normal, alteraci\u00f3n de la papila \u00f3ptica y comienzo en edad adulta (>40 a\u00f1os). Desde el punto de vista gen\u00e9tico, el gpaa es una enfermedad de herencia compleja. actualmente se conocen 4 genes asociados al desarrollo de gpaa: miocilina (myoc), gen de la prote\u00edna con 36 repeticiones wd (wdr36), optineurina (optn) y neurotrofina-4 (ntf-4). Los 3 primeros genes fueron inicialmente identificados en casos mendelianos de glaucoma, mientras que el gen ntf-4 fue identificado en casos espor\u00e1dicos de gpaa. En conjunto, estos 4 genes desempe\u00f1an un papel en el 5-12% de los casos no mendelianos de gpaa. Por tanto, los factores gen\u00e9ticos implicados en esta enfermedad permanecen desconocidos en la mayor parte de los casos. el gen citocromo p450 1b1 (cyp1b1) est\u00e1 localizado en el cromosoma 2p22.2, consta de 3 exones pero s\u00f3lo el segundo y el tercero son codificantes, dando lugar a una enzima de la superfamilia de los citocromos p450. Se desconoce la funci\u00f3n de esta enzima en el ojo pero se ha propuesto que podr\u00eda metabolizar un compuesto que regula el desarrollo del \u00e1ngulo iridocorneal. Las mutaciones del gen cyp1b1 causan glaucoma cong\u00e9nito primario (gcp), una forma grave de la enfermedad de herencia autos\u00f3mica recesiva y que se manifiesta a edades muy tempranas (desde el nacimiento hasta los 3 a\u00f1os de edad). Se han descrito casos familiares en los que coexisten gcp y gpaa. Por estas razones se estim\u00f3 que cyp1b1 podr\u00eda ser un gen candidato en glaucoma adulto. Los objetivos principales de este trabajo fueron: a) determinar la asociaci\u00f3n del gen cyp1b1 con gpaa, b) estudiar el efecto funcional de las mutaciones identificadas analizando la actividad enzim\u00e1tica y estabilidad de la prote\u00edna cyp1b1 y c) analizar la relaci\u00f3n genotipofenotipo en los pacientes portadores de mutaciones. Puesto que la pio elevada es el principal factor de riesgo en gpaa, tambi\u00e9n se estudi\u00f3 la asociaci\u00f3n del gen cyp1b1 con hipertensi\u00f3n ocular (hto). la b\u00fasqueda y detecci\u00f3n de variaciones de la secuencia de cyp1b1 se realiz\u00f3 mediante pcr y secuenciaci\u00f3n autom\u00e1tica de adn siguiendo un dise\u00f1o de casos-controles. Se analizaron un total de 246 pacientes con gpaa, 41 pacientes con hto y 326 individuos control, todos ellos procedentes de las consultas de oftalmolog\u00eda del complejo hospitalario de albacete, hospital arnau de vilanova de Valencia y hospital virgen de los lirios de alcoy (alicante). Para el an\u00e1lisis funcional de las variaciones de secuencia, se clonaron las mutaciones y polimorfismos encontrados en los pacientes, se expresaron transitoriamente en c\u00e9lulas humanas de ri\u00f1\u00f3n embrionario (hek- 293t) en cultivo y se analiz\u00f3 la actividad enzim\u00e1tica y la estabilidad de las prote\u00ednas recombinantes. se identificaron 10 mutaciones (s28w, g61e, y81n, q144h, r145w, g168d, e229k, l240q, v409f y a443g) en 18 pacientes (7,31%) con gpaa, 3 mutaciones (a189p, a330s y a443g) en 3 pacientes (7,31%) diagnosticados de hto y 3 mutaciones (p52l, e229k y r368h) en 6 individuos control (1,84%). Tambi\u00e9n se detect\u00f3 la mutaci\u00f3n y81n en 2 sujetos clasificados como sospechosos de gpaa dadas sus caracter\u00edsticas cl\u00ednicas. Todas las mutaciones estuvieron presentes en heterocigosis y 8 de ellas (s28w, q144h, r145w, g168d, a189p, l240q, a330s y v409f) han sido encontradas por primera vez en este estudio. Las 6 restantes (p52l, g61e, y81n, e229k, r368h y a443g) hab\u00edan sido descritas con anterioridad en pacientes con gcp y\/o gpaa. la frecuencia de portadores heterocigotos en gpaa fue significativamente mayor que en controles (p=0,002; or=4,2; intervalo de confianza=1,55-12,06). La frecuencia de mutaciones de los pacientes con hto no mostr\u00f3 diferencias significativas frente al grupo control (p=0,135; or=4,2; intervalo de confianza=0,65- 20,56). Estos datos muestran que las mutaciones en heterocigosis en el gen cyp1b1 est\u00e1n asociadas a gpaa. todas las mutaciones identificadas excepto q144h, predicen cambios no conservadores de amino\u00e1cidos y afectan a regiones evolutivamente conservadas de la prote\u00edna. Adem\u00e1s, todas las mutaciones excepto p52l, y81n, e229k y r368h, han sido encontradas exclusivamente en pacientes con gpaa o hto. Por otra parte, el estudio funcional revel\u00f3 una disminuci\u00f3n de la actividad enzim\u00e1tica de la mayor\u00eda de las prote\u00ednas cyp1b1 mutantes con respecto a la forma silvestre. El ensayo de estabilidad indic\u00f3 que todas las mutaciones son menos estables que la prote\u00edna silvestre. En conjunto, todos estos datos muestran que las mutaciones identificadas son alelos hipomorfos y apoyan su patogenicidad. se detectaron tambi\u00e9n 6 polimorfismos de un solo nucle\u00f3tido (snp) en el gen cyp1b1 (ivs1-13c>t, p.R48g, p.A119s, p.L432v, p.D449d y p.N453s). Se encontraron dos bloques de desequilibrio de ligamiento, uno de ellos formado por los snps ivs1-13c>t, r48g y a119s, y el otro por l432v y d449d. Se seleccionaron 2 tagsnps (a119s, l432v) y el polimorfismo n453s, y se infirieron los haplotipos para cada individuo mediante el programa powermarker. El estudio de asociaci\u00f3n no mostr\u00f3 diferencias significativas en las frecuencias de los diferentes snps ni de los haplotipos analizados entre casos y controles. Sin embargo, 5 haplotipos (raln, rals, gsvn, gsln, gsls) presentaron una disminuci\u00f3n en la actividad enzim\u00e1tica y estabilidad de cyp1b1 con respecto al haplotipo silvestre (ravn). puesto que todas las mutaciones fueron detectadas en heterocigosis, se realizaron coexpresiones transitorias con las formas mutantes y los haplotipos, simulando un modelo celular de expresi\u00f3n en heterocigosis. El an\u00e1lisis de actividad enzim\u00e1tica mostr\u00f3 que la actividad total de cyp1b1 se ajusta a un modelo aditivo en el que ambos alelos (mutante y silvestre) podr\u00edan influir en el fenotipo del sujeto. adem\u00e1s, los resultados indican que, al menos in vitro, el haplotipo del alelo silvestre contribuye de manera significativa a la variaci\u00f3n de la actividad enzim\u00e1tica total. Por otra parte, podr\u00eda existir un rango de actividad enzim\u00e1tica de cyp1b1 (comprendido aproximadamente entre el 35% y 75%) que se asocia con gpaa. en conclusi\u00f3n, los resultados obtenidos muestran que los alelos hipomorfos del gen cyp1b1 est\u00e1n asociados a glaucoma primario de \u00e1ngulo abierto y constituyen el principal factor de riesgo gen\u00e9tico conocido en el desarrollo de gpaa. es el primer estudio de este gen realizado con pacientes espa\u00f1oles afectados de gpaa y uno de los primeros a nivel mundial. los datos obtenidos tambi\u00e9n permiten proponer un mecanismo molecular de la enfermedad en los pacientes glaucomatosos con mutaciones hipomorfas del gen cyp1b1. Estas mutaciones podr\u00edan alterar de manera sutil la morfog\u00e9nesis ocular, especialmente la red trabecular, conduciendo con el paso del tiempo a un aumento progresivo de la presi\u00f3n intraocular y finalmente al desarrollo de glaucoma. Adem\u00e1s, dada la variabilidad fenot\u00edpica de los pacientes con mutaciones en cyp1b1, se sugiere la existencia de genes modificadores que podr\u00edan influir en el fenotipo. finalmente, los resultados indican que el gpaa es una enfermedad debida a variantes raras que se ajusta al modelo enfermedad com\u00fan, variante rara propuesto para explicar el desarrollo de enfermedades complejas.<\/p>\n

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Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abVariaciones de la secuencia del gen cyp1b1 en glaucoma primario de angulo abierto: mecanismos geneticos de patogenicidad y relaci\u00f3n genotipo-fenotipo<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
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  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Variaciones de la secuencia del gen cyp1b1 en glaucoma primario de angulo abierto: mecanismos geneticos de patogenicidad y relaci\u00f3n genotipo-fenotipo <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 Mar\u00eda Pilar Lopez Garrido <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 Castilla-la mancha<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 23\/06\/2010<\/li>\n<\/ul>\n

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    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
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    • Director de la tesis<\/strong>\n
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      • Julio Escribano Martinez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
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        • Presidente del tribunal: Jos\u00e9 Antonio Fernandez perez <\/li>\n
        • carmen Espin\u00f3s armero (vocal)<\/li>\n
        • concepcion Romero Martinez (vocal)<\/li>\n
        • daniel Grinberg vaisman (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

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