{"id":102091,"date":"2018-03-11T10:24:06","date_gmt":"2018-03-11T10:24:06","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/inmunomodulacion-de-la-infeccion-de-plum-pox-virus-mediante-la-expresion-estable-y-transitoria-de-anticuerpos-recombinantes-contra-la-nib-replicasa-viral-en-plantas-de-nicotiana-benthamiana\/"},"modified":"2018-03-11T10:24:06","modified_gmt":"2018-03-11T10:24:06","slug":"inmunomodulacion-de-la-infeccion-de-plum-pox-virus-mediante-la-expresion-estable-y-transitoria-de-anticuerpos-recombinantes-contra-la-nib-replicasa-viral-en-plantas-de-nicotiana-benthamiana","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/politecnica-de-valencia\/inmunomodulacion-de-la-infeccion-de-plum-pox-virus-mediante-la-expresion-estable-y-transitoria-de-anticuerpos-recombinantes-contra-la-nib-replicasa-viral-en-plantas-de-nicotiana-benthamiana\/","title":{"rendered":"Inmunomodulaci\u00f3n de la infecci\u00f3n de plum pox virus mediante la expresi\u00f3n estable y transitoria de anticuerpos recombinantes contra la nib replicasa viral en plantas de nicotiana benthamiana"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> M\u00c2\u00ba Teresa Gil Capit\u00e1n <\/strong><\/h2>\n<p>Resumen plum pox virus (ppv) es miembro del g\u00e9nero potyvirus, causa la enfermedad de la sharka que tiene un serio impacto agr\u00edcola y econ\u00f3mico sobre el cultivo de frutales de hueso. La utilizaci\u00f3n de variedades resistentes es la estrategia m\u00e1s duradera y definitiva en la lucha contra virosis de plantas. Por ello, se realiza un intenso esfuerzo en la b\u00fasqueda y obtenci\u00f3n de cultivares resistentes o agron\u00f3micamente tolerantes frente a infecci\u00f3n, ya sea por t\u00e9cnicas cl\u00e1sicas o m\u00e9todos biotecnol\u00f3gicos. en este contexto el objetivo general de esta tesis doctoral ser\u00eda evaluar si la expresi\u00f3n de anticuerpos recombinantes espec\u00edficos de prote\u00ednas de ppv en plantas nicotiana benthamiana puede interferir o inmunomodular la infecci\u00f3n viral y servir as\u00ed como una estrategia para obtener resistencia. en este trabajo se ha utilizado el fragmento de anticuerpo recombinante scfv2a que consiste en las regiones variables de la cadena ligera y pesada del anticuerpo mab 2a-ivia clonadas de forma secuencial y unidas por un p\u00e9ptido de uni\u00f3n o linker de forma que sean expresadas como una sola cadena proteica o scfv (del ingl\u00e9s single chain fv variable fragment). Los dos anticuerpos reconocen a la prote\u00edna nib replicasa de ppv que tiene actividad rna-polimerasa rna-dependiente (rdrp). La nib se localiza principalmente en el n\u00facleo de c\u00e9lulas de plantas infectadas, aunque su funci\u00f3n de replicaci\u00f3n, presumiblemente, tiene lugar en estructuras membranosas derivadas del ret\u00edculo endopl\u00e1smico (re) en el citoplasma.  se transformaron plantas de nicotiana benthamiana con tres versiones del fragmento recombinante scfv2a dirigidas a diferentes compartimentos celulares. Una versi\u00f3n citos\u00f3lica (scfv2a), una versi\u00f3n nuclear (nlsscfv2a) y otra dirigida a membranas del re (6k2scfv2a) por la cara citos\u00f3lica. Se obtuvieron diversas l\u00edneas transg\u00e9nicas: l\u00edneas a, l\u00edneas n y l\u00edneas k transformadas respectivamente con las construcciones scfv2a, nlsscfv2a y 6k2scfv2a. Para evaluar el nivel de resistencia de las diferentes l\u00edneas transg\u00e9nicas, se realizaron ensayos indepedientes de desaf\u00edo, mediante inoculaci\u00f3n mec\u00e1nica con extractos de plantas infectadas con virus o bien inoculando con un clon recombinante de ppv fusionado a gfp (ppv-gfp). Se pudo comprobar que las plantas de las diversas l\u00edneas transg\u00e9nicas de n. Benthamiana que expresaban los fragmentos scfv2a, 6k2scfv2a o nlsscfv2a presentaban diferentes grados de protecci\u00f3n frente a la infecci\u00f3n por ppv. En algunas de las plantas se observ\u00f3 una protecci\u00f3n parcial, manifiesta por un retraso en la aparici\u00f3n de s\u00edntomas o por una menor acumulaci\u00f3n viral. En otras se ha observado el bloqueo total de la infecci\u00f3n, ya que no han presentado s\u00edntomas ni acumulaci\u00f3n viral a lo largo del tiempo que duraron los ensayos de desaf\u00edo. Adem\u00e1s, se determin\u00f3 que varias de las l\u00edneas transg\u00e9nicas, tanto l\u00edneas a como k y n, presentaban porcentajes de infecci\u00f3n significativamente menores comparados con los de los controles. El grado de protecci\u00f3n dependi\u00f3 de la dosis de in\u00f3culo utilizada y del m\u00e9tod de inoculaci\u00f3n utilizado. Por tanto, puede afirmar que la expresi\u00f3n en plantas de las diferentes versiones del fragmento scfv2a, de alguna forma, es capaz de interferir o inmunomodular el proceso de infecci\u00f3n impidiendo su desarrollo normal. Sin embargo, como han apuntado otros autores, el nivel bajo de acumulaci\u00f3n de los fragmentos scfv ser\u00eda un factor que limitar\u00eda el efecto de protecci\u00f3n ejercido. por otro lado, combinando la expresi\u00f3n transitoria scfvs mediante agroinfiltraci\u00f3n y la agroinoculaci\u00f3n del un clon viral ppv-gfp, se ha establecido un m\u00e9todo alternativo, m\u00e1s r\u00e1pido, para ensayar la efectividad los fragmentos scfv frente a la infecci\u00f3n viral. Este m\u00e9todo ha sido aplicado para evaluar de forma cuantitativa la efectividad de los diferentes fragmentos scfv2a, de forma que sirva de punto de comparaci\u00f3n para valorar la eficacia de versiones mejoradas y m\u00e1s estables del fragmento scfv2a o incluso scfv con diferentes especificidades.  De esta forma, en un futuro, se podr\u00edan seleccionar para la transformaci\u00f3n estable los candidato con el mayor grado de efectividad posible y asegurar as\u00ed el resultado de la estrategia de inmunomodulaci\u00f3n en la obtenici\u00f3n de resistencia a ppv.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Inmunomodulaci\u00f3n de la infecci\u00f3n de plum pox virus mediante la expresi\u00f3n estable y transitoria de anticuerpos recombinantes contra la nib replicasa viral en plantas de nicotiana benthamiana<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Inmunomodulaci\u00f3n de la infecci\u00f3n de plum pox virus mediante la expresi\u00f3n estable y transitoria de anticuerpos recombinantes contra la nib replicasa viral en plantas de nicotiana benthamiana <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 M\u00c2\u00ba Teresa Gil Capit\u00e1n <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Polit\u00e9cnica de Valencia<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 25\/06\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Mar\u00eda no J. Cambra \u00e1lvarez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Juan  Antonio Garcia alvarez <\/li>\n<li>Antonio Sanz fernandez (vocal)<\/li>\n<li>olga m. Esteban tortajada (vocal)<\/li>\n<li>Carlos Romero salvador (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de M\u00c2\u00ba Teresa Gil Capit\u00e1n Resumen plum pox virus (ppv) es miembro del g\u00e9nero potyvirus, causa la enfermedad [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[16820],"tags":[24320,117136,14510,5225,207234,44108],"class_list":["post-102091","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-politecnica-de-valencia","tag-antonio-sanz-fernandez","tag-carlos-romero-salvador","tag-juan-antonio-garcia-alvarez","tag-maria-no-j-cambra-alvarez","tag-mao-teresa-gil-capitan","tag-olga-m-esteban-tortajada"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/102091","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=102091"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/102091\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=102091"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=102091"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=102091"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}