{"id":102530,"date":"2010-06-07T00:00:00","date_gmt":"2010-06-07T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/seleccion-y-caracterizacion-de-anticuerpos-recombinantes-para-fungicidas-aplicacion-al-desarrollo-de-tecnicas-inmunoanala%c2%adticas\/"},"modified":"2010-06-07T00:00:00","modified_gmt":"2010-06-07T00:00:00","slug":"seleccion-y-caracterizacion-de-anticuerpos-recombinantes-para-fungicidas-aplicacion-al-desarrollo-de-tecnicas-inmunoanala%c2%adticas","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/politecnica-de-valencia\/seleccion-y-caracterizacion-de-anticuerpos-recombinantes-para-fungicidas-aplicacion-al-desarrollo-de-tecnicas-inmunoanala%c2%adticas\/","title":{"rendered":"Selecci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de anticuerpos recombinantes para fungicidas. aplicaci\u00f3n al desarrollo de t\u00e9cnicas inmunoanal\u00edticas"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Emma Plana Andani <\/strong><\/h2>\n<p>Los fungicidas az\u00f3licos son plaguicidas ampliamente empleados en agricultura. Por motivos de seguridad alimentaria, es necesario disponer de m\u00e9todos anal\u00edticos de los residuos de dichos plaguicidas en muestras agroalimentarias. Actualmente, la cromatograf\u00eda es, indudablemente, el m\u00e9todo m\u00e1s empleado para la determinaci\u00f3n de residuos de plaguicidas en muestras agr\u00edcolas. Sin embargo, los m\u00e9todos cromatogr\u00e1ficos presentan ciertas limitaciones, relacionadas fundamentalmente con la complejidad de los instrumentos y con la laboriosidad de la preparaci\u00f3n de las muestras. Como consecuencia, se han desarrollado nuevas t\u00e9cnicas de an\u00e1lisis, entre las que destacan los inmunoensayos, que ofrecen prestaciones anal\u00edticas m\u00e1s sencillas y r\u00e1pidas. En la bibliograf\u00eda se han descrito inmunoensayos frente a fungicidas az\u00f3licos, basados tanto en anticuerpos policlonales como en anticuerpos monoclonales. En los \u00faltimos a\u00f1os, los avances en biolog\u00eda molecular han permitido la obtenci\u00f3n de la llamada tercera generaci\u00f3n de anticuerpos, los anticuerpos recombinantes. No obstante, aunque la tecnolog\u00eda del dna recombinante ha alcanzado un alto nivel de desarrollo para el caso de mol\u00e9culas de elevado peso molecular, la obtenci\u00f3n de anticuerpos recombinantes frente a mol\u00e9culas org\u00e1nicas de bajo peso molecular, como es el caso de los plaguicidas, est\u00e1 bastante menos extendida. as\u00ed pues, el objetivo principal de esta tesis es en la obtenci\u00f3n de anticuerpos recombinantes frente a los fungicidas az\u00f3licos tetraconazol, hexaconazol e imazalil, y su aplicaci\u00f3n en la determinaci\u00f3n de residuos de estos fungicidas en muestras agroalimentarias.  en primer lugar, se han aplicado t\u00e9cnicas de biolog\u00eda molecular para la obtenci\u00f3n de los fragmentos recombinantes scfv (single chain fragment variable) a partir del material gen\u00e9tico de hibridomas productores de anticuerpos monoclonales frente a los fungicidas tetraconazol, hexaconazol e imazalil. Posteriormente, dichos fragmentos se han expresado en sistemas bacterianos empleando vectores de expresi\u00f3n plasm\u00eddicos. Por otro lado, se ha optimizado un sistema de cribado y selecci\u00f3n de colonias bacterianas productoras de fragmentos de anticuerpos recombinantes capaces de reconocer a los plaguicidas en estudio. Este sistema est\u00e1 basado en elisas simult\u00e1neos, competitivos y no competitivos, de la fracci\u00f3n soluble del anticuerpo recombinante. Finalmente, en el caso de los anticuerpos frente a hexaconazol e imazalil, se ha aplicado un protocolo de enriquecimiento c\u00edclico denominado panning, basado en la tecnolog\u00eda de presentaci\u00f3n de mol\u00e9culas proteicas en la superficie de fagos (phage display). De este modo, se han obtenido anticuerpos recombinantes a partir de cada hibridoma productor de anticuerpos monoclonales. Cada anticuerpo recombinante se ha expresado tanto en su forma de prote\u00edna libre (scfv) como en forma de prote\u00edna de fusi\u00f3n (scfv-piii). de igual modo, se han empleado t\u00e9cnicas de biolog\u00eda molecular para la generaci\u00f3n de bibliotecas de fragmentos recombinantes scfv a partir del material gen\u00e9tico de linfocitos de ratones inmunizados frente a cada uno de los tres fungicidas. En este caso, se han optimizado las condiciones tanto de la etapa de construcci\u00f3n de bibliotecas como del posterior proceso de enriquecimiento por panning. De este modo, se ha obtenido un anticuerpo recombinante de alta afinidad frente a tetraconazol que se ha expresado tanto en su forma de prote\u00edna libre (scfv) como en forma de prote\u00edna de fusi\u00f3n (scfv-piii).  a continuaci\u00f3n, se han comparado las caracter\u00edsticas anal\u00edticas de los inmunensayos de tetraconazol, hexaconazol e imazalil, basados en anticuerpos monoclonales y en anticuerpos recombinantes, tanto scfv como scfv-piii. En todos los casos, los inmunoensayos basados en anticuerpos monoclonales han resultado m\u00e1s sensibles que los inmunoensayos basados en anticuerpos recombinantes. En t\u00e9rminos de especificidad, todos los anticuerpos recombinantes han mostrado un patr\u00f3n de reconocimiento comparable al del anticuerpo monoclonal correspondiente.  finalmente, se han desarrollado elisas basados tanto en anticuerpos monoclonales como en anticuerpos recombinantes para la determinaci\u00f3n de tetraconazol, hexaconazol e imazalil en muestras de zumos de fruta. Todos los inmunoensayos desarrollados han permitido la determinaci\u00f3n r\u00e1pida y sencilla del correspondiente fungicida con precisi\u00f3n y exactitud aceptables.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Selecci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de anticuerpos recombinantes para fungicidas. aplicaci\u00f3n al desarrollo de t\u00e9cnicas inmunoanal\u00edticas<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Selecci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de anticuerpos recombinantes para fungicidas. aplicaci\u00f3n al desarrollo de t\u00e9cnicas inmunoanal\u00edticas <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Emma Plana Andani <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Polit\u00e9cnica de Valencia<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 06\/07\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>\u00e1ngel Montoya Baides<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Mar\u00eda  del pilar Marco colas <\/li>\n<li>Antonio Abad fuentes (vocal)<\/li>\n<li>josep vicent Mercader badia (vocal)<\/li>\n<li>Antonio Valverde garcia (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Emma Plana Andani Los fungicidas az\u00f3licos son plaguicidas ampliamente empleados en agricultura. 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