{"id":102833,"date":"2018-03-11T10:25:11","date_gmt":"2018-03-11T10:25:11","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-del-efecto-de-factores-inductores-de-resistencia-a-la-insulina-sobre-la-activacion-de-erk1-2-y-pkb-estimuladas-por-insulina-efecto-de-las-fosfatasas-en-la-activacion-de-erk5\/"},"modified":"2018-03-11T10:25:11","modified_gmt":"2018-03-11T10:25:11","slug":"estudio-del-efecto-de-factores-inductores-de-resistencia-a-la-insulina-sobre-la-activacion-de-erk1-2-y-pkb-estimuladas-por-insulina-efecto-de-las-fosfatasas-en-la-activacion-de-erk5","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica-molecular\/estudio-del-efecto-de-factores-inductores-de-resistencia-a-la-insulina-sobre-la-activacion-de-erk1-2-y-pkb-estimuladas-por-insulina-efecto-de-las-fosfatasas-en-la-activacion-de-erk5\/","title":{"rendered":"Estudio del efecto de factores inductores de resistencia a la insulina sobre la activaci\u00f3n de erk1\/2 y pkb estimuladas por insulina. efecto de las fosfatasas en la activaci\u00f3n de erk5."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Lourdes Maite Garc\u00eda Quintanilla <\/strong><\/h2>\n<p>En la mayor\u00eda de estudios sobre la resistencia a la insulina se relaciona esta patolog\u00eda a cambios en la fosforilaci\u00f3n del principal sustrato del receptor de la insulina, la prote\u00edna irs-1, pero no se ha estudiado cuales son los efectos que provocan estos cambios en la cascada de se\u00f1alizaci\u00f3n intracelular estimulada por la insulina. En este trabajo se estudia c\u00f3mo factores que inducen resistencia a la insulina afectan las dos v\u00edas principales estimuladas por la hormona, la v\u00eda de la map quinasa y la v\u00eda pi3k, y su relaci\u00f3n con los cambios en la fosforilaci\u00f3n de irs-1.  entre las citoquinas asociadas a la resistencia a la insulina en tejido adiposo destaca el tnf\u00c2\u00bf. En este trabajo estudiamos el efecto producido por la preincubaci\u00f3n de estas c\u00e9lulas con tnf\u00c2\u00bf en las v\u00edas anteriormente mencionadas estimuladas por insulina. Curiosamente, aunque en estas c\u00e9lulas la presencia de tnf\u00c2\u00bf induce la fosforilaci\u00f3n de la ser307 de irs-1 y una disminuci\u00f3n en las fosfotirosinas de la mol\u00e9cula en respuesta a la insulina, esto no se reflej\u00f3 en cambios en la activaci\u00f3n de erk1\/2 y pkb. Por tanto, esto indica que a los tiempos analizados no existe correlaci\u00f3n entre los cambios en la fosforilaci\u00f3n de irs-1 y el efecto en las v\u00edas de se\u00f1alizaci\u00f3n.  tambi\u00e9n estudiamos los efectos del estr\u00e9s oxidativo (h2o2) y la preincubaci\u00f3n con la propia hormona sobre las dos v\u00edas mencionadas anteriormente. En el caso del agua oxigenada se observa que el tratamiento de las c\u00e9lulas con este compuesto resulta en un bloqueo de la activaci\u00f3n de la pkb y de la map quinasa. Mediante el uso de inhibidores de diferentes quinasa demostramos que este bloqueo no se debe a las quinasas estimuladas por estr\u00e9s. En el caso de la pkb el bloqueo se debe a la activaci\u00f3n de la map quinasa ya que el efecto se revierte con inhibidores espec\u00edficos de esta v\u00eda. En el caso de la map quinasa ninguno de los inhibidores utilizados es capaz de revertir el bloqueo, por tanto no se puede atribuir a las quinasas de estr\u00e9s ni a la propia map quinasa. En el caso de esta \u00faltima v\u00eda, los ensayos en los que se determina la activaci\u00f3n de ras indican que el bloqueo se produce por encima de este componente de la v\u00eda. Tampoco se observa una correlaci\u00f3n entre estos efectos y la fosforilaci\u00f3n de irs-1, pues el h2o2 aunque aumenta la fosforilaci\u00f3n de la ser307 tambi\u00e9n aumenta la fosforilaci\u00f3n en tirosinas de irs-1. finalmente, en el estudio del efecto de la insulina se observa que la estimulaci\u00f3n de estas c\u00e9lulas con la hormona produce una activaci\u00f3n prolongada de la pkb mientras que en el caso de la map quinasa se produce una activaci\u00f3n transitoria que disminuye a los pocos minutos hasta valores pr\u00f3ximos al basal. La posterior estimulaci\u00f3n con insulina no resulta en una nueva activaci\u00f3n de la v\u00eda map quinasa. Por tanto, se puede concluir que una vez que las c\u00e9lulas se han estimulado por la insulina la v\u00eda de la map quinasa se vuelve refractaria a una nueva estimulaci\u00f3n. Este efecto est\u00e1 regulado por la propia map quinasa y no participa ninguna quinasa de estr\u00e9s, como lo demuestra el estudio hecho con diferentes inhibidores de estas v\u00edas.  en la segunda parte de esta tesis se estudia el papel que tienen las ser\/thr fosfatasas sobre la v\u00eda de activaci\u00f3n de la quinasa erk5. Esta quinasa pertenece a la familia de las map quinasas y se estimula tanto por factores de crecimiento como por diferentes tipos de estr\u00e9s. Si bien en la mayor\u00eda de los casos el papel de las fosfatasas en la regulaci\u00f3n de estas v\u00edas se ha asociado con la regulaci\u00f3n negativa, en el caso de la erk5 parece que tambi\u00e9n tendr\u00edan un papel importante en la activaci\u00f3n de la v\u00eda. De esta forma, la incubaci\u00f3n de c\u00e9lulas pc12 en presencia de inhibidores espec\u00edficos de las ser\/thr fosfatasas pp1 y pp2a resulta en un bloqueo de la activaci\u00f3n de erk5 en respuesta a dos factores de crecimiento diferentes (egf y ngf) y al h2o2. Este efecto no es el resultado de una interacci\u00f3n inespec\u00edfica de los inhibidores ya que se observa utilizando dos inhibidores con estructuras diferentes. Adem\u00e1s, el efecto es dependiente de la concentraci\u00f3n y coincide con la potencia de estos compuestos como inhibidores de fosfatasas.  dado que se hab\u00eda descrito que en c\u00e9lulas pc12 la activaci\u00f3n de erk5 era dependiente de ras, mientras que en el caso de la l\u00ednea celular hela era independiente de ras, tambi\u00e9n se realizaron experimentos en este tipo celular observ\u00e1ndose el mismo efecto. Esto indicar\u00eda que las fosfatasas act\u00faan en un sitio com\u00fan en ambas v\u00edas. No obstante, en una aproximaci\u00f3n experimental para ver si en c\u00e9lulas pc12 el efecto quedaba por debajo de ras en la v\u00eda de se\u00f1alizaci\u00f3n, obtuvimos resultados que discrepaban con los resultados publicados. As\u00ed, los datos utilizando una forma constitutivamente activa de ras en c\u00e9lulas pc12 indican que al contrario de lo publicado, en estas c\u00e9lulas la activaci\u00f3n de erk5 es independiente de ras.   dado que se ha observado que pkc act\u00faa como un regulador negativo de la v\u00eda erk5 se pens\u00f3 que la diana intracelular de estas fosfatasas podr\u00eda ser el lugar fosforilado por pkc. Los resultados obtenidos mediante el uso de inhibidores de pkc y de las fosfatasas descartan esta posibilidad.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio del efecto de factores inductores de resistencia a la insulina sobre la activaci\u00f3n de erk1\/2 y pkb estimuladas por insulina. efecto de las fosfatasas en la activaci\u00f3n de erk5.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio del efecto de factores inductores de resistencia a la insulina sobre la activaci\u00f3n de erk1\/2 y pkb estimuladas por insulina. efecto de las fosfatasas en la activaci\u00f3n de erk5. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Lourdes Maite Garc\u00eda Quintanilla <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Aut\u00f3noma de barcelona<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 13\/07\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>N\u00e9stor G\u00f3mez Trias<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: jose Aguilera avila <\/li>\n<li>dolors Balsa l\u00f3pez (vocal)<\/li>\n<li>  (vocal)<\/li>\n<li>  (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Lourdes Maite Garc\u00eda Quintanilla En la mayor\u00eda de estudios sobre la resistencia a la insulina se relaciona 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