{"id":102972,"date":"2018-03-11T10:25:20","date_gmt":"2018-03-11T10:25:20","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/aislamiento-caracterizacion-y-seleccion-de-rhizobia-autoctonos-que-nodulan-habichuela-roja-phaseolus-vulgaris-l-en-la-republica-dominicana\/"},"modified":"2018-03-11T10:25:20","modified_gmt":"2018-03-11T10:25:20","slug":"aislamiento-caracterizacion-y-seleccion-de-rhizobia-autoctonos-que-nodulan-habichuela-roja-phaseolus-vulgaris-l-en-la-republica-dominicana","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/produccion-de-cultivos\/aislamiento-caracterizacion-y-seleccion-de-rhizobia-autoctonos-que-nodulan-habichuela-roja-phaseolus-vulgaris-l-en-la-republica-dominicana\/","title":{"rendered":"Aislamiento, caracterizaci\u00f3n y selecci\u00f3n de rhizobia aut\u00f3ctonos que nodulan habichuela roja (phaseolus vulgaris l.), en la rep\u00fablica dominicana"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> C\u00e9sar Antonio D\u00edaz Alc\u00e1ntara <\/strong><\/h2>\n<p>El objetivo global planteado en esta tesis es el aislamiento, caracterizaci\u00f3n y selecci\u00f3n de rhizobia aut\u00f3ctonos que nodulan habichuela roja (phaseolus vulgaris l.), En la rep\u00fablica dominicana que nos permita avanzar hacia una fertilizaci\u00f3n racional en el cultivo de esta leguminosa mediante la selecci\u00f3n de cepas aut\u00f3ctonas de rhizobia de elevada eficiencia en la fijaci\u00f3n de nitr\u00f3geno, para fabricar con ellas biofertilizantes. el cultivo de la habichuela en la republica dominicana tiene una importancia social y econ\u00f3mica significativa, cuya producci\u00f3n primaria hace el mayor aporte econ\u00f3mico al desarrollo de toda la regi\u00f3n del pa\u00eds, generando una gran cantidad de empleos, tanto directos como indirectos. metodolog\u00eda utilizada para desarrollar los objetivos: los n\u00f3dulos fueron extra\u00eddos de plantaciones de habichuela en estado fenol\u00f3gico de floraci\u00f3n en los municipios de constanza, rancho arriba y hondo valle; perteneciente a las provincias de la vega, ocoa y el\u00edas pi\u00f1a, respectivamente, de la rep\u00fablica dominicana.  Los suelos donde se extrajeron los n\u00f3dulos corresponden a zonas monta\u00f1osas del pa\u00eds.  Por cada parcela se tomaron 15 plantas. Para el aislamiento los n\u00f3dulos se esterilizaron superficialmente sumergi\u00e9ndolos en una soluci\u00f3n de hgcl2 al 1,0% durante 5 minutos, lav\u00e1ndolos posteriormente en agua est\u00e9ril. Posteriormente se trituraron con ayuda de una varilla de vidrio est\u00e9ril y se sembraron en placas con medio de cultivo yma (vincent, 1970). Las placas se incubaron a 28\u00c2\u00bac durante una semana, en este tiempo se produjo el crecimiento de colonias de bacterias procedentes del interior del n\u00f3dulo. Para extraer el dna las cepas se inocularon en placas con medio ty (beringer, 1974) y se incubaron durante 24-48h a 28\u00c2\u00bac. Con el adn extra\u00eddo de cada una de las cepas aisladas y el de las cepas de referencia se llev\u00f3 a cabo el an\u00e1lisis de los perfiles de tp-rapd mediante pcr utilizando dos primers universales que amplifican el 16s rdna y una serie de bandas adicionales. Los perfiles de tp-rapd permiten agrupar los aislados a nivel de especie o subespecie, y por tanto permiten reducir el n\u00famero de aislados que se someten a idenficaci\u00f3n mediante t\u00e9cnicas m\u00e1s complejas como es la secuenciaci\u00f3n de genes.  La identificaci\u00f3n taxon\u00f3mica de los representantes de los grupos formados por los tp-rapd, se llev\u00f3 a cabo mediante la secuenciaci\u00f3n de los genes ribos\u00f3micos 16s y los genes housekeeping reca y atpd y para la identificaci\u00f3n a nivel de biovar se analizaron los genes nodc. Tambi\u00e9n se real\u00edz\u00f3 una caracterizaci\u00f3n fenot\u00edpica, evaluando el crecimiento en diferentes condiciones de ph, temperatura y salinidad. Para comprobar que las cepas aisladas en el estudio eran capaces de de reinfectar, se inocularon plantas de habichuela de la misma variedad en la que se aislaron los rhizobia. Se aislaron un total de 23 cepas, obteniendo 8 grupos tp-rapd, de los cuales 5 estuvieron constituidos por m\u00e1s de una cepa, el mayoritario por 7 cepas. La secuenciaci\u00f3n completa del gen ribos\u00f3mico 16s de una cepa representativa de cada perfil de tp-rapd permiti\u00f3 clasificar las cepas aisladas en el g\u00e9nero rhizobium, dos de ellos (grupos i y viii) aparecen con una similitud del 100% con respecto a r. Phaseoli y el resto se identificaron como rhizobium sp. Las secuencias de los genes reca y atpd permitieron confirmar que los representantes de dos grupos de tp-rapd, i y viii, pertenecen la especie rhizobium phaseoli, sin embargo el resto de las cepas posiblemente no pertenecen a ninguna de las especies descritas hasta el momento en este g\u00e9nero. Los resultados de la caracterizaci\u00f3n fenot\u00edpica mostraron que las cepas aisladas en este estudio son pr\u00f3ximas a las dos especies americanas que son microsimbiontes t\u00edpicos de phaseolus, rhizobium etli y rhizobium phaseoli. En consecuencia puede afirmarse que en los suelos analizados de rep\u00fablica dominicana, phaseolus vulgaris establece simbiosis con rhizobia de crecimiento r\u00e1pido, mostrando gran diversidad. Todas las cepas de rhizobia aisladas fueron capaces de nodular p. Vulgaris y de acuerdo con sus secuencias del gen nodc pertenecen a la biovariedad phaseoli. Las cepas aisladas presentaron los mismos alelos de este gen que cepas americanas de r. Etli y cepas espa\u00f1olas de esta especie y de otras especies pr\u00f3ximas a r. Leguminosarum. La efectividad simbi\u00f3tica de los aislados fue muy variable, alcanzando el 40 % en el m\u00e1s efectivo y bajando del 10% en los tres menos efectivos, trat\u00e1ndose de valores bajos pero acordes con los obtenidos por otros autores. El porcentaje de nitr\u00f3geno que deriva de la fijaci\u00f3n simbi\u00f3tica vari\u00f3 entre el 73% y el 13%. En el proceso de selecci\u00f3n en microcosmos, dos de las cinco cepas analizadas (oac1020 y vri2090) produjeron un desarrollo significativamente mayor que el testigo sin fertilizar con nitr\u00f3geno, con un 22% m\u00e1s de biomasa a\u00e9rea y un 19% m\u00e1s de rendimiento de grano, si bien el \u00faltimo valor no es significativo desde el punto de vista estad\u00edstico.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Aislamiento, caracterizaci\u00f3n y selecci\u00f3n de rhizobia aut\u00f3ctonos que nodulan habichuela roja (phaseolus vulgaris l.), en la rep\u00fablica dominicana<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Aislamiento, caracterizaci\u00f3n y selecci\u00f3n de rhizobia aut\u00f3ctonos que nodulan habichuela roja (phaseolus vulgaris l.), en la rep\u00fablica dominicana <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 C\u00e9sar Antonio D\u00edaz Alc\u00e1ntara <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Le\u00f3n<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 15\/07\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Fernando Gonz\u00e1lez Andr\u00e9s<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: eustoquio Martinez molina <\/li>\n<li>dulce nombre Rodr\u00edguez navarro (vocal)<\/li>\n<li>paula Garc\u00eda fraile (vocal)<\/li>\n<li>\u00e1lvaro Peix geldart (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de C\u00e9sar Antonio D\u00edaz Alc\u00e1ntara El objetivo global planteado en esta tesis es el aislamiento, caracterizaci\u00f3n y selecci\u00f3n 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