{"id":103349,"date":"2018-03-11T10:25:51","date_gmt":"2018-03-11T10:25:51","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-funcional-de-ypi1-una-subunidad-reguladora-esencial-de-la-protea%c2%adna-fosfatasa-glc7\/"},"modified":"2018-03-11T10:25:51","modified_gmt":"2018-03-11T10:25:51","slug":"estudio-funcional-de-ypi1-una-subunidad-reguladora-esencial-de-la-protea%c2%adna-fosfatasa-glc7","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/biologia-molecular\/estudio-funcional-de-ypi1-una-subunidad-reguladora-esencial-de-la-protea%c2%adna-fosfatasa-glc7\/","title":{"rendered":"Estudio funcional de ypi1, una subunidad reguladora esencial de la prote\u00edna fosfatasa glc7"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Mar\u00eda Isabel Marquina Rodr\u00edguez <\/strong><\/h2>\n<p>La fosfo-defosforilaci\u00f3n de residuos serina, treonina y tirosina es uno de los mecanismos de regulaci\u00f3n de prote\u00ednas m\u00e1s extendido en los seres vivos. Este tipo de reacciones es llevado a cabo de una manera estrictamente coordinada por las prote\u00ednas quinasas y fosfatasas. El genoma de la levadura saccharomyces cerevisiae codifica un n\u00famero m\u00e1s elevado de ser\/thr quinasas que de fosfatasas. Para llevar a cabo su funci\u00f3n biol\u00f3gica, algunas ser\/thr fosfatasas han desarrollado una estrategia evolutiva basada en la uni\u00f3n a subunidades reguladoras, que determinan su localizaci\u00f3n subcelular, actividad y\/o especificidad de sustrato. una de las ser\/thr m\u00e1s estudiadas en los \u00faltimos a\u00f1os es la fosfatasa de tipo 1 (pp1). Esta prote\u00edna, muy conservada evolutivamente, es esencial y est\u00e1 involucrada en multitud de procesos biol\u00f3gicos diferentes, desde el metabolismo de carbohidratos hasta la regulaci\u00f3n del ciclo celular. Tanto la ausencia como el exceso de actividad pp1 son perjudiciales para la c\u00e9lula, motivo por el cual esta prote\u00edna presenta una regulaci\u00f3n extremadamente fina, presentando una multitud de subunidades reguladoras que se encargan de modular su actividad. El estudio de la uni\u00f3n entre diferentes subunidades reguladoras y la fosfatasa han permitido profundizar en el conocimiento de la regulaci\u00f3n de la fosfatasa pp1. Adem\u00e1s, han permitido identificar, entre otras, una zona presente en muchas de estas subunidades reguladoras, denominado motivo rvxf, que es necesario para la uni\u00f3n con la fosfatasa y que interacciona con una regi\u00f3n hidrof\u00f3bica de pp1 situada lejos del centro catal\u00edtico de la enzima. El genoma de la levadura s. Cerevisiae contiene \u00fanicamente un gen, denominado glc7, que codifica la \u00fanica isoforma catal\u00edtica de la pp1 en \u00e9ste organismo. en el momento de iniciar este trabajo nuestro grupo de investigaci\u00f3n en colaboraci\u00f3n con el laboratorio del dr. Pascual sanz (ibv, csic, Valencia) acababa de caracterizar al primer inhibidor end\u00f3geno de la prote\u00edna fosfatasa glc7, denomin\u00e1ndola ypi1 (yeast phosphatase inhibitor-1). Este estudio demostr\u00f3 que esta prote\u00edna interact\u00faa f\u00edsicamente con glc7 in vivo y es capaz de inhibir su actividad fosfatasa in vitro. La delecci\u00f3n de ypi1 es letal, lo que indica un papel importante en la biolog\u00eda celular. Por ello nos planteamos estudiar los efectos fenot\u00edpicos atribuibles a un incremento de su expresi\u00f3n, as\u00ed como la creaci\u00f3n de mutantes condicionales (basados tanto en el uso de un degr\u00f3n como en sistemas de expresi\u00f3n del promotor teto regulable por doxiciclina) con el fin de elucidar el mecanismo por el cual ypi1 estar\u00eda regulando algunas de las funciones esenciales de glc7. As\u00ed, observamos que las c\u00e9lulas que sobreexpresan ypi1 exhiben un fenotipo consistente con tolerancia salina, probablemente a trav\u00e9s de la regulaci\u00f3n de la atpasa de sodio ena1. Adem\u00e1s, la disponibilidad de estos mutantes condicionales de ypi1 ha permitido demostrar que la funci\u00f3n que este regulador desempe\u00f1a sobre la fosfatasa glc7 est\u00e1 vinculada con el mantenimiento de la integridad de la pared celular. por otro lado, la falta de ypi1 resulta en un dram\u00e1tico bloqueo en la transici\u00f3n g2\/m del ciclo celular, con gemas anormalmente alargadas, y spindles mit\u00f3ticos cortos, aunque las bases moleculares de estos fenotipos no han sido esclarecidas por completo. Nuestros resultados recientes muestran que la ausencia de ypi1 provoca una estabilizaci\u00f3n de la securina pds1, sugiriendo una activaci\u00f3n de los checkpoints que regulan la transici\u00f3n g2\/m. El bloqueo en g2\/m, provocado por la falta de ypi1 a\u00fan persiste en c\u00e9lulas carentes de mad1\/mad2 o rad9, a pesar de que estas c\u00e9lulas carecen de componentes clave en la se\u00f1alizaci\u00f3n de los checkpoints del spindle y de da\u00f1o en el dna, respectivamente. En contraste, la delecci\u00f3n de swe1, que codifica una prote\u00edna quinasa necesaria para la activaci\u00f3n del checkpoint de la morfog\u00e9nesis, permite la salida del bloqueo en g2\/m del mutante ypi1 y recupera la morfolog\u00eda normal de las c\u00e9lulas, aunque \u00e9stas no son capaces de sobrevivir. La ausencia de ypi1 provoca una estabilizaci\u00f3n de swe1, que conlleva una persistente fosforilaci\u00f3n de la prote\u00edna quinasa cdc28 en la tyr19, inhibiendo su actividad y bloqueando la progresi\u00f3n del ciclo celular. Esta secuencia de eventos son los responsables de inducir una activaci\u00f3n del checkpoint de la morfog\u00e9nesis. Adem\u00e1s, hemos observado que la ausencia de ypi1 provoca un ensamblaje defectuoso del anillo de septinas en el cuello de la gema, pudiendo ser \u00e9sta la causa del bloqueo caracter\u00edstico en g2\/m descrito en estas c\u00e9lulas. finalmente, no se descarta la posibilidad de que la falta de ypi1 podr\u00eda involucrar la activaci\u00f3n de chekpoints adicionales, ya que la estabilizaci\u00f3n de la securina pds1 a\u00fan se observa en c\u00e9lulas teto7:ypi1 swe1, a pesar que \u00e9stas progresan a trav\u00e9s de la mitosis. Por otro lado, la falta de ypi1 provoca una fuerte disminuci\u00f3n en la expresi\u00f3n de cdc26, que codifica una subunidad del apc\/c. C\u00e9lulas carentes de cdc26 sufren un bloqueo en g2\/m, con spindles anormalmente cortos, fenotipo id\u00e9ntico al observado en ausencia de ypi1. La sobreexpresi\u00f3n de cdc26 permite que c\u00e9lulas carentes de ypi1 progresen a trav\u00e9s de la mitosis, aunque no corrige el fenotipo de letalidad, dejando abierta la posibilidad que ypi1 podr\u00eda modular la funci\u00f3n de glc7 sobre el apc.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio funcional de ypi1, una subunidad reguladora esencial de la prote\u00edna fosfatasa glc7<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio funcional de ypi1, una subunidad reguladora esencial de la prote\u00edna fosfatasa glc7 <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Mar\u00eda Isabel Marquina Rodr\u00edguez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Aut\u00f3noma de barcelona<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 27\/07\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Joaquin Ari\u00f1o Carmona<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: pascual Sanz bigorra <\/li>\n<li>rosa Aligue alemany (vocal)<\/li>\n<li>  (vocal)<\/li>\n<li>  (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Mar\u00eda Isabel Marquina Rodr\u00edguez La fosfo-defosforilaci\u00f3n de residuos serina, treonina y tirosina es uno de los mecanismos 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