{"id":103708,"date":"2018-03-11T10:26:22","date_gmt":"2018-03-11T10:26:22","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/procesos-catalizados-por-lipasas-optimizacion-de-la-estabilidad-y-enantioselectividad-de-una-lipasa-termorresistente\/"},"modified":"2018-03-11T10:26:22","modified_gmt":"2018-03-11T10:26:22","slug":"procesos-catalizados-por-lipasas-optimizacion-de-la-estabilidad-y-enantioselectividad-de-una-lipasa-termorresistente","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/enzimologia\/procesos-catalizados-por-lipasas-optimizacion-de-la-estabilidad-y-enantioselectividad-de-una-lipasa-termorresistente\/","title":{"rendered":"Procesos catalizados por lipasas: optimizaci\u00f3n de la estabilidad y enantioselectividad de una lipasa termorresistente"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> C\u00e9sar Alonso Godoy Vargas <\/strong><\/h2>\n<p>La btl2 (lipasa 2 de geobacillus thermocatenulatus, anteriormente bacillus) se utiliz\u00f3 como enzima modelo para incrementar su potencial como biocatalizador industrial mediante el dise\u00f1o de diferentes estrategias para mejorar la estabilidad t\u00e9rmica y en codisolventes, capacidad de reactivaci\u00f3n, actividad catal\u00edtica y selectividad.  btl2 se purific\u00f3 con bastante facilidad, principalmente por adsorci\u00f3n selectiva sobre octil-agarosa y desorci\u00f3n posterior con detergente. Finalmente se realiz\u00f3 un intercambio ani\u00f3nico sobre sepharose-q. La enzima pura, en presencia de triton x-100 se cristaliz\u00f3 y se determin\u00f3 su estructura tridimensional que correspondi\u00f3 a la forma abierta (sitio activo expuesto al solvente). Por modelaje matem\u00e1tico se pudo proponer el mecanismo de activaci\u00f3n y apertura de btl2.  para los estudios de estabilidad, se prepararon derivados de btl2 obtenidos por uni\u00f3n covalente unipuntual suave (sobre bromuro de cian\u00f3geno- agarosa), y derivados inmovilizados por uni\u00f3n covalente multipuntual sobre glioxil-agarosa. Para mejorar la estabilidad de los derivados se realiz\u00f3 aminaci\u00f3n no dirigida en fase s\u00f3lida de la btl2 convirtiendo las cadenas laterales tipo carboxilo (de asp + glu) en grupos amino. La posterior inmovilizaci\u00f3n multipuntual sobre glioxil-agarosa origin\u00f3 nuevos derivados mucho m\u00e1s estables; la presencia de dtt permiti\u00f3 disminuir el ph de inmovilizaci\u00f3n.   tambi\u00e9n se desarroll\u00f3 una estrategia de inmovilizaci\u00f3n multipuntual dirigida de mutantes de btl2 enriquecida en grupos amino por v\u00eda qu\u00edmica o gen\u00e9tica. Los mutantes con una ciste\u00edna introducida en diferentes regiones superficiales de la enzima fueron m\u00e1s estables que los derivados obtenidos por rigidificaci\u00f3n no dirigida de la enzima nativa. Algunos mutantes se enriquecieron en 4 y 6 residuos lisil mediante mutag\u00e9nesis dirigida, logrando mayores factores de estabilizaci\u00f3n pero con actividades espec\u00edficas e intr\u00ednsecas inferiores a los derivados mutantes sin enriquecer en residuos lisil. La aminaci\u00f3n qu\u00edmica en fase s\u00f3lida result\u00f3 ser m\u00e1s conveniente que la aminaci\u00f3n gen\u00e9tica en t\u00e9rminos de productividad de los catalizadores  se aplicaron metodolog\u00edas sencillas para la reactivaci\u00f3n de derivados covalentes de btl2, inactivados por efecto de agentes desnaturalizantes concentrados como la guanidina o dioxano. La presencia de aditivos adecuados permiti\u00f3 reactivar de modo completo y r\u00e1pido a los derivados de btl2.  la presencia de aditivos en concentraciones moderadas como detergentes, de dioxano o de una combinaci\u00f3n de ambos, permiti\u00f3 incrementar sin\u00e9rgicamente la actividad en la hidr\u00f3lisis de p-npb de los derivados modificados unipuntualmente con pol\u00edmeros. Estas mejoras de actividad hidrol\u00edtica estar\u00edan relacionadas con la estabilizaci\u00f3n de la forma abierta de btl2.  tanto el grado de rigidificaci\u00f3n como la orientaci\u00f3n de la enzima en el soporte, influyeron en la selectividad y actividad de los derivados generados, muy probablemente porque se est\u00e1 modificando la forma exacta del centro activo y las zonas de adsorci\u00f3n de los sustratos.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Procesos catalizados por lipasas: optimizaci\u00f3n de la estabilidad y enantioselectividad de una lipasa termorresistente<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Procesos catalizados por lipasas: optimizaci\u00f3n de la estabilidad y enantioselectividad de una lipasa termorresistente <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 C\u00e9sar Alonso Godoy Vargas <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Alcal\u00e1<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 17\/09\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jos\u00e9 Manuel Guis\u00e1n Seijas<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Andr\u00e9s rafael Alcantara leon <\/li>\n<li>Mar\u00eda valeria Graz\u00fa bonav\u00eda (vocal)<\/li>\n<li>aurelio Hidalgo huertas (vocal)<\/li>\n<li>Francisco Jos\u00e9 Plou gasca (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de C\u00e9sar Alonso Godoy Vargas La btl2 (lipasa 2 de geobacillus thermocatenulatus, anteriormente bacillus) se utiliz\u00f3 como enzima 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