{"id":103880,"date":"2018-03-11T10:26:37","date_gmt":"2018-03-11T10:26:37","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/implicacion-del-extremo-c-terminal-de-la-fosfoenolpiruvato-carboxilasa-en-la-degradacion-y-fosforilacion-de-la-protea%c2%adna\/"},"modified":"2018-03-11T10:26:37","modified_gmt":"2018-03-11T10:26:37","slug":"implicacion-del-extremo-c-terminal-de-la-fosfoenolpiruvato-carboxilasa-en-la-degradacion-y-fosforilacion-de-la-protea%c2%adna","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/fisiologia-vegetal\/implicacion-del-extremo-c-terminal-de-la-fosfoenolpiruvato-carboxilasa-en-la-degradacion-y-fosforilacion-de-la-protea%c2%adna\/","title":{"rendered":"Implicaci\u00f3n del extremo c-terminal de la fosfoenolpiruvato carboxilasa en la degradaci\u00f3n y fosforilaci\u00f3n de la prote\u00edna"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Jacinto Manuel Gandullo  Tovar <\/strong><\/h2>\n<p>En este trabajo hemos identificado y caracterizado parcialmente una nueva proteasa que degrada a la fosfoenolpiruvato carboxilasa (pepc), prote\u00edna objeto de nuestro estudio. Esta enzima no requiere ca2+ ni metales para su actividad y es parcialmente sensible a quimostatina, considerado co &#8230; Mo un inhibidor de ser\u00edn-ciste\u00edn proteasas. Sin embargo, posee la peculiaridad de ser activa s\u00f3lo en presencia de un p\u00e9ptido de caracter\u00edsticas hidr\u00f3fobas y que representa los \u00faltimos 19 amino\u00e1cidos del extremo c-terminal de la pepc de sorgo de tipo c4 (p\u00e9ptido c19). Hemos identificado el sitio de interacci\u00f3n mostrando que el tretap\u00e9ptido final qntg no es necesario para la activaci\u00f3n de la proteasa, mientras que las thr944 y thr948 son amino\u00e1cidos esenciales para la activaci\u00f3n. Tambi\u00e9n hemos mostrado la especificidad de este p\u00e9ptido ya que, otras secuencias de pepc (p\u00e9ptidos l1, l2 y l3) no tienen ning\u00fan efecto como activadores de esta proteasa. Adicionalmente, la proteasa c19 (nombre que hace alusi\u00f3n al p\u00e9ptido que la activa) puede degradar otros sustratos como la case\u00edna pero a\u00fan as\u00ed su actividad sigue siendo absolutamente dependiente del p\u00e9ptido c19. Adem\u00e1s, hemos observado que en presencia de glucosa-6p, activador alost\u00e9rico de la pepc, se produce una inhibici\u00f3n de la degradaci\u00f3n de la pepc por la proteasa c19. Este resultado es muy interesante ya que indica que la degradaci\u00f3n de la pepc por la proteasa c19 puede ser regulada por metabolitos. El efecto de la glucosa-6p ser\u00eda indirecto a trav\u00e9s de cambios conformacionales en la pepc. Otras caracter\u00edsticas de esta proteasa son su amplio rango de ph \u00f3ptimo desde 6,5 hasta 8,5, y un peso molecular aproximado de 50 kda.   en cuanto a los sitios de corte de la proteasa c19 sobre la pepc hemos puesto en evidencia otro importante resultado. La proteasa c19 empieza su prote\u00f3lisis por el extremo n-terminal de la pepc pues en presencia de un p\u00e9ptido sint\u00e9tico que simula dicho extremo y que contiene adem\u00e1s el motivo de fosforilaci\u00f3n (chollet et al. 1996) la prote\u00f3lisis es inhibida, cosa que no ocurre cuando se utiliza el mismo p\u00e9ptido pero fosforilado en la ser8. Este resultado aporta una nueva perspectiva del mecanismo de regulaci\u00f3n de la pepc por fosforilaci\u00f3n reversible, el cu\u00e1l hasta el momento s\u00f3lo se pensaba que regulaba las propiedades cin\u00e9ticas y de regulaci\u00f3n de la pepc. Nosotros aportamos en este trabajo, por primera vez, que la fosforilaci\u00f3n de la pepc regula tambi\u00e9n la degradaci\u00f3n de la prote\u00edna por la proteasa c19.   otros datos de inter\u00e9s sobre la movilidad del extremo c-terminal de la pepc, del cual se ha descrito in vitro que puede estar en dos conformaciones distintas, accesible o inaccesible seg\u00fan se describe en \u00e1lvarez et al., (2003), muestran que hay dos posible reguladores fisiol\u00f3gicos de la exposici\u00f3n del c-terminal, la glucosa-6p que lo esconde y el \u00e1cido fosfat\u00eddico (pa) que lo expone. De esto se deduce que la conformaci\u00f3n de la pepc en presencia de glucosa-6p es una conformaci\u00f3n protegida de la prote\u00f3lisis (como se ha descrito anteriormente), mientras que en presencia de pa adoptar\u00eda una conformaci\u00f3n en la que la prote\u00f3lisis estar\u00eda favorecida. Los trabajos con el pa nos han permitido demostrar que la proteasa puede ser activada por el propio extremo c-terminal de la pepc. En efecto, el pa induce la exposici\u00f3n del c-terminal de la pepc y promueve su prote\u00f3lisis por la proteasa c19 sin necesidad de la presencia del p\u00e9ptido c19, y al igual que en el mecanismo descrito anteriormente el punto inicial de corte se localiza en el dominio n-terminal de la pepc.   finalmente, aportamos evidencias de que el p\u00e9ptido c19 es un inhibidor de la pepc-quinasa, describiendo el mecanismo antes s\u00f3lo sugerido en \u00e1lvarez et al., (2003).   en su conjunto estos resultados indican que la regulaci\u00f3n de la movilidad del c-terminal podr\u00eda depender in vivo de la presencia de metabolitos como la glucosa-6p o de mensajeros secundarios como el pa. En presencia de glucosa-6p, la pepc esconder\u00eda el c-terminal promoviendo la actividad y la fosforilaci\u00f3n y desfavoreciendo la prote\u00f3lisis de la pepc, prepar\u00e1ndose esta para ser eficaz en el contexto metab\u00f3lico donde sea requerida, como por ejemplo, la fotos\u00edntesis c4. Dado que el incremento de pa en la c\u00e9lula est\u00e1 con frecuencia asociado a condiciones de estr\u00e9s nos encontrar\u00edamos con un modelo eficaz de reajuste de los niveles de pepc promoviendo la prote\u00f3lisis. Adem\u00e1s, en presencia de pa se favorece la exposici\u00f3n del c-terminal con lo que se inhibir\u00eda la fosforilaci\u00f3n. Todos estos resultados dibujan por primera vez un mapa totalmente nuevo de regulaci\u00f3n de la pepc a trav\u00e9s de la movilidad del extremo c-terminal de la prote\u00edna que a su vez regular\u00eda la fosforilaci\u00f3n y la degradaci\u00f3n de la prote\u00edna por la proteasa c19.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Implicaci\u00f3n del extremo c-terminal de la fosfoenolpiruvato carboxilasa en la degradaci\u00f3n y fosforilaci\u00f3n de la prote\u00edna<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Implicaci\u00f3n del extremo c-terminal de la fosfoenolpiruvato carboxilasa en la degradaci\u00f3n y fosforilaci\u00f3n de la prote\u00edna <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Jacinto Manuel Gandullo  Tovar <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Sevilla<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 24\/09\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Cristina Echevarria Ruiz De Vargas<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Francisco Gil  Martinez <\/li>\n<li>Mar\u00eda m Sahrawy barrag\u00e1n (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda  teresa Lacuesta calvo (vocal)<\/li>\n<li>jean Vidal (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Jacinto Manuel Gandullo Tovar En este trabajo hemos identificado y caracterizado parcialmente una nueva proteasa que degrada 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