{"id":104447,"date":"2018-03-11T10:27:29","date_gmt":"2018-03-11T10:27:29","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/generacion-y-aplicacion-de-anticuerpos-monoclonales-frente-a-toxinas-marinas-y-al-dinoflagelado-alexandrium-minutum\/"},"modified":"2018-03-11T10:27:29","modified_gmt":"2018-03-11T10:27:29","slug":"generacion-y-aplicacion-de-anticuerpos-monoclonales-frente-a-toxinas-marinas-y-al-dinoflagelado-alexandrium-minutum","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/reaccion-antigeno-anticuerpo\/generacion-y-aplicacion-de-anticuerpos-monoclonales-frente-a-toxinas-marinas-y-al-dinoflagelado-alexandrium-minutum\/","title":{"rendered":"Generaci\u00f3n y aplicaci\u00f3n de anticuerpos monoclonales frente a toxinas marinas y al dinoflagelado alexandrium minutum"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Mar\u00eda Elina Garet  Fern\u00e1ndez <\/strong><\/h2>\n<p>Con el fin de disminuir las p\u00e9rdidas econ\u00f3micas sufridas en acuicultura y el alto riesgo para la saludo de los consumidores, ocasionados por episodios t\u00f3xicos provocados por distintas especies de fitoplancton marino, diversos pa\u00edses han implementado medidas de control. Las cuales incluyen, el recuento de fitoplancton t\u00f3xico y el control de toxinas en marisco. El control de fitoplancton t\u00f3xico se lleva a cabo mediante la identificaci\u00f3n de las caracter\u00edsticas morfol\u00f3gicas bajo microscopio \u00f3ptico, tarea lenta  y tediosa que requiere personal entrenado. El control de toxinas en marisco tiene como objetivo asegurar que no se superen los l\u00edmites legales permitidos, para lo cual se han establecido m\u00e9todos oficiales de detecci\u00f3n. Sin embargo, algunos de estos m\u00e9todos, como el bioensayo en rat\u00f3n, presentan importantes desventajas. Con el fin de facilitar los programas de control planteamos en este trabajo tres grandes objetivos. En primer lugar, la inmunodetecci\u00f3n de microalgas con anticuerpos monoclonales obtenidos mediante la t\u00e9cnica de producci\u00f3n de hibridomas, dirigidos frente al dinoflagelado alexandrium minutum. De los 12 hibridomas obtenidos,  dos (m54,3 y m90.3) mostraron gran especifidad frente al dinoflagelado, reconoci\u00e9ndolo exclusivamente tanto en muestras de cultivo, como en muestras naturales de fitoplancton procedentes de episodios t\u00f3xicos. Por lo que su su aplicaci\u00f3n podr\u00eda facilitar las tareas de monitorizaci\u00f3n. En segundo lugar, nos planteamos la inmunodetecci\u00f3n de las toxinas marinas \u00e1cido domoico (ad) y palitoxina (pitx) mediante la obtenci\u00f3n de fragmentos de anticuerpos a partir de bibliotecas de fagos recombinantes. Se obtuvieron virus bacteri\u00f3fagos portadores de fragmentos scfvs capaces de reconocer al \u00e1cido domoico elisa indirecto. Sin embargo no fueron efectivos en el desarrollo  de un elisa competitivo para la cuantificaci\u00f3n de la toxina. De los 20 fagos-scfvs obtenidos, capaces de reconocer a la palitoxina en alta intensidad, se seleccionaron los que presentaron mayor absorbancia por elisa indirecto.  Tras analizar sus secuencias nucleot\u00eddicas, se seleccion\u00f3 un \u00fanico clon, denominado pitx8. Este fago-scfv fue utilizado  en el desarrollo de un elisa competitivo como posible m\u00e9todo  de detecci\u00f3n de palitoxina en muestras contaminadas. Tras enfrentar al fagoptx8 a un amplio rango de concentraciones decrecientes de palitoxina libre, se obtuvo una recta de calibrado con un coeficiente de regresi\u00f3n de 0,9945, que permitir\u00eda la estimaci\u00f3n de toxina presente en una muestras, dentro de un amplio rango de cuantificaci\u00f3n (0,0005-500ng\/ml). La aplicabilidad de \u00e9ste m\u00e9todo se conform\u00f3 mediante el an\u00e1lisis de 10 muestras de marisco artificialmente contaminadas con palitoxina  patr\u00f3n, encontr\u00e1ndose que el m\u00e9todo fue capaz de determinar la concentraci\u00f3n de toxinas en todos los casos. Por \u00faltimo, se llev\u00f3 a cabo un ensayo comparativo entre los m\u00e9todos de referencia para la detecci\u00f3n de toxinas amn\u00e9sica (ad y derivados) y paralizantes (saxitoxina y derivados ) y el inmunoensayo.  Tras analizar 80 muestras naturalmente contaminadas con toxinas paralizantes, provenientes de nueve especies distintas de marisco bajo varias presentaciones, mediante el bioensayo en rat\u00f3n y un elisa comercial,  se observ\u00f3 que el  90% de las muestras fueron correctamente determinadas por elisa. La correlaci\u00f3n entre ambos m\u00e9todos mostr\u00f3 una buena concordancia  entre ellos. En cuanto a las toxinas amn\u00e9sicas se analizaron  58 muestras naturalmente contaminadas con un amplio rango de concentraciones, provenientes de seis especies de marisco, bajo distintas representaciones.  Se compararon  los resultados  mediante el m\u00e9todo de referencia (hplc-uv) y el elisa competitivo asp (modelo oficial alternativo), encontr\u00e1ndose que el elisa fue capaz de determinar correctamente el 97 % de las muestras, confirmando que este m\u00e9todo es una alternativa \u00fatil, que permite la detecci\u00f3n de ad en distintas especies de marisco, bajo distintas presentaciones.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Generaci\u00f3n y aplicaci\u00f3n de anticuerpos monoclonales frente a toxinas marinas y al dinoflagelado alexandrium minutum<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Generaci\u00f3n y aplicaci\u00f3n de anticuerpos monoclonales frente a toxinas marinas y al dinoflagelado alexandrium minutum <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Mar\u00eda Elina Garet  Fern\u00e1ndez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Vigo<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 23\/10\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Ana Mar\u00eda Garc\u00eda Cabado<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Mar\u00eda  elsa Vazquez otero <\/li>\n<li>hans Kleivdal (vocal)<\/li>\n<li>Juan  Manuel Vieytes baptista de sousa (vocal)<\/li>\n<li>Fernando D\u00edaz espada (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Mar\u00eda Elina Garet Fern\u00e1ndez Con el fin de disminuir las p\u00e9rdidas econ\u00f3micas sufridas en acuicultura y el 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