{"id":104861,"date":"2010-12-11T00:00:00","date_gmt":"2010-12-11T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/desarrollo-de-metodos-anala%c2%adticos-avanzados-para-la-deteccion-y-caracterizaicon-de-organismos-modificados-geneticamente\/"},"modified":"2010-12-11T00:00:00","modified_gmt":"2010-12-11T00:00:00","slug":"desarrollo-de-metodos-anala%c2%adticos-avanzados-para-la-deteccion-y-caracterizaicon-de-organismos-modificados-geneticamente","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/tecnologia-de-los-alimentos\/desarrollo-de-metodos-anala%c2%adticos-avanzados-para-la-deteccion-y-caracterizaicon-de-organismos-modificados-geneticamente\/","title":{"rendered":"Desarrollo de m\u00e9todos anal\u00edticos avanzados para la detecci\u00f3n y caracterizaic\u00f3n de organismos modificados geneticamente."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Carlos Leon Canseco <\/strong><\/h2>\n<p>Esta memoria recoge los resultados m\u00e1s relevantes obtenidos en el desarrollo de metodolog\u00edas anal\u00edticas avanzadas para la determinaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de organismos modificados gen\u00e9ticamente en matrices alimentarias. La memoria est\u00e1 dividida en siete cap\u00edtulos. en el primero de ellos, se lleva a cabo una breve introducci\u00f3n sobre la situaci\u00f3n actual y la importancia de la caracterizaci\u00f3n y el an\u00e1lisis de los organismos modificados gen\u00e9ticamente en alimentos. Adem\u00e1s, se describen las principales t\u00e9cnicas instrumentales empleadas en el an\u00e1lisis de organismos modificados gen\u00e9ticamente, y se detallan algunas aplicaciones. Tambi\u00e9n se presenta el objetivo general de esta tesis doctoral. en el segundo cap\u00edtulo se describe el desarrollo de una metodolog\u00eda anal\u00edtica para la detecci\u00f3n de levaduras modificadas gen\u00e9ticamente en muestras de vino mediante la combinaci\u00f3n de una reaccion en cadena de la polimerasa (pcr) m\u00faltiple para la amplificaci\u00f3n de adn y su posterior an\u00e1lisis mediante electroforesis capilar en gel con detector de fluorescencia inducida por l\u00e1ser (cge-lif). Con el fin de evitar la inhibici\u00f3n de la amplificaci\u00f3n del adn debida a la presencia de polifenoles, taninos y otros compuestos presentes en los extractos de adn del vino, se lleva a cabo una optimizaci\u00f3n de las condiciones de extracci\u00f3n de adn a partir de vino. Posteriormente, se lleva a cabo la optimizaci\u00f3n de la pcr m\u00faltiple, empleando cge-lif. La elevada sensibilidad y resoluci\u00f3n de esta t\u00e9cnica la convierten en una herramienta ideal para el proceso de optimizaci\u00f3n de la pcr m\u00faltiple. La metodolog\u00eda desarrollada se aplic\u00f3 a la determinaci\u00f3n de la cepa recombinante ekd-13 de s. Cerevisiae en muestras de vino. en el tercer cap\u00edtulo, se lleva a cabo la comparaci\u00f3n de dos estrategias anal\u00edticas, una basada en el an\u00e1lisis mediante electroforesis capilar acoplada a un espectr\u00f3metro de masas de trampa de iones (ce-it-ms) y otra en el an\u00e1lisis mediante electroforesis capilar acoplada a un espectr\u00f3metro de masas de tiempo de vuelo (ce-tof-ms), para la detecci\u00f3n de la fracci\u00f3n proteica de las ze\u00ednas en muestras de ma\u00edz. En concreto, se estudia c\u00f3mo afecta la variaci\u00f3n de los par\u00e1metros instrumentales de los espectr\u00f3metros de masas a la detecci\u00f3n de estas prote\u00ednas. Esta comparaci\u00f3n concluye que la variaci\u00f3n de los par\u00e1metros instrumentales afecta en mayor medida a la determinaci\u00f3n de prote\u00ednas mediante ce-it-ms que mediante ce-tof-ms. Sin embargo, ambos procedimientos presentan l\u00edmites de detecci\u00f3n y reproducibilidad similares. Finalmente, las dos metodolog\u00edas de an\u00e1lisis se aplicaron a la determinaci\u00f3n de los perfiles de la fracci\u00f3n de ze\u00ednas en extractos de ma\u00edz transg\u00e9nico mon810 y su correspondiente variedad convencional, sin encontrar diferencias significativas entre ambos perfiles. en el cuarto cap\u00edtulo, se estudian las caracter\u00edsticas de tres nuevas ciclodextrinas como selectores quirales. Se analiza la resoluci\u00f3n, la sensibilidad, el tiempo de migraci\u00f3n y la eficacia, proporcionados por cada ciclodextrina en un tamp\u00f3n de separaci\u00f3n. posteriormente, se lleva a cabo el desarrollo de un m\u00e9todo de detecci\u00f3n de amino\u00e1cidos quirales mediante ce-tof-ms, empleando 0.5 mm de la ciclodextrina modificada seleccionada en el tamp\u00f3n de separaci\u00f3n. La baja concentraci\u00f3n de ciclodextrina necesaria para la separaci\u00f3n de los amino\u00e1cidos quirales permite la entrada directa del tamp\u00f3n de separaci\u00f3n en la interfase de electrospray originando s\u00f3lo una ligera reducci\u00f3n de la sensibilidad. La metodolog\u00eda desarrollada se emple\u00f3 para el an\u00e1lisis de amino\u00e1cidos quirales en muestras de vinagre, soja convencional y soja modificada gen\u00e9ticamente. Esta metodolog\u00eda ha permitido determinar peque\u00f1as variaciones entre las fracciones de amino\u00e1cidos quirales procedentes de soja transg\u00e9nica roundup readytm y convencional. en el quinto cap\u00edtulo, se lleva a cabo el desarrollo de un m\u00e9todo de an\u00e1lisis de perfiles metab\u00f3licos en muestras de soja transg\u00e9nica roundup readytm y soja convencional, mediante el empleo de ce-tof-ms. Para ello, se realiza una optimizaci\u00f3n de la extracci\u00f3n de metabolitos y de las condiciones de separaci\u00f3n y an\u00e1lisis. La aplicaci\u00f3n de la metodolog\u00eda desarrollada permiti\u00f3 detectar e identificar m\u00e1s de 40 metabolitos en muestras de soja. Asimismo, la comparaci\u00f3n de los perfiles metab\u00f3licos entre la soja transg\u00e9nica y su respectiva variedad convencional, permiti\u00f3 detectar diferencias significativas en la concentraci\u00f3n de los metabolitos entre ambos organismos. En concreto, destaca el metabolito 4-hidroxi-l-treonina que se detect\u00f3 en la variedad convencional de soja, y no se detect\u00f3 en la variedad transg\u00e9nica. el sexto cap\u00edtulo se presenta dividido en dos secciones. La primera secci\u00f3n aborda el desarrollo de un procedimiento anal\u00edtico en ce-tof-ms para la obtenci\u00f3n y comparaci\u00f3n de perfiles metab\u00f3licos en tres variedades de ma\u00edz transg\u00e9nico y sus correspondientes variedades convencionales. Esta metodolog\u00eda permiti\u00f3 detectar m\u00e1s de 25 metabolitos en cada una de las variedades de ma\u00edz. Adem\u00e1s, la comparaci\u00f3n de los perfiles metab\u00f3licos permiti\u00f3 detectar diferencias estad\u00edsticamente significativas entre las variedades transg\u00e9nicas y sus correspondientes variedades convencionales. En concreto, se ha demostrado que los metabolitos l-carnitina y estaquidrina, se encuentran en concentraciones m\u00e1s elevadas en las tres variedades transg\u00e9nicas investigadas que en sus respectivas variedades convencionales. La segunda secci\u00f3n se basa en un estudio pormenorizado de la composici\u00f3n de metabolitos en extractos de ma\u00edz transg\u00e9nico y convencional, mediante la combinaci\u00f3n de t\u00e9cnicas de espectrometr\u00eda de masas, con t\u00e9cnicas de separaci\u00f3n y t\u00e9cnicas de extracci\u00f3n. En esta secci\u00f3n se demuestra que la combinaci\u00f3n de la informaci\u00f3n de la movilidad electrofor\u00e9tica de los compuestos junto con la gran exactitud de la masa molecular proporcionada por un espectr\u00f3metro de masas de resonancia ion ciclotr\u00f3n con transformada de fourier (ft-icr-ms) es una estrategia apropiada para la identificaci\u00f3n de metabolitos. Adem\u00e1s, se demuestra que el empleo de t\u00e9cnicas de extracci\u00f3n selectiva (como la extracci\u00f3n con l\u00edquidos presurizados, ple) permite obtener informaci\u00f3n \u00fatil para la identificaci\u00f3n de metabolitos. Finalmente, mediante el empleo de estas t\u00e9cnicas se obtuvieron diferencias en los perfiles metab\u00f3licos entre las variedades transg\u00e9nicas de ma\u00edz y sus correspondientes variedades convencionales, sobre todo en algunas rutas relacionadas con el metabolismo de los amino\u00e1cidos. en el s\u00e9ptimo y \u00faltimo cap\u00edtulo se recogen las conclusiones finales de los trabajos realizados. En el anexo se presentan las publicaciones a las que esta tesis doctoral ha dado lugar.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Desarrollo de m\u00e9todos anal\u00edticos avanzados para la detecci\u00f3n y caracterizaic\u00f3n de organismos modificados geneticamente.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Desarrollo de m\u00e9todos anal\u00edticos avanzados para la detecci\u00f3n y caracterizaic\u00f3n de organismos modificados geneticamente. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Carlos Leon Canseco <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Aut\u00f3noma de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 12\/11\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Alejandro Cifuentes Gallego<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Mar\u00eda  Luisa Marina alegre <\/li>\n<li>ram\u00f3n Gonz\u00e1lez Garc\u00eda (vocal)<\/li>\n<li>ziad El rassi (vocal)<\/li>\n<li>Miguel \u00e1ngel Rodr\u00edguez delgado (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Carlos Leon Canseco Esta memoria recoge los resultados m\u00e1s relevantes obtenidos en el desarrollo de metodolog\u00edas anal\u00edticas 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