{"id":105105,"date":"2018-03-11T10:28:32","date_gmt":"2018-03-11T10:28:32","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-mediante-citometria-de-flujo-y-enzimoinmunoensayo-de-la-respuesta-inmune-en-ganado-vacuno-infestado-por-hypoderma-diptera-oestridae\/"},"modified":"2018-03-11T10:28:32","modified_gmt":"2018-03-11T10:28:32","slug":"estudio-mediante-citometria-de-flujo-y-enzimoinmunoensayo-de-la-respuesta-inmune-en-ganado-vacuno-infestado-por-hypoderma-diptera-oestridae","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/patologia-animal\/estudio-mediante-citometria-de-flujo-y-enzimoinmunoensayo-de-la-respuesta-inmune-en-ganado-vacuno-infestado-por-hypoderma-diptera-oestridae\/","title":{"rendered":"Estudio mediante citometr\u00eda de flujo y enzimoinmunoensayo de la respuesta inmune en ganado vacuno infestado por hypoderma (diptera: oestridae)"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Luis V\u00e1zquez Sande <\/strong><\/h2>\n<p>En la actualidad, es manifiesta la ausencia de relaci\u00f3n entre los niveles de inmunoglobulinas s\u00e9ricas y el grado de resistencia alcanzado por los animales infestados por hypoderma spp, por lo que, se sospecha que la respuesta celular que ha sido menos investigada hasta el momento, juegue tambi\u00e9n un papel importante en la respuesta protectora frente a esta parasitosis.   este estudio se ha proyectado con el fin de profundizar en la respuesta inmune celular y humoral durante las distintas fases del ciclo de hypoderma. Para ello se ha dividido la parte experimental en 3 apartados. En el primero se estudi\u00f3 mediante citometr\u00eda de flujo, hematolog\u00eda y elisa, la respuesta celular y humoral que se produce durante la fase esof\u00e1gica de h. Lineatum, empleando para ello animales infestados y no infestados sacrificados en matadero. La determinaci\u00f3n de los niveles circulantes del ant\u00edgeno hipodermina c no mostr\u00f3 diferencias significativas entre los grupos de animales analizados. Con respecto a las igg totales y la subclase igg1, se evidenciaron niveles significativamente m\u00e1s altos en las vacas que presentaban l-1 de h. Lineatum respecto del grupo de animales adultos no infestados y de los terneros. Los niveles de igg2 fueron menores en los terneros respecto de los adultos con y sin l-1 en la submucosa. Mediante anova no se encontraron diferencias estad\u00edsticamente significativas en las cifras de absorbancia de igm de los tres grupos de animales del estudio. El an\u00e1lisis con la citometr\u00eda de flujo de las poblaciones linfocitarias en sangre no evidenci\u00f3 diferencias entre los distintos grupos en cuanto al n\u00famero de linfocitos t maduros (cd2+), colaboradores (cd4+) y citot\u00f3xicos (cd8+), mientras que en los ganglios mediast\u00ednicos se observ\u00f3 que el porcentaje de linfocitos t maduros era significativamente menor en los adultos no infestados respecto del grupo de los terneros, y que el porcentaje de linfocitos cd4+ y cd8+ era mayor en los terneros que en los dos grupos de adultos infestados. El predominio de los linfocitos cd4+ frente a los cd8+ durante la fase esof\u00e1gica de h. Lineatum indicar\u00eda que en este periodo, las respuestas de tipo inflamatorio y las de memoria dependen en gran medida de los linfocitos t colaboradores.   en el segundo apartado, aplicando la citometr\u00eda de flujo y tambi\u00e9n la hematolog\u00eda y elisa, se hizo un an\u00e1lisis de la respuesta celular y humoral en el curso de las distintas fases del ciclo biol\u00f3gico de hypoderma, para lo que se emplearon vacas rubia gallega con infestaci\u00f3n natural. Se distribuyeron en 3 grupos de 7 animales cada uno: testigos no infestados, primoinfestados y reinfestados. Los niveles del ant\u00edgeno hipodermina c en suero mantuvieron relaci\u00f3n directa con las distintas fases del ciclo intraorg\u00e1nico de hypoderma. As\u00ed, en las fases iniciales, el tama\u00f1o reducido de las larvas condiciona un aumento moderado de los niveles de ant\u00edgeno circulante, mientras que en fases posteriores, coincidiendo con la permanencia de las larvas en el es\u00f3fago y su llegada al dorso, se alcanzaron los niveles m\u00e1ximos. La respuesta humoral durante el ciclo interno de hypoderma sigui\u00f3 un modelo secuencial, de modo que las igg2 aumentan con la llegada de las larvas al es\u00f3fago, en tanto que las igg1 incrementaron sus valores con la llegada de las larvas al dorso. Las igg totales fueron relativamente altas durante la fase esof\u00e1gica, y se mantuvieron as\u00ed durante la permanencia de las larvas en el dorso. Los niveles de igm apenas variaron a lo largo del ciclo de hypoderma. Con respecto a las distintas poblaciones linfocitarias, se observ\u00f3 un aumento significativo de los cd2+ en los animales primoinfestados en el mes de enero, mientras que en los reinfestados hubo un descenso significativo en junio y un aumento en febrero. El porcentaje de linfocitos t cd4+ y cd8+ en el grupo de animales primoinfestados no experimentaron variaciones significativas en el periodo de estudio y por el contrario, en los grupos reinfestados se apreci\u00f3 un descenso en agosto; en el caso de los cd4+ tambi\u00e9n se observaron aumentos significativos en las tomas de octubre y febrero. Con la t\u00e9cnica posthoc bonferroni no se hallaron diferencias entre los niveles de linfocitos cd2+, cd4+ y cd8+ en los grupos infestados. En suma, se ha evidenciado el predominio de los linfocitos colaboradores durante el ciclo de h. Lineatum, en particular en los animales reinfestados, lo que indicar\u00eda la intervenci\u00f3n de estas c\u00e9lulas en el desarrollo de resistencia frente al par\u00e1sito. En este cap\u00edtulo se ha incluido el an\u00e1lisis, mediante elisa s\u00e1ndwich, de varias citoquinas t\u00edpicas de una respuesta de tipo th1 (factor de necrosis tumoral, interferon-gamma e interleuquina 12) y th2 (interleuquina 10 e interleuquina 4). Una vez analizada la evoluci\u00f3n de las distintas citoquinas se deduce que, en condiciones naturales, no se puede establecer un patr\u00f3n de producci\u00f3n t\u00edpico de una respuesta tipo 1 o tipo 2. Adem\u00e1s la respuesta en los animales primo y reinfestados fue bastante similar para las citoquinas estudiadas, excepto para la il-10 donde se observ\u00f3 una elevaci\u00f3n m\u00e1s temprana en el ganado vacuno primoinfestado que en el reinfestado acompa\u00f1ada de mayor n\u00famero de larvas que completaron su ciclo, lo que subrayar\u00eda el papel particular de esta citoquina como inhibidor de las respuestas inmunitarias del hospedador.  el cap\u00edtulo 3 incluy\u00f3 un ensayo in vitro encaminado a estudiar el efecto inmunomodulador de los distintos ant\u00edgenos larvarios de h. Lineatum. Para su realizaci\u00f3n se obtuvieron c\u00e9lulas mononucleares de sangre perif\u00e9rica de dos grupos de vacas (n=4) de rubia gallega del mismo reba\u00f1o empleado para el cap\u00edtulo 2, es decir, sensibilizados y no sensibilizados frente a hypoderma spp. El test de linfoproliferaci\u00f3n mostr\u00f3 que la respuesta proliferativa debida al mit\u00f3geno concanavalina a en ausencia de ant\u00edgeno, result\u00f3 m\u00e1s intensa en los cultivos de los terneros que en el caso de los individuos adultos previamente sensibilizados. Los \u00edndices de estimulaci\u00f3n obtenidos con la hipodermina a fueron menores en todos los casos. As\u00ed pues, se evidenci\u00f3 la hya como el ant\u00edgeno que m\u00e1s inhib\u00eda la respuesta proliferativa, seguida por la hyb, la hyc y el et.   al analizar, mediante elisa s\u00e1ndwich en sobrenadantes de cultivos de cmsp, el efecto de los distintos ant\u00edgenos sobre la producci\u00f3n de las citoquinas, se vi\u00f3 que la estimulaci\u00f3n in vitro con hya aumentaba la concentraci\u00f3n de ifn-\u00c2\u00bf en los cultivos procedentes de los animales no infestados y de los previamente sensibilizados, respecto de los estimulados \u00fanicamente con el mit\u00f3geno. Por el contrario, en las cmsp incubadas con hyb y estimuladas por el mit\u00f3geno no hubo variaciones sustanciales de la producci\u00f3n de ifn-\u00c2\u00bf y tampoco la hyc determin\u00f3 variaciones significativas de la producci\u00f3n de esta citoquina. Curiosamente, el cultivo en presencia del extracto crudo larvario disminuy\u00f3 notablemente la producci\u00f3n del ifn-\u00c2\u00bf en los animales no infestados y en los previamente sensibilizados. La estimulaci\u00f3n de los cultivos con hya disminuy\u00f3 ligeramente la concentraci\u00f3n de il-4 en los animales sensibilizados y apenas la modific\u00f3 en los no sensibilizados. De igual modo, incubaci\u00f3n con la hyb y la hyc no origin\u00f3 cambios importantes en la producci\u00f3n de la il-4 en ambos grupos de animales. La estimulaci\u00f3n con hya produjo un descenso significativo de los niveles de il-10 en los no infestados y tambi\u00e9n en los ya sensibilizados. En cambio, no se hallaron diferencias significativas en los cultivos estimulados con hyb e hyc. De la misma forma, el cultivo en presencia del et disminuy\u00f3 significativamente la producci\u00f3n de il-10 en todos los animales estudiados.  el empleo del extracto total, fue seguido de un descenso considerable de la producci\u00f3n de las diferentes citoquinas lo que vendr\u00eda a reflejar lo sucedido en las infestaciones naturales. Este estudio ha puesto de manifiesto que, sobre las c\u00e9lulas de los animales previamente estimulados, el efecto del extracto crudo fue menos acentuado que el ejercido por cada hipodermina por separado; esto nos llevar\u00eda a pensar que cada hipodermina produce efectos individuales que de alguna forma podr\u00edan llegar a solaparse e incluso limitar sus efectos.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio mediante citometr\u00eda de flujo y enzimoinmunoensayo de la respuesta inmune en ganado vacuno infestado por hypoderma (diptera: oestridae)<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio mediante citometr\u00eda de flujo y enzimoinmunoensayo de la respuesta inmune en ganado vacuno infestado por hypoderma (diptera: oestridae) <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Luis V\u00e1zquez Sande <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Santiago de compostela<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 24\/11\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Rosario Panadero Font\u00e1n<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Santiago Hern\u00e1ndez rodr\u00edguez <\/li>\n<li>Francisco Javier Martinez moreno (vocal)<\/li>\n<li>rita S\u00e1nchez-andrade fern\u00e1ndez (vocal)<\/li>\n<li>david Reina esojo (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Luis V\u00e1zquez Sande En la actualidad, es manifiesta la ausencia de relaci\u00f3n entre los niveles de inmunoglobulinas 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