{"id":105153,"date":"2018-03-11T10:28:32","date_gmt":"2018-03-11T10:28:32","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/role-of-polynucleotide-phosphorylase-during-double-strand-break-recognition-in-b-subtilis\/"},"modified":"2018-03-11T10:28:32","modified_gmt":"2018-03-11T10:28:32","slug":"role-of-polynucleotide-phosphorylase-during-double-strand-break-recognition-in-b-subtilis","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/role-of-polynucleotide-phosphorylase-during-double-strand-break-recognition-in-b-subtilis\/","title":{"rendered":"Role of polynucleotide phosphorylase during double-strand break recognition in b. subtilis."},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de Paula Cardenas Mastrascusa <\/strong><\/h2>\n

Recn purificada de bacillus subtilis con un 98% de pureza parece poseer una actividad exonucleasa en adn de cadena sencilla (adncs), con polaridad 3\u00c2\u00bf\u00c2\u00bf5\u00c2\u00bf dependiente de mn2+. En este trabajo se encontr\u00f3 que la enzima polinucle\u00f3tido fosforilasa (pnpasa), encargada de regular el metabolismo de arn, y que se encontraba presente en aproximadamente un 0.2% de la muestra de recn purificada, era la responsable de tal actividad. Cuando recn era purificada de c\u00e9lulas con una mutaci\u00f3n nula en el gen pnpa (\u00c2\u00bfpnpa, codificante para pnpasa) la actividad nucleasa desaparec\u00eda. Sin embargo, el mismo patr\u00f3n de degradaci\u00f3n se obten\u00eda cuando pnpasa purificada se agregaba a la preparacion de recn purificada de c\u00e9lulas \u00c2\u00bfpnpa. en el presente trabajo se demuestra que pnpasa es capaz de degradar adncs en presencia de mn2+ y de bajas concentraciones de fosfato inorg\u00e1nico (pi). El procesamiento de adncs llevado a cabo por pnpasa es distributivo, se encuentra regulado por la presencia de atp \u00f3 datp, y es inhibido por la presencia de mg2+ \u00f3 de niveles altos de pi (< 100 \u00c2\u00bfm). Por el contrario, pnpasa puede degradar arn en presencia de mg2+ y niveles altos de pi (10 - 30 mm), lo que sugiere que las actividades degradativas llevadas a cabo por pnpasa en arn y en adncs, ocurren por mecanismos mutualmente exclusivos. adem\u00e1s, en este estudio se demostr\u00f3 in vitro que en presencia de mn2+ pnpasa tambien era capaz de polimerizar sin necesidad de molde en los extremos 3\u00c2\u00bf-oh de un adncs empleando dndps. Como estos resultados se obtuvieron despu\u00e9s de 5 d\u00e9cadas de investigaci\u00f3n en esta enzima, se pens\u00f3 que pod\u00edan ser algo exclusivo de b. Subtilis. Para comprobar lo anterior se purific\u00f3 pnpasa de escherichia coli, como representante de un g\u00e9nero evolutivamente distante, y se encontr\u00f3 que las actividades nucleasa y polimerasa estaban muy conservadas en ambos g\u00e9neros de bacterias. Tambi\u00e9n se observ\u00f3 que en ambas enzimas las variaciones en las concentraciones de dndps \u00f3 pi podrian estimular la degradaci\u00f3n \u00f3 polimerizaci\u00f3n de adncs, mientras que las de (d)atp inhib\u00edan ambas actividades. Adicionalmente se encontr\u00f3 que las prote\u00ednas recn y reca, pod\u00edan modular las actividades de la enzima pnpasa, a trav\u00e9s de la estimulaci\u00f3n de la reacci\u00f3n de polimerizaci\u00f3n \u00f3 la de degradaci\u00f3n, respectivamente. an\u00e1lisis gen\u00e9ticos demostraron que las c\u00e9lulas con una mutaci\u00f3n nula en pnpa (\u00c2\u00bfpnpa) eran m\u00e1s sensibles al tratamiento con h2o2 al compararlas con la cepa wt. tambi\u00e9n se encontr\u00f3 que la mutaci\u00f3n \u00c2\u00bfpnpa no era epist\u00e1tica con \u00c2\u00bfreca, ni con funciones que procesan los extremos a los que se une reca (adda, \u00c2\u00bfrecj), ni tampoco con funciones que procesan los intermediarios de recombinaci\u00f3n catalizados por reca (\u00c2\u00bfrecu, \u00c2\u00bfrecg); sin embargo, la mutaci\u00f3n \u00c2\u00bfpnpa s\u00ed era epist\u00e1tica con \u00c2\u00bfrecn y con \u00c2\u00bfku. Lo anterior parece indicar que pnpasa estar\u00eda involucrada en la fase temprana de reparaci\u00f3n de rupturas de doble cadena (rdc) antes de que se decida la v\u00eda de reparaci\u00f3n, ya sea por recombinaci\u00f3n hom\u00f3loga (rh), \u00f3 por uni\u00f3n de extremos no hom\u00f3logos (uenh). Estudios de microscop\u00eda de fluorescencia, indican que pnpasa debe ser una de las primeras prote\u00ednas en unirse a los extremos de adncs, ya que era necesaria para la formaci\u00f3n adecuada de un \u00fanico foco de recn (primera prote\u00edna que reconoce el lugar del da\u00f1o) por nucleoide luego de la inducci\u00f3n de rdc. los datos presentados en \u00e9ste trabajo indican que pnpasa estar\u00eda involucrada en diversas v\u00edas del metabolismo de los \u00e1cidos nucleicos. Los resultados obtenidos sugieren que en ausencia de rh, la actividad degradativa de pnpasa puede estar contribuyendo a la reparaci\u00f3n de la rdc, mediante la generaci\u00f3n del sustrato necesario para la uni\u00f3n de la prote\u00edna ku v\u00eda uenh.\n\n\n\n \n\n\n

Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abRole of polynucleotide phosphorylase during double-strand break recognition in b. subtilis.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
    \n
  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Role of polynucleotide phosphorylase during double-strand break recognition in b. subtilis. <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 Paula Cardenas Mastrascusa <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 Aut\u00f3noma de Madrid<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 25\/11\/2010<\/li>\n<\/ul>\n

     <\/p>\n

    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
      \n
    • Director de la tesis<\/strong>\n
        \n
      • Juan Carlos Alonso Navarro<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
          \n
        • Presidente del tribunal: andr\u00e9s Aguilera l\u00f3pez <\/li>\n
        • Jos\u00e9 Berenguer Carlos (vocal)<\/li>\n
        • humberto Sanchez gonzalez (vocal)<\/li>\n
        • Jos\u00e9 f\u00e9lix Prado velasco (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

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