{"id":105374,"date":"2010-02-12T00:00:00","date_gmt":"2010-02-12T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-in-vitro-de-la-inestabilidad-de-repeticiones-en-el-dna-por-errores-de-replicacion-del-tipo-deslizamiento-de-hebra\/"},"modified":"2010-02-12T00:00:00","modified_gmt":"2010-02-12T00:00:00","slug":"estudio-in-vitro-de-la-inestabilidad-de-repeticiones-en-el-dna-por-errores-de-replicacion-del-tipo-deslizamiento-de-hebra","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/acidos-nucleicos\/estudio-in-vitro-de-la-inestabilidad-de-repeticiones-en-el-dna-por-errores-de-replicacion-del-tipo-deslizamiento-de-hebra\/","title":{"rendered":"Estudio in vitro de la inestabilidad de repeticiones en el dna por errores de replicacion del tipo deslizamiento de hebra"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Mellissa Gissel Castillo Lizardo <\/strong><\/h2>\n<p>T\u00edtulo de la tesis: estudio in vitro de la inestabilidad de repeticiones en el dna por errores de replicaci\u00f3n del tipo deslizamiento de hebra la secuencias de dna repetidas est\u00e1n presentes en los tres dominios de la vida, siendo particularmente abundantes los genomas de organismos eucariontes, constituyendo alrededor de un 55% del genoma humano. Su complejidad varia desde repeticiones de mono, di y tri-nucle\u00f3tidos, hasta genes completos. Estas secuencias est\u00e1n frecuentemente asociadas a puntos calientes de mutaci\u00f3n e inestabilidad gen\u00f3mica, consistente en la p\u00e9rdida o ganancia de unidades repetidas. La inestabilidad de secuencias de dna repetidas est\u00e1 vinculada a m\u00e1s de 40 enfermedades neurol\u00f3gicas, neurodegenerativas y neuromusculares en humanos. La capacidad intr\u00ednseca de las secuencias repetidas de adoptar estructuras secundarias juega un papel muy importante en su inestabilidad, como consecuencia del procesamiento por la maquinaria de replicaci\u00f3n y\/o reparaci\u00f3n celular. en esta tesis hemos estudiado la inestabilidad de repeticiones como consecuencia del error de replicaci\u00f3n por deslizamiento de hebra. Para ello hemos realizado ensayos de extensi\u00f3n de cebador sobre moldes de dna conteniendo una estructura en horquilla flanqueada por dos repeticiones directas, que mimetizan la replicaci\u00f3n en la hebra retrasada. Por otro lado no se han detectado mol\u00e9culas expandidas por deslizamiento de hebra en el sistema experimental utilizado. Nuestros resultados muestran que las dos dna polimerasas replicativas de la arquea pyrococcus abyssi(pab), pol b y pol d, generan deleciones por deslizamiento de hebra. Adem\u00e1s pcna, la abrazadera deslizante de pao, inhibe el error por deslizamiento de hebra de pol b. Por otro lado, los modos de uni\u00f3n de la proteina de uni\u00f3n a dna de hebra simple (ssb) de escherichia coli afectan a la generaci\u00f3n de errores de replicaci\u00f3n por deslizamiento de hebra de la t7 dna polimerasa (t7 pol) pero no de la t4 dna polimerasa (t4 pol). Este efecto parece ser espec\u00edfico de la interacci\u00f3n ssb-t7 pol puesto que no se detect\u00f3 ning\u00fan efecto de la ssb del bacteri\u00f3fago t4 (gp 32) en el error por deslizamiento de hebra de t7 pol. adem\u00e1s, ssb en el modo de uni\u00f3n ssb(56), estimula la actividad de desplazamiento de hebra de t7 pol, siendo esta activaci\u00f3n la responsable de la inhibici\u00f3n del error por deslizamiento de hebra de t7 pol en presencia de ssb. Por lo tanto, el modo de uni\u00f3n de ssb al dna puede estimular la fidelidad de replicaci\u00f3n de secuencias repetidas de la t7 pol. Adem\u00e1s, hemos visualizado por microscop\u00eda de fuerza at\u00f3mica, los cambios del modo de uni\u00f3n de ssb a un dna molde conteniendo una estructura en horquilla, promovidos por un incremento en la concentraci\u00f3n de cloruro de magnesio. Por otro lado, hemos observado que la concentraci\u00f3n de magnesio en la reacci\u00f3n afecta a la actividad de desplazamiento de hebra y tiene un efecto sobre el error por deslizamiento de hebra de polimerasas mes\u00f3filas y term\u00f3filas que poseen esta actividad. adicionalmente, hemos estudiado el papel de las dna polimerasas humanas 5, 8 y n en la replicaci\u00f3n de dna moldes conteniendo estructuras en horquilla. Pol \u00f3 es capaz de replicar a trav\u00e9s de una estructura en horquilla con una eficiencia moderada, a diferencia de la polimerasa b humana, que se bloquea temporalmente en la base de la horquilla, aunque, en base al estudio de la cin\u00e9tica de la reacci\u00f3n, es capaz de extender estos productos bloqueados. Pol i, dependiendo del contexto de secuencia, genera expansiones cuando replica una estructura en horquilla, posiblemente por dislocaci\u00f3n del molde. El mutante de pol u (r387k), afectado en la regulaci\u00f3n de la actividad transferasa terminal, genera mayores expansiones que la forma silvestre cuando replica un molde conteniendo una estructura en horquilla. Adem\u00e1s, las formas silvestre y mutante de pol i replican de forma similar un molde con una estructura en horquilla o con un gap. por \u00faltimo, no se han detectado mol\u00e9cqlas expandidas por deslizamiento de hebra en el sistema experimental utilizado, sugiriendo que las expansiones en el dna podr\u00edan producirse por un mecanismo diferente al deslizamiento de hebra tras la disociaci\u00f3nd e la dna polimerasa.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio in vitro de la inestabilidad de repeticiones en el dna por errores de replicacion del tipo deslizamiento de hebra<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio in vitro de la inestabilidad de repeticiones en el dna por errores de replicacion del tipo deslizamiento de hebra <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Mellissa Gissel Castillo Lizardo <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 M\u00e1laga<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 02\/12\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Enrique Viguera M\u00ednguez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Luis Blanco d\u00e1vila <\/li>\n<li>marie agn\u00e9s Petit (vocal)<\/li>\n<li>Luis Menendez arias (vocal)<\/li>\n<li>Miguel angel Medina torres (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Mellissa Gissel Castillo Lizardo T\u00edtulo de la tesis: estudio in vitro de la inestabilidad de repeticiones en 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