{"id":105562,"date":"2010-10-12T00:00:00","date_gmt":"2010-10-12T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/genomica-funcional-de-la-interaccion-pseudomonas-savastanoi-pv-savastanoi-olivo\/"},"modified":"2010-10-12T00:00:00","modified_gmt":"2010-10-12T00:00:00","slug":"genomica-funcional-de-la-interaccion-pseudomonas-savastanoi-pv-savastanoi-olivo","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/microbiologia\/genomica-funcional-de-la-interaccion-pseudomonas-savastanoi-pv-savastanoi-olivo\/","title":{"rendered":"Genomica funcional de la interaccion pseudomonas savastanoi pv savastanoi-olivo"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Isabel Mar\u00eda Matas Casado <\/strong><\/h2>\n<p>T\u00edtulo de la tesis: gen\u00f3mica funcional de la interacci\u00f3n pseudomonas savastanoi pv. Savastanoi &#8211; olivo resumen: los procesos moleculares responsables de la interacci\u00f3n entre la bacteria causante de la tuberculosis del olivo, pseudomonas savastanoi pv. Savastanoi (psv), y su planta hu\u00e9sped, olea europaea l, son pr\u00e1cticamente desconocidos. Tras la penetraci\u00f3n de psv en los tejidos vegetales a trav\u00e9s de heridas, la multiplicaci\u00f3n del pat\u00f3geno desencadena una hipertrofia e hiperplasia de los mismos y, en consecuencia, la formaci\u00f3n de tumores. En este trabajo se plante\u00f3 como objetivo principal la identificaci\u00f3n de genes implicados en la virulencia y supervivencia de p. Savastanoi pv. Savastanoi en un hu\u00e9sped le\u00f1oso, el olivo. el an\u00e1lisis bioinform\u00e1tico de la secuencia del genoma de la cepa de referencia psv ncppb 3335, con 5232 regiones codificantes predichas, un tama\u00f1o total de 5.85 mb y un 57.12% g+c, revel\u00f3 una elevada conservaci\u00f3n con los genomas de pseudomonas syringae pv. Phaseolicola 1448a y p. Syringae pv. Tabaci 11528. El an\u00e1lisis comparativo de la secuencia del genoma de psv con el de los siete genomas secuenciados del complejo p. Syringae ha permitido caracterizar tanto los factores de virulencia conservados en este complejo bacteriano, como aquellos presentes \u00fanicamente en algunos patovares y que podr\u00edan determinar la especificidad de hospedador. Psv ncppb 3335 contiene doce regiones gen\u00f3micas variables, mayores de 10kb, que est\u00e1n ausentes en las cepas del complejo p. Syringae secuenciadas, asi como 71 genes espec\u00edficos de esta cepa. Entre los posibles factores de virulencia identificados, cabe destacar la existencia de una gran variedad de transportadores y rutas catab\u00f3licas posiblemente implicadas en la degradaci\u00f3n de compuestos arom\u00e1ticos de origen vegetal, asi como la duplicaci\u00f3n de secuencias relacionadas con la bios\u00edntesis de la fitohormona \u00e1cido indolac\u00e9tico. La b\u00fasqueda bioinform\u00e1tica de efectores del sistema de secreci\u00f3n tipo iii (t3es) en psv revel\u00f3 la existencia de 34 genes candidatos a t3es. Con el fin de determinar la validez de la predicci\u00f3n bioinform\u00e1tica llevada a cabo, se seleccionaron 6 t3es candidatos a los que se prob\u00f3 su translocaci\u00f3n a trav\u00e9s del sistema de secreci\u00f3n tipo iii (t3ss) utilizando un ensayo basado en la actividad adenilato ciclasa (cya). Los resultados obtenidos indican que 5 de est\u00edos 6 t3es se translocan a trav\u00e9s del t3ss de este pat\u00f3geno. De entre ellos, psva-1, psva-2 y hp-1017 se revelan como nuevos t3es dentro de complejo p. Syringae. en este trabajo se ha utilizado una estrategia de gen\u00f3mica funcional, signatura tagged mutagenesis (stm), para la identificaci\u00f3n de genes de psv necesarios para su multiplicaci\u00f3n e invasi\u00f3n del hospedador. Se construy\u00f3 una colecci\u00f3n de 4778 mutantes stm de la cepa de referencia psv ncppb 3335, cada uno de los cuales contienen un transpos\u00f3n min\u00c2\u00a1-tn5-km2 portador de una etiqueta diferente (regi\u00f3n variable de 40 pb). El an\u00e1lisis en masa de los mutantes, en grupos de aproximadamente 45, se realiz\u00f3 en plantas de olivo cultivadas in vhro. Treinta d\u00edas despu\u00e9s de la infecci\u00f3n, las etiquetas correspondientes a los mutantes cuya multiplicaci\u00f3n in planta se encuentra reducida no se detectan mediante hibridaci\u00f3n southern. Se han seleccionado 73 mutantes cuyas etiquetas no fueron detectadas, que presentan una \u00fanica inserci\u00f3n del transpos\u00f3n en su genoma y cuya competitrvidad se encuentra significativamente reducida \u00fanicamente in planta. La identificaci\u00f3n del punto de inserci\u00f3n del transpos\u00f3n ha revelado la identidad del gen interrumpido en todos estos mutantes. Los genes identificados se agrupan en siete categor\u00edas funcionales: 1) metabolismo central; 2) sistemas de secreci\u00f3n; 3) mantenimiento y envuelta celular; 4) tolerancia a estr\u00e9s y adaptaci\u00f3n ambiental; 5) prote\u00ednas relacionadas con dna; 6) prote\u00ednas hipot\u00e9ticas, y; 7) mutantes en genes que codifican prote\u00ednas con funciones diversas no relacionadas con las categor\u00edas anteriores. Tras determinar el papel en virulencia de la mayor\u00eda de los genes identificados realizando inoculaciones individuales en plantas de olivo le\u00f1osas, se analiz\u00f3 la estructural tumoral y la localizaci\u00f3n de c\u00e9lulas bacterianas, marcadas con gfp, en tumores de olivo in vhro inducidos por al menos un mutante perteneciente a cada una de las categor\u00edas anteriores. De este trabajo se concluy\u00f3 que la multiplicaci\u00f3n y persistencia de psv en los tejidos de olivo es dependiente de la bios\u00edntesis de al menos 9 de los 20 amino\u00e1cidos comunes que constituyen las prote\u00ednas, asi como de la bios\u00edntesis de las vitaminas biotina, cobalamina y tiamina, y de 3 genes posiblemente implicados en el transporte de citrato, glutamato y sulfato. Adem\u00e1s, la virulencia de psv en olivo es dependiente, entre otros factores, de la bios\u00edntesis de \u00e1cido indol-3-ac\u00e9tico, de la integridad de los sistemas de secreci\u00f3n tipo ii, iii y iv, asi como de la de genes posiblemente implicados en la detoxificaci\u00f3n de especies reactivas de oxigeno (mrsa, pqib y rubb), en la fluidez de membrana y en la bios\u00edntesis de peptidoglicano y exopolisac\u00e1ridos.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Genomica funcional de la interaccion pseudomonas savastanoi pv savastanoi-olivo<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Genomica funcional de la interaccion pseudomonas savastanoi pv savastanoi-olivo <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Isabel Mar\u00eda Matas Casado <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 M\u00e1laga<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 10\/12\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Cayo Juan Ramos Rodriguez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Antonio De vicente moreno <\/li>\n<li>Francisco m. Cazorla lopez (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda isabel Ramos gonz\u00e1lez (vocal)<\/li>\n<li>Jes\u00fas Mercado blanco (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Isabel Mar\u00eda Matas Casado T\u00edtulo de la tesis: gen\u00f3mica funcional de la interacci\u00f3n pseudomonas savastanoi pv. 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