{"id":105774,"date":"2018-03-11T10:29:28","date_gmt":"2018-03-11T10:29:28","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/iones-y-fosfola%c2%adpidos-como-efectores-en-la-estructura-y-estabilidad-del-canal-de-potasio-kcsa\/"},"modified":"2018-03-11T10:29:28","modified_gmt":"2018-03-11T10:29:28","slug":"iones-y-fosfola%c2%adpidos-como-efectores-en-la-estructura-y-estabilidad-del-canal-de-potasio-kcsa","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica-molecular\/iones-y-fosfola%c2%adpidos-como-efectores-en-la-estructura-y-estabilidad-del-canal-de-potasio-kcsa\/","title":{"rendered":"Iones y fosfol\u00edpidos como efectores en la estructura y estabilidad del canal de potasio kcsa"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Mar\u00eda Lourdes Renart P\u00e9rez <\/strong><\/h2>\n<p>Las prote\u00ednas de membrana, entre ellas los canales de potasio, son componentes muy importantes de todos los organismos vivos debido a su implicaci\u00f3n en los principales procesos biol\u00f3gicos y a su potencialidad como dianas de distintos f\u00e1rmacos.  El canal de potasio kcsa se identific\u00f3 y clon\u00f3 en 1995 a partir de la bacteria streptomyces lividans. Esta prote\u00edna presenta similitud funcional con muchos otros canales de potasio eucariotas y muestra a su vez una elevada homolog\u00eda con el canal eucariota kv2.1. Los estudios cristalogr\u00e1ficos demostraron que kcsa es un homotetr\u00e1mero organizado alrededor de un poro central que contiene el denominado filtro de selectividad. Existen adem\u00e1s dos segmentos transmembrana y dos dominios citoplasm\u00e1ticos (n y  c terminales). El tetr\u00e1mero es capaz de auto-ensamblarse en estructuras de peso molecular superior (clusters), tanto in vitro como in vivo. Esta variabilidad estructural se ve reflejada a su vez en una variabilidad funcional en la conducci\u00f3n y bloqueo del canal. Los estudios sobre plegamiento demostraron que el alcohol 2,2,2-trifluoroetanol (tfe) es capaz de desplegar y disociar al canal en sus mon\u00f3meros constituyentes. Este proceso es parcialmente reversible en detergente (ddm) y completamente reversible en sistemas de micelas mixtas detergente\/l\u00edpido. Recientemente ha sido descripto la inactivaci\u00f3n r\u00e1pida (tipo n) de kcsa por p\u00e9ptidos procedentes del canal eucariota shaker b. Esta investigaci\u00f3n tiene como objetivos profundizar en la investigaci\u00f3n de los mecanismos de modulaci\u00f3n del canal de k+ kcsa por iones conductores y bloquedores, tanto a nivel  de su ensamblaje supramolecular y acoplamiento, su plegamiento y estabilidad o su interacci\u00f3n con l\u00edpidos de membrana. Dado que se ha descripto la interacci\u00f3n de diferentes iones con kcsa, se comprob\u00f3 el efecto de cationes conductores y bloqueadores sobre la estructura y estabilidad del canal mediante la siguientes t\u00e9cnicas: espectroscopia de fluorescencia, espectroscopia de infrarrojo por transformada de fourier, dicroismo circular, sds-page, entre otras. La funcionalidad del canal se analiz\u00f3 utilizando la t\u00e9cnica de parche escindido (patch-clamp) en liposomas gigantes de asolectina. Se utilizaron la prote\u00edna salvaje (kcsa wild type) y diferentes mutantes obtenidos previamente por ingenier\u00eda gen\u00e9tica, que nos permitieron identificar zonas de la prote\u00edna asociadas a potenciales cambios en la estructura en diferentes situaciones i\u00f3nicas. Los resultados obtenidos indican que la interacci\u00f3n de kcsa silvestre con k+ y na+ induce ligeras modificaciones en la estructura secundaria y terciaria del canal, que conducen a variaciones muy importantes en la estabilidad proteica, tanto qu\u00edmica como t\u00e9rmica. La uni\u00f3n de k+ a kcsa silvestre induce la formaci\u00f3n consecutiva de un estado no conductor, de elevada afinidad por el cati\u00f3n; y de un estado conductor, de baja afinidad y elevada estabilidad qu\u00edmica y t\u00e9rmica; mientras que la uni\u00f3n de na+ a kcsa silvestre se caracteriza por la formaci\u00f3n de un \u00fanico estado no conductor, de modera estabilidad qu\u00edmica y t\u00e9rmica. Los cambios estructurales y de estabilidad observados en kcsa se originan en el equilibrio entre conformaciones conductoras y no conductoras del filtro de selectividad, confirmado a trav\u00e9s de las mutaciones puntuales e71a y m96v, que afectan la estructura y estabilidad de kcsa a trav\u00e9s de la alteraci\u00f3n del equilibrio conformacional del filtro de selectividad y sus consecuencias sobre la interacci\u00f3n con na+ y k+. La modificaci\u00f3n del equilibrio conformacional del filtro de selectividad a trav\u00e9s de las mutaciones e71a y m96v conduce a modificaciones en la conducci\u00f3n i\u00f3nica y en la selectividad k+\/na+. Por otra parte, la uni\u00f3n de fosfol\u00edpidos de carga negativa neta y de alquilsulfatos de 12 a 14 carbonos a los sitios no anulares de kcsa induce una elevada estabilizaci\u00f3n t\u00e9rmica del canal, promovida por el establecimiento de interacciones espec\u00edficas con ciertos amino\u00e1cidos, entre los que destacan las argininas 64 y 89. por lo tanto, los iones act\u00faan como efectores de kcsa actuando como cofactores alost\u00e9ricos, favoreciendo o desfavoreciendo una determinada conformaci\u00f3n proteica y manteniendo unidas las subunidades del canal a trav\u00e9s de las m\u00faltiples interacciones establecidas con la cavidad central y, principalmente, con el filtro de selectividad.  los fosfol\u00edpidos de carga negativa, por otra parte, act\u00faan como efectores de kcsa contribuyendo al mantenimiento de una estructura tetram\u00e9rica estable y actuando como efectores alost\u00e9ricos de la conformaci\u00f3n del filtro de selectividad, optimizando las interacciones que dan lugar al estado nativo conductor.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Iones y fosfol\u00edpidos como efectores en la estructura y estabilidad del canal de potasio kcsa<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Iones y fosfol\u00edpidos como efectores en la estructura y estabilidad del canal de potasio kcsa <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Mar\u00eda Lourdes Renart P\u00e9rez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Miguel hern\u00e1ndez de elche<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 16\/12\/2010<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Francisco Javier Gomez Perez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Jos\u00e9 manuel Sanchez ruiz <\/li>\n<li>pilar De la pe\u00f1a cortines (vocal)<\/li>\n<li>vicente Micol molina (vocal)<\/li>\n<li>rosa Mar\u00eda Planells cases (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Mar\u00eda Lourdes Renart P\u00e9rez Las prote\u00ednas de membrana, entre ellas los canales de potasio, son componentes muy 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