{"id":107523,"date":"2018-03-11T10:31:54","date_gmt":"2018-03-11T10:31:54","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/interacciones-de-oligomanosidos-con-el-anticuerpo-2g12-anti-vih-1-estudios-por-rmn-y-modelizacion-molecular\/"},"modified":"2018-03-11T10:31:54","modified_gmt":"2018-03-11T10:31:54","slug":"interacciones-de-oligomanosidos-con-el-anticuerpo-2g12-anti-vih-1-estudios-por-rmn-y-modelizacion-molecular","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sevilla\/interacciones-de-oligomanosidos-con-el-anticuerpo-2g12-anti-vih-1-estudios-por-rmn-y-modelizacion-molecular\/","title":{"rendered":"Interacciones de oligoman\u00f3sidos con el anticuerpo 2g12 (anti vih-1). estudios por rmn y modelizaci\u00f3n molecular."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Pedro Miguel Enr\u00edquez Navas <\/strong><\/h2>\n<p>La presente tesis doctoral titulada interacciones de oligoman\u00f3sidos con el anticuerpo 2g12 (antivih-1). Estudios por rmn y modelizaci\u00f3n molecular, estudia las interacciones entre el anticuerpo 2g12 y ciertos oligoman\u00f3sidos (lineales y ramificados) que son motivos estructurales de un glicano (tipo high-mannose) presente en la cubierta del virus del sida. La interacci\u00f3n entre este glicano y el anticuerpo 2g12 ha sido previamente determinada y estudiada por diferentes t\u00e9cnicas, pero nunca por rmn.  esta tesis se fundamenta en la nueva filosof\u00eda de trabajo para el dise\u00f1o racional de vacunas conocida como retrovaccinolog\u00eda, la cual  trata de desarrollar el mejor ant\u00edgeno para un anticuerpo previamente definido. As\u00ed, el caso particular de esta tesis se basa en el descubrimiento y aislamiento de anticuerpos que son capaces de neutralizar el vih (como lo es el anticuerpo 2g12) de pacientes infectados por el virus pero que no desarrollan la enfermedad del sida. se han caracterizado estructuralmente las interacciones de 9 oligoman\u00f3sidos, modelos de las distintas regiones potencialmente antig\u00e9nicas del glicano high-mannose, con el anticuerpo monoclonal humano 2g12 (anti-vih-1), en disoluci\u00f3n, mediante t\u00e9cnicas espectrosc\u00f3picas de rmn de observaci\u00f3n de ligando (std nmr y noe transferido). se han determinado experimentalmente los ep\u00edtopos de los oligoman\u00f3sidos para la interacci\u00f3n con el anticuerpo 2g12, a resoluci\u00f3n at\u00f3mica. Se han cuantificado te\u00f3ricamente los datos en disoluci\u00f3n, compar\u00e1ndolos, en los casos en los que fue posible, con algunas estructuras existentes en la literatura provenientes de cristalograf\u00eda de rayos x. La cuantificaci\u00f3n se ha realizado mediante c\u00e1lculos de matriz de relajaci\u00f3n completa e intercambio conformacional, implementados en el programa corcema-st. Todos los datos sugieren que los oligoman\u00f3sidos, como ligandos monovalentes, interaccionan exclusivamente con los sitios primarios de reconocimiento del anticuerpo. Los oligoman\u00f3sidos lineales son reconocidos por el extremo no reductor de la cadena oligosacar\u00eddica, verificando la importancia del resto disacar\u00eddico man\u00c2\u00bf1,2man en dicho extremo. Los ligandos ramificados interaccionan de forma diferente: el pentasac\u00e1rido (formalmente una repetici\u00f3n del disac\u00e1rido man\u00c2\u00bf1,2man) interacciona mediante dos modos de asociaci\u00f3n que se alternan en el sitio de reconocimiento primario, involucrando cada una de las dos ramas, con afinidades en el mismo orden de magnitud; por el contrario, el heptasac\u00e1rido, no natural (formalmente una repetici\u00f3n del trisac\u00e1rido man\u00c2\u00bf1,2man\u00c2\u00bf1,2man), interacciona de forma preferente mediante la rama natural (tipo d1). se ha verificado que el anticuerpo 2g12 es capaz de reconocer la ramificaci\u00f3n d2 del glicano high-mannose, mediante estudios de std nmr de las interacciones de dos ligandos mim\u00e9ticos de cada una de las ramas (d2 y d3) constituyentes del pentasac\u00e1rido. Estos datos han confirmado experimentalmente la validez de la interpretaci\u00f3n de los datos de rmn de la interacci\u00f3n del pentaman\u00f3sido, en t\u00e9rminos de una asociaci\u00f3n dual. Este modo de interacci\u00f3n no se hab\u00eda detectado en los estudios de cristalograf\u00eda de rayos x descritos en la literatura. se ha llevado a cabo un estudio minucioso de los factores experimentales que tienen una influencia marcada en las determinaciones experimentales de constantes de disociaci\u00f3n ligando-prote\u00edna mediante titulaciones de un solo ligando detectadas por espectroscop\u00eda std nmr. Se ha demostrado la elevada influencia en el resultado final que tienen los par\u00e1metros: tiempo de saturaci\u00f3n, intensidad std, y fracci\u00f3n de ligando enlazado. se han caracterizado los fen\u00f3menos f\u00edsico-qu\u00edmicos que son responsables en las desviaciones de las medidas de constantes de disociaci\u00f3n por std nmr. En condiciones de fracciones de ligando enlazado elevadas, la reasociaci\u00f3n del ligando tiene lugar en una escala de tiempos muy inferior a los tiempos caracter\u00edsticos de relajaci\u00f3n (selectivos) de los protones del ligando en el estado libre, y se produce una subestimaci\u00f3n de los factores std-af que lleva a una sobreestimaci\u00f3n final de la constante de disociaci\u00f3n determinada. se ha desarrollado un protocolo experimental: isoterma de asociaci\u00f3n de pendientes iniciales de crecimiento de los factores std, que se ha demostrado capaz de cancelar los efectos de los factores anteriormente identificados. Mediante dicho protocolo las medidas de constantes de disociaci\u00f3n por std nmr son comparables a las de otras t\u00e9cnicas (microcalorimetr\u00eda de titulaci\u00f3n isot\u00e9rmica, etc.) Y no presentan todos los problemas que se han identificado en la presente tesis doctoral, y algunos de los cuales ya hab\u00edan sido descritos en distintos trabajos a lo largo de la literatura. se ha aplicado el nuevo protocolo a las medidas de las constantes de disociaci\u00f3n de los oligoman\u00f3sidos y el anticuerpo 2g12. El m\u00ednimo elemento estructural constituyente del glicano high-mannose que confiere mayor afinidad por el anticuerpo 2g12 es el triman\u00f3sido man\u00c2\u00bf1,2man\u00c2\u00bf1,2man. El tetraman\u00f3sido tipo d1 presenta la misma afinidad, y el diman\u00f3sido man\u00c2\u00bf1,2man presenta una afinidad considerablemente inferior. Los ligandos ramificados presentan diferentes afinidades: el pentaman\u00f3sido una afinidad similar al diman\u00f3sido b\u00e1sico man\u00c2\u00bf1,2man, y el heptaman\u00f3sido mayor afinidad que \u00e9ste, pero inferior a las de tri- y tetraman\u00f3sido d1. se ha verificado la preferencia de reconocimiento molecular de la ramificaci\u00f3n d1 del heptaman\u00f3sido no natural por el anticuerpo 2g12, a pesar de que ambas ramas contienen el elemento estructural triman\u00f3sido identificado como requerimiento m\u00ednimo para la afinidad por el anticuerpo. Un estudio mediante std nmr para el ligando independiente mim\u00e9tico de la ramificaci\u00f3n no natural ha demostrado una ca\u00edda de cinco veces en la afinidad, respecto a la ramificaci\u00f3n d1 natural. se ha estudiado el efecto de la disposici\u00f3n espacial multivalente de los ligandos oligoman\u00f3sidos sobre las afinidades respectivas por el anticuerpo 2g12. A tal efecto se han utilizado nanopart\u00edculas de oro funcionalizadas con los distintos oligoman\u00f3sidos (gliconanopart\u00edculas), y sus afinidades se han determinado mediante titulaciones competitivas con los correspondientes oligoman\u00f3sidos monovalentes. En el caso del tetraman\u00f3sido d1 (man\u00c2\u00bf1,2man\u00c2\u00bf1,2man\u00c2\u00bf1,3man), se ha demostrado el beneficio termodin\u00e1mico de la disposici\u00f3n multivalente del oligoman\u00f3sido, incrementando la afinidad hasta dos \u00f3rdenes de magnitud.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Interacciones de oligoman\u00f3sidos con el anticuerpo 2g12 (anti vih-1). estudios por rmn y modelizaci\u00f3n molecular.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Interacciones de oligoman\u00f3sidos con el anticuerpo 2g12 (anti vih-1). estudios por rmn y modelizaci\u00f3n molecular. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Pedro Miguel Enr\u00edquez Navas <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Sevilla<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 23\/03\/2011<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jes\u00fas Angulo \u00e1lvarez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Miguel \u00e1ngel De la rosa acosta <\/li>\n<li>Jes\u00fas Jim\u00e9nez-barbero (vocal)<\/li>\n<li>pedro Manuel Nieto mesa (vocal)<\/li>\n<li>margarida Gair\u00ed tahull (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Pedro Miguel Enr\u00edquez Navas La presente tesis doctoral titulada interacciones de oligoman\u00f3sidos con el anticuerpo 2g12 (antivih-1). 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