{"id":108024,"date":"2018-03-11T10:32:38","date_gmt":"2018-03-11T10:32:38","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/trwc-una-relaxasa-conjugativa-con-actividad-de-integrasa-sitio-especa%c2%adfica-caracterizacion-de-la-reaccion-y-potencial-biotecnologico\/"},"modified":"2018-03-11T10:32:38","modified_gmt":"2018-03-11T10:32:38","slug":"trwc-una-relaxasa-conjugativa-con-actividad-de-integrasa-sitio-especa%c2%adfica-caracterizacion-de-la-reaccion-y-potencial-biotecnologico","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/microbiologia\/trwc-una-relaxasa-conjugativa-con-actividad-de-integrasa-sitio-especa%c2%adfica-caracterizacion-de-la-reaccion-y-potencial-biotecnologico\/","title":{"rendered":"Trwc, una relaxasa conjugativa con actividad de integrasa sitio-espec\u00edfica: caracterizaci\u00f3n de la reacci\u00f3n y potencial biotecnol\u00f3gico"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Leticia Ag\u00fandez Cort\u00e9s <\/strong><\/h2>\n<p>Trwc es la relaxasa del pl\u00e1smido conjugativo r388, responsable de la movilizaci\u00f3n del dna durante la conjugaci\u00f3n bacteriana. Trwc presenta actividad de endonucleasa sitio-espec\u00edfica y de transferasa de cadenas en su dominio n-terminal. Es una prote\u00edna con gran talento: a parte de su papel en conjugaci\u00f3n, trwc es una recombinasa sitio espec\u00edfica, capaz de actuar sobre dos repeticiones directas de su secuencia diana, el origen de transferencia (orit), presente en un pl\u00e1smido de doble cadena y en ausencia de conjugaci\u00f3n. M\u00e1s a\u00fan, trwc promueve la integraci\u00f3n de una mol\u00e9cula de dna transferida conjugativamente en la mol\u00e9cula receptora que contenga un orit diana. Hasta el momento, esta habilidad s\u00f3lo ha sido descrita para trwc y presenta gran potencial biotecnol\u00f3gico.   para conocer las bases moleculares, la reacci\u00f3n de integraci\u00f3n sitio-espec\u00edfica ha sido analizada en bacterias. Para ello, hemos estudiado los requerimientos de dna y prote\u00edna de la reacci\u00f3n. La reacci\u00f3n de integraci\u00f3n es altamente espec\u00edfica, trwc cataliza dicha reacci\u00f3n al reconocer su sustrato, el orit. Uno de los grandes logros de este trabajo ha sido demostrar que trwc puede catalizar integraci\u00f3n sitio-espec\u00edfica empleando como diana un orit m\u00ednimo de 17 pb. Adem\u00e1s, la reacci\u00f3n tambi\u00e9n tiene lugar cuando empleamos dianas naturales encontradas en el genoma humano que se asemejan al orit m\u00ednimo can\u00f3nico. Este hecho es de gran relevancia ya que trwc podr\u00eda disponer de secuencias diana naturales en el genoma humano para catalizar la reacci\u00f3n de integraci\u00f3n, lo cual convierte a trwc en una valiosa herramienta con fines biotecnol\u00f3gicos.   as\u00ed, el segundo objetivo de este trabajo ha sido el estudio del potencial de trwc como herramienta de ingenier\u00eda gen\u00f3mica. Este estudio ha sido abordado en tres pasos: introducci\u00f3n del complejo trwc-dna en c\u00e9lulas humanas, su entrada al n\u00facleo y la integraci\u00f3n sitio-espec\u00edfica del dna en dichas c\u00e9lulas. Para introducir los complejos trwc-dna en las c\u00e9lulas, por un lado, hemos manipulado los sistemas de secreci\u00f3n tipo iv (t4ss) de bacterias pat\u00f3genas para enviar dichos complejos a c\u00e9lulas humanas espec\u00edficas, y por otro, hemos utilizado la tecnolog\u00eda de los virus recombinantes basados en el virus adeno-asociado (aav). La localizaci\u00f3n de trwc en las c\u00e9lulas humanas es citoplasm\u00e1tica. Por pcr mutag\u00e9nica, hemos conseguido un mutante de trwc que se dirige al n\u00facleo y es funcional en conjugaci\u00f3n y en recombinaci\u00f3n. Por \u00faltimo, hemos establecido un ensayo episomal para detectar integraci\u00f3n sitio-espec\u00edfica en c\u00e9lulas humanas, empleando la tecnolog\u00eda de los virus aav recombinantes para introducir trwc y el dna en las c\u00e9lulas humanas apropiadas, que contienen episomas con la diana de trwc.   en este trabajo proponemos una nueva aplicaci\u00f3n biotecnol\u00f3gica de los sistemas conjugativos, un sistema de ingenier\u00eda gen\u00f3mica basado en el sistema conjugativo del pl\u00e1smido r388. Manipulando los t4ss y la prote\u00edna piloto trwc, junto con su habilidad \u00fanica para integrar sitio-espec\u00edficamente, podr\u00edamos establecer un nuevo sistema de modificaci\u00f3n gen\u00f3mica que contribuir\u00eda con ventajas en un gran n\u00famero de aplicaciones en biotecnolog\u00eda y biomedicina.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Trwc, una relaxasa conjugativa con actividad de integrasa sitio-espec\u00edfica: caracterizaci\u00f3n de la reacci\u00f3n y potencial biotecnol\u00f3gico<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Trwc, una relaxasa conjugativa con actividad de integrasa sitio-espec\u00edfica: caracterizaci\u00f3n de la reacci\u00f3n y potencial biotecnol\u00f3gico <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Leticia Ag\u00fandez Cort\u00e9s <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Cantabria<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 15\/04\/2011<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Matxalen Llosa Blas<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: manuel Espinosa padr\u00f3n <\/li>\n<li>ellen Zechner (vocal)<\/li>\n<li>cristina Mach\u00f3n sobrado (vocal)<\/li>\n<li>michael Linden (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Leticia Ag\u00fandez Cort\u00e9s Trwc es la relaxasa del pl\u00e1smido conjugativo r388, responsable de la movilizaci\u00f3n del dna 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