{"id":108242,"date":"2011-05-05T00:00:00","date_gmt":"2011-05-05T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudios-precla%c2%adnicos-de-la-terapia-genica-basada-en-celulas-madre-hematopoyeticas-para-el-mngie\/"},"modified":"2011-05-05T00:00:00","modified_gmt":"2011-05-05T00:00:00","slug":"estudios-precla%c2%adnicos-de-la-terapia-genica-basada-en-celulas-madre-hematopoyeticas-para-el-mngie","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudios-precla%c2%adnicos-de-la-terapia-genica-basada-en-celulas-madre-hematopoyeticas-para-el-mngie\/","title":{"rendered":"Estudios precl\u00ednicos de la terapia g\u00e9nica basada en c\u00e9lulas madre hematopoy\u00e9ticas para el mngie"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Javier Torres Torronteras <\/strong><\/h2>\n<p>El mngie (encefalomiopat\u00eda neurogastrointestinal mitocondrial) es una enfermedad autos\u00f3mica recesiva asociada con depleci\u00f3n y deleciones m\u00faltiples del adn mitocondrial (adnmt), causada por mutaciones en el gen tymp que codifica la timidina fosforilasa (tp). Los pacientes afectos de mngie presentan un cuadro cl\u00ednico que se caracteriza por dismotilidad gastrointestinal y caquexia, oftalmoplegia externa progresiva, neuropat\u00eda perif\u00e9rica, leucoencefalopat\u00eda, y evidencias de disfunci\u00f3n mitocondrial. Es una enfermedad cr\u00f3nica cuyos s\u00edntomas suelen aparecer en la adolescencia y producen una degeneraci\u00f3n progresiva de los pacientes, que tienen una esperanza de vida media de 37 a\u00f1os.  la tp es la enzima que inicia el catabolismo de los nucle\u00f3sidos timidina (thd) y desoxiuridina (durd), que a su vez pueden ser fosforilados a sus formas desoxinucle\u00f3sido trifosfato mediante la v\u00eda de salvamento. Como consecuencia de la disfunci\u00f3n de la tp, en los pacientes de mngie se produce un aumento considerable de la concentraci\u00f3n de thd y durd a nivel sist\u00e9mico. Ello da lugar a un incremento en las concentraciones intracelulares del nucle\u00f3tido dttp y, como consecuencia, se produce un desequilibrio en la proporci\u00f3n de los cuatro nucle\u00f3tidos que interfiere con la correcta replicaci\u00f3n y mantenimiento del adnmt en c\u00e9lulas quiescentes. todas las estrategias desarrolladas para el tratamiento del mngie hasta el momento se han dirigido a reducir la concentraci\u00f3n sist\u00e9mica de thd y durd; sin embargo, la \u00fanica terapia que ha demostrado ser efectiva es el trasplante alog\u00e9nico de progenitores hematopoy\u00e9ticos, ya que es capaz de restablecer la actividad tp y reducir la concentraci\u00f3n de thd y durd de forma permanente en aquellos pacientes que sobreviven al trasplante. No obstante este tratamiento conlleva unos considerables \u00edndices de morbilidad y mortalidad, y los pacientes de mngie son especialmente vulnerables ya que suelen presentar un estado de salud muy deteriorado en el momento de ser tratados. Ello obliga a considerar el desarrollo de terapias alternativas. la terapia g\u00e9nica permite la correcci\u00f3n del defecto gen\u00e9tico en algunas c\u00e9lulas o tejidos de los pacientes, mediante el uso de vectores para introducir una copia funcional del gen afectado. Su aplicaci\u00f3n mediante el trasplante aut\u00f3logo de progenitores hematopoy\u00e9ticos corregidos gen\u00e9ticamente ha demostrado ser efectivo en el tratamiento de algunas enfermedades, evitando la necesidad de buscar un donante apropiado y reduciendo los riesgos asociados al trasplante alog\u00e9nico. el hecho de que el mngie sea una enfermedad monog\u00e9nica, y de que su tratamiento requiera la reducci\u00f3n sist\u00e9mica de metabolitos sin necesidad de restituir la actividad enzim\u00e1tica a un tejido determinado, hace de esta enfermedad un candidato ideal para la terapia g\u00e9nica. En este trabajo hemos investigado mediante estudios precl\u00ednicos la posibilidad de aplicar la terapia g\u00e9nica dirigida al tejido hematopoy\u00e9tico como una alternativa terap\u00e9utica para el mngie. para demostrar la viabilidad de esta aproximaci\u00f3n construimos un vector lentiviral con las secuencias codificantes del gen tymp y de la prote\u00edna verde fluorescente (egfp), bajo el control del promotor de la fosfoglicerato quinasa humana (hpgk), y realizamos estudios precl\u00ednicos de correcci\u00f3n g\u00e9nica en un modelo de c\u00e9lulas linfoblastoides b (b-lcls) provenientes de pacientes de mngie. Asimismo, estudiamos los efectos del trasplante sing\u00e9nico de c\u00e9lulas progenitoras hematopoy\u00e9ticas transducidas en un modelo murino de la enfermedad (doble knockout tymp-\/- upp1-\/-). los resultados obtenidos en el modelo celular demostraron que la transducci\u00f3n con el vector terap\u00e9utico es capaz de restituir la actividad tp en b-lcls de pacientes hasta valores por encima de los observados en b-lcls de controles sanos. Los estudios del metabolismo de nucle\u00f3sidos y nucle\u00f3tidos demostraron que el restablecimiento de la actividad enzim\u00e1tica permite la degradaci\u00f3n del exceso de nucle\u00f3sidos en el medio de cultivo hasta concentraciones indetectables y no interfiere en el equilibrio intracelular de los nucle\u00f3sidos trifosfato de las b-lcls. La sobreexpresi\u00f3n de la tp no afect\u00f3 al ciclo celular de las c\u00e9lulas transducidas. se estudi\u00f3 la estabilidad de la expresi\u00f3n de la tp en la l\u00ednea celular inmortalizada humana hek293t y en una l\u00ednea b-lcl derivada de un paciente. En ambos casos se alcanzaron actividades tp elevadas que se mantuvieron estables a largo plazo, lo que demuestra que nuestro vector es capaz de dirigir la expresi\u00f3n de la prote\u00edna funcional de manera estable, y que esta restituci\u00f3n no resulta t\u00f3xica. en el modelo animal se puso a punto un protocolo de trasplante sing\u00e9nico de progenitores hematopoy\u00e9ticos corregidos gen\u00e9ticamente, que consisti\u00f3 en obtener m\u00e9dula \u00f3sea de ratones donantes y hacer un enriquecimiento en progenitores hematopoy\u00e9ticos (lin-). Los progenitores eran transducidos y trasplantados en ratones acondicionados mediante irradiaci\u00f3n total corporal a dosis subletales (6 gy), que en experimentos preliminares hab\u00edamos demostrado que garantizaba un injerto a largo plazo. el seguimiento de los ratones trasplantados con progenitores hematopoy\u00e9ticos transducidos con el vector terap\u00e9utico demostr\u00f3 que, un mes despu\u00e9s del trasplante, hab\u00eda una recuperaci\u00f3n de la actividad tp en sangre asociada a una restituci\u00f3n del metabolismo de los nucle\u00f3sidos que reduc\u00eda la concentraci\u00f3n de thd y durd hasta valores t\u00edpicos de los ratones salvajes, y se mantuvo as\u00ed hasta el final del estudio, 6 meses despu\u00e9s del trasplante. el an\u00e1lisis del quimerismo en m\u00e9dula \u00f3sea nos permiti\u00f3 determinar que el tratamiento era efectivo con un bajo porcentaje de c\u00e9lulas de m\u00e9dula \u00f3sea corregidas gen\u00e9ticamente, que oscilaba entre el 5 y el 28%. Los contajes diferenciales de los diferentes tipos celulares en sangre perif\u00e9rica eran normales. Adem\u00e1s, se observ\u00f3 que los progenitores transducidos daban lugar a c\u00e9lulas maduras de los linajes mieloide y linfoide. en conclusi\u00f3n, el vector lentiviral con la regi\u00f3n codificante del gen tymp es capaz de transducir y expresar de forma estable la tp dando lugar al restablecimiento de la actividad tp, lo que permite la normalizaci\u00f3n del metabolismo de los nucle\u00f3sidos in vitro e in vivo. La expresi\u00f3n g\u00e9nica a partir del vector lentiviral no afecta a la viabilidad de las c\u00e9lulas transducidas ni a la diferenciaci\u00f3n del tejido hematopoy\u00e9tico. Adem\u00e1s, el tratamiento es efectivo en ratones a bajos niveles de quimerismo molecular, lo cual permite reducir las dosis de vectores lentivirales para la transducci\u00f3n, as\u00ed como el grado de mieloablaci\u00f3n necesario para el trasplante. Este trabajo demuestra que la terapia g\u00e9nica basada en c\u00e9lulas madre hematopoy\u00e9ticas para el mngie es viable y que esta enfermedad presenta una serie de ventajas para una futura aplicaci\u00f3n de esta alternativa terap\u00e9utica, aunque son necesarios m\u00e1s estudios que pongan de manifiesto su eficacia y seguridad a largo plazo.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudios precl\u00ednicos de la terapia g\u00e9nica basada en c\u00e9lulas madre hematopoy\u00e9ticas para el mngie<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudios precl\u00ednicos de la terapia g\u00e9nica basada en c\u00e9lulas madre hematopoy\u00e9ticas para el mngie <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Javier Torres Torronteras <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Aut\u00f3noma de barcelona<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 05\/05\/2011<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Ram\u00f3n Mart\u00ed Seves<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: joan xavier Comella carnice <\/li>\n<li>Juan  Antonio Bueren roncero (vocal)<\/li>\n<li>  (vocal)<\/li>\n<li>  (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Javier Torres Torronteras El mngie (encefalomiopat\u00eda neurogastrointestinal mitocondrial) es una enfermedad autos\u00f3mica recesiva asociada con depleci\u00f3n y [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[1],"tags":[217060,41179,17439,143098],"class_list":["post-108242","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-sin-categoria","tag-javier-torres-torronteras","tag-joan-xavier-comella-carnice","tag-juan-antonio-bueren-roncero","tag-ramon-marti-seves"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/108242","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=108242"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/108242\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=108242"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=108242"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=108242"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}