{"id":109661,"date":"2018-03-11T10:35:11","date_gmt":"2018-03-11T10:35:11","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-molecular-de-la-deficiencia-congenita-de-antitrombina\/"},"modified":"2018-03-11T10:35:11","modified_gmt":"2018-03-11T10:35:11","slug":"estudio-molecular-de-la-deficiencia-congenita-de-antitrombina","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/hematologia\/estudio-molecular-de-la-deficiencia-congenita-de-antitrombina\/","title":{"rendered":"Estudio molecular de la deficiencia cong\u00e9nita de antitrombina"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Consuelo Martinez Redondo <\/strong><\/h2>\n<p>La antitrombina es una prote\u00edna que pertenece a la familia de las serpinas. Es el anticoagulante end\u00f3geno m\u00e1s potente y su deficiencia predispone a la aparici\u00f3n de eventos tromb\u00f3ticos, especialmente en territorio venoso. Cl\u00e1sicamente la deficiencia cong\u00e9nita de antitrombina se ha clasificado en dos tipos: el tipo i, caracterizado por un d\u00e9ficit cuantitativo de antitrombina, en el que el alelo mutado no se traduce en ninguna prote\u00edna, y el tipo ii, que se define por la presencia en el plasma de una forma mutada de la prote\u00edna con funci\u00f3n anticoagulante significativamente alterada. Su diagn\u00f3stico se basa en pruebas funcionales que miden la actividad anti-factor x activado en plasma y en m\u00e9todos antig\u00e9nicos (agat) que miden la cantidad de prote\u00edna en plasma. Sin embargo, el an\u00e1lisis molecular no se realiza de forma rutinaria. El gen de la antitrombina (serpinc1) se localiza en el brazo largo del cromosoma 1 (q23-q25.1) y est\u00e1 compuesto por siete exones. Hasta el momento se han descrito 235 mutaciones diferentes en este gen asociadas a deficiencia cong\u00e9nita de antitrombina (human gene mutation database, hgmd\u00c2\u00bf). \tnuestro grupo de investigaci\u00f3n es centro de referencia para el estudio molecular del gen serpinc1 en pacientes con deficiencia de antitrombina, contando con una de las series m\u00e1s largas de deficiencias de antitrombina, estudiadas en un \u00fanico centro, de las descritas hasta ahora en la literatura. objetivos \tel objetivo principal de este trabajo de tesis doctoral es realizar la caracterizaci\u00f3n molecular de la deficiencia cong\u00e9nita de antitrombina, correlacionando dichos resultados con las caracter\u00edsticas cl\u00ednicas y funcionales. Como objetivo secundario se plantea elaborar un protocolo de estudio molecular del gen serpinc1 en pacientes con sospecha de deficiencia de antitrombina. material y m\u00e9todos \tse ha estudiado un total de 119 muestras con sospecha de deficiencia cong\u00e9nita de antitrombina, remitidas por diferentes hospitales espa\u00f1oles, de portugal e israel. Inicialmente se ha confirmado el diagn\u00f3stico de deficiencia de antitrombina mediante la determinaci\u00f3n de la actividad anti-fxa plasm\u00e1tica por m\u00e9todos cromog\u00e9nicos, y de los niveles plasm\u00e1ticos de agat por m\u00e9todo inmunol\u00f3gico, aceptando finalmente para el estudio de mutaciones 87 muestras. El estudio molecular se ha realizado en las muestras de adn gen\u00f3mico de los pacientes, mediante amplificaci\u00f3n por pcr de los siete exones del gen serpinc1 y posterior secuenciaci\u00f3n de cada ex\u00f3n y sus regiones intr\u00f3nicas flanqueantes, mediante un sistema de electroforesis capilar (applied biosystems 3130xl), abordando inicialmente los exones de mayor tama\u00f1o. Cada mutaci\u00f3n encontrada se ha confirmado realizando una nueva amplificaci\u00f3n y secuenciaci\u00f3n del ex\u00f3n afectado y, en los casos en que ha sido posible, se ha realizado el estudio en otros miembros afectos de la familia. La detecci\u00f3n de grandes deleciones se ha realizado mediante la t\u00e9cnica de mlpa. El estudio se ha completado mediante determinaci\u00f3n de otras alteraciones protromb\u00f3ticas cong\u00e9nitas (factor v leiden, protrombina g20210a, d\u00e9ficit de prote\u00edna c y prote\u00edna s). resultados y discusi\u00f3n \tde las 87 muestras estudiadas, 67 presentaban una deficiencia cl\u00e1sica de antitrombina (&lt;70% de actividad anti-fxa), de las cuales 40 eran tipo i y 27 eran tipo ii. Veinte casos presentaban una deficiencia moderada (70-90% de actividad anti-fxa) con historia personal o familiar que suger\u00eda alguna alteraci\u00f3n en la antitrombina. De este \u00faltimo grupo se ha identificado la mutaci\u00f3n responsable de la deficiencia en 4 casos, siendo en todos ellos la mutaci\u00f3n a384s (antitrombina cambridge ii). En el grupo de deficiencias cl\u00e1sicas, se ha identificado la mutaci\u00f3n responsable en 66 casos, de los cuales 38 presentaban mutaciones ya descritas previamente en la literatura (22 mutaciones diferentes) y 28 casos presentaban mutaciones nuevas no descritas previamente (26 mutaciones diferentes). Once casos mostraban adem\u00e1s alguna otra alteraci\u00f3n protromb\u00f3tica cong\u00e9nita, mostrando una tendencia a la presentaci\u00f3n de eventos tromb\u00f3ticos m\u00e1s severos y a edades m\u00e1s tempranas. \ten cuanto al tipo de mutaci\u00f3n identificada, las que provocan un cambio de sentido son las m\u00e1s frecuentes. La consecuencia del cambio de amino\u00e1cido depende del residuo afectado, su relevancia funcional y estructural, de modo que aquellos que afectan a residuos localizados en dominios funcionalmente relevantes (dominio de uni\u00f3n a heparina, centro reactivo o la hebra c) suelen asociarse a deficiencias tipo ii. Mientras, los cambios que afectan a residuos conservados en la familia de las serpinas o localizados en regiones relevantes para la movilidad de la mol\u00e9cula, pueden tener consecuencias conformacionales que impiden el correcto plegamiento de la prote\u00edna, inducen la formaci\u00f3n de olig\u00f3meros e impiden su secreci\u00f3n, dando lugar a deficiencias con fenotipo de tipo i. Aquellas mutaciones que provocan la aparici\u00f3n de un cod\u00f3n de parada prematuro se asocian invariablemente con deficiencias tipo i. Hemos descrito el primer caso conocido de mutaci\u00f3n compleja, sin cambio en la pauta de lectura, asociada a deficiencia tipo ii. En dos casos con deficiencia moderada de antitrombina no se ha identificado ninguna mutaci\u00f3n en el gen serpinc1, pero los estudios bioqu\u00edmicos realizados posteriormente sugieren la existencia de alteraciones en otros genes implicados en el procesamiento post-traduccional de la prote\u00edna.  \ten solamente 1 caso con deficiencia cl\u00e1sica de antitrombina no se ha identificado ninguna mutaci\u00f3n. El protocolo propuesto de estudio de mutaciones en el gen serpinc1 consigue identificar la mutaci\u00f3n responsable en el 98.6% de casos con deficiencia de antitrombina con un coste por determinaci\u00f3n bajo. conclusi\u00f3n \tel estudio molecular del gen serpinc1 en pacientes con deficiencia de antitrombina permite la identificaci\u00f3n de nuevas mutaciones y contribuye a identificar nuevos mecanismos implicados en la deficiencia de este potente anticoagulante, alguno de los cuales puede extrapolarse al resto de serpinas.             doctorando d\u00f1a. Consuelo mart\u00ednez redondo. Licenciada en medicina. M\u00e9dico especialista en hematolog\u00eda y hemoterapia. directores del proyecto de tesis &#8211;\tdr. Javier corral de la calle. Profesor contratado doctor del departamento de medicina interna de la universidad de murcia. &#8211;\tdra. Ana isabel ant\u00f3n garc\u00eda. Doctora del grupo de hematolog\u00eda y oncolog\u00eda experimental del departamento de medicina interna de la universidad de murcia. &#8211;\tdra. Irene mart\u00ednez mart\u00ednez. . Doctora del grupo de hematolog\u00eda y oncolog\u00eda experimental del departamento de medicina interna de la universidad de murcia.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio molecular de la deficiencia cong\u00e9nita de antitrombina<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio molecular de la deficiencia cong\u00e9nita de antitrombina <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Consuelo Martinez Redondo <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Murcia<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 30\/06\/2011<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Ana Isabel Anton Garcia<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: vicente Vicente garcia <\/li>\n<li>rogelio Gonzalez sarmiento (vocal)<\/li>\n<li>jordi Fontcuberta boj (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda fernanda L\u00f3pez fern\u00e1ndez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Consuelo Martinez Redondo La antitrombina es una prote\u00edna que pertenece a la familia de las serpinas. 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