{"id":109723,"date":"2011-01-07T00:00:00","date_gmt":"2011-01-07T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/engineering-apolipoprotein-a-i-as-a-molecular-scaffold-generation-of-interapo\/"},"modified":"2011-01-07T00:00:00","modified_gmt":"2011-01-07T00:00:00","slug":"engineering-apolipoprotein-a-i-as-a-molecular-scaffold-generation-of-interapo","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica\/engineering-apolipoprotein-a-i-as-a-molecular-scaffold-generation-of-interapo\/","title":{"rendered":"Engineering apolipoprotein a-i as a molecular scaffold: generation of interapo"},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de Jessica Fioravanti <\/strong><\/h2>\n

El interfer\u00f3n fue descubierto hace m\u00e1s de 50 a\u00f1os, como un inhibidor de la replicaci\u00f3n del virus influenza. Actualmente la familia de citoquinas de ifn se reconoce como un componente clave en la respuesta sistema inmune innato, y en la primera l\u00ednea de defensa frente a infecciones virales. La corta vida media del ifnα sin modificar hace necesaria la administraci\u00f3n frecuente del f\u00e1rmaco durante largos periodos de tiempo. Por ello se han estudiado varias estrategias para conseguir la estabilizaci\u00f3n de la prote\u00edna, como la uni\u00f3n del ifnα a polietilenglicol, o la fusi\u00f3n g\u00e9nica de la alb\u00famina con el ifnα. a pesar de su eficacia cl\u00ednica, el tratamiento con ifnα produce efectos secundarios: (i) neuropsiqui\u00e1tricos, (ii) trombocitopenia, (iii) y leucopenia. Por ello planteamos que la vectorizaci\u00f3n de ifn al h\u00edgado, favorezca su actividad localizada, y disminuya los efectos adversos. se identific\u00f3 una prote\u00edna fisiol\u00f3gica, que no desencadene respuesta inmunol\u00f3gica frente a s\u00ed, con una larga vida media, y de localizaci\u00f3n hep\u00e1tica: las lipoprote\u00ednas de alta densidad (hdls) poseen propiedades anti-aterog\u00e9nicas, debido a que pueden retirar el colesterol de las arterias, y transportarlo de vuelta al h\u00edgado para su excreci\u00f3n. Dichos efectos son principalmente debidos a la apolipoprote\u00edna a-i (apoa-i), prote\u00edna mayoritaria de la part\u00edcula de hdl. La apo a-i es una prote\u00edna de bajo peso molecular, que una vez libre en plasma mayoritariamente se acompleja formando hdls, mientras que s\u00f3lo el 3.7%-8.1% restante circula en la forma libre. La vida media de la apo a-i es de 15 – 54 h. Se ha demostrado adem\u00e1s que tras la administraci\u00f3n sist\u00e9mica de apo a-i, \u00e9sta se biolocaliza en el h\u00edgado. se clonaron los genes del ifnα de rat\u00f3n seguido del gen de la apo a-i murina. Este pl\u00e1smido codifica para una prote\u00edna de fusi\u00f3n que a partir de ahora denominamos interapo (ia). La administraci\u00f3n de esta prote\u00edna quim\u00e9rica, tanto por v\u00eda de terapia g\u00e9nica, como por inyecci\u00f3n intravenosa de la prote\u00edna recombinante, demostr\u00f3 un aumento de la vida media del ifnα de 2.6 a 5 veces. otro aspecto fundamental estudiado fue la biodistribuci\u00f3n. Tras 150 min. De tratamiento con 1\u00c2\u00b5g de rifn o ria hemos demostrado que podemos detectar por elisa la presencia de ria mayoritariamente en h\u00edgado, y trazas tambi\u00e9n a nivel pulmonar y de bazo, mientras que a ese tiempo no es posible detectar rifn en ning\u00fan \u00f3rgano. La actividad de los interferones de tipo i est\u00e1 mediada por prote\u00ednas codificadas por genes inducibles por interfer\u00f3n (isgs). Para comprobar si la construcci\u00f3n quim\u00e9rica manten\u00eda dicha capacidad, se analiz\u00f3 los niveles de arnm de 2\u00c2\u00bf-5\u00c2\u00bf oas, usp18, e isg15 tres d\u00edas tras la inyecci\u00f3n hidrodin\u00e1mica o 24 h tras la inyecci\u00f3n intravenosa de las prote\u00ednas recombinantes. Las construcciones quim\u00e9ricas aumentan los niveles de arnm de los isgs estudiados en h\u00edgado, indicando la dianizaci\u00f3n al h\u00edgado de la construcci\u00f3n. hemos aislado el gen de la apo a-i de marmota. Esto ha permitido generar la proteina interapo de marmota monax, \u00fanico animal que sufre una hepatitis viral comparable a la de hbv humano. Esta prote\u00edna de fusi\u00f3n se introdujo en un vector viral adenoasociado, que se inyect\u00f3 v\u00eda intrahep\u00e1tica a una marmota infectada con whv, que a diferencia con las marmotas control tratadas con aav-ifn, contin\u00faa viva, y sin s\u00edntomas de toxicidad hematol\u00f3gica derivadas del tratamiento cr\u00f3nico con ifn, tras m\u00e1s de 13 meses post-laparotom\u00eda. esta disminuci\u00f3n de toxicidad se observa tambi\u00e9n en ratones balb\/c y c57\/bl6, tras el tratamiento con altas dosis de ia no presentan leucopenia, y la trombocitopenia es significativamente mayor en el grupo que recibe ifn. adem\u00e1s los animales tratados con esta formulaci\u00f3n, son capaces de generar una lisis espec\u00edfica frente a ep\u00edtopos espec\u00edficos de ant\u00edgeno mediada por linfocitos t citot\u00f3xicos (ctls) muy superior a la conseguida con el tratamiento de ifn.<\/p>\n

 <\/p>\n

Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abEngineering apolipoprotein a-i as a molecular scaffold: generation of interapo<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
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  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Engineering apolipoprotein a-i as a molecular scaffold: generation of interapo <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 Jessica Fioravanti <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 Navarra<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 01\/07\/2011<\/li>\n<\/ul>\n

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    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
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    • Director de la tesis<\/strong>\n
        \n
      • Pedro Berraondo L\u00f3pez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
          \n
        • Presidente del tribunal: raul Jes\u00fas Andrade bellido <\/li>\n
        • Javier Garcia-samaniego rey (vocal)<\/li>\n
        • gloria Gonzales aseguinolaza (vocal)<\/li>\n
        • jean-michel Pawlotsky (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

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