{"id":110053,"date":"2011-08-07T00:00:00","date_gmt":"2011-08-07T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/disenteria-porcina-analisis-de-secuencias-multilocus-mlst-de-brachyspira-spp-y-evaluacion-de-dos-preparados-vacunales\/"},"modified":"2011-08-07T00:00:00","modified_gmt":"2011-08-07T00:00:00","slug":"disenteria-porcina-analisis-de-secuencias-multilocus-mlst-de-brachyspira-spp-y-evaluacion-de-dos-preparados-vacunales","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/patologia-veterinaria\/disenteria-porcina-analisis-de-secuencias-multilocus-mlst-de-brachyspira-spp-y-evaluacion-de-dos-preparados-vacunales\/","title":{"rendered":"Disenter\u00eda porcina. an\u00e1lisis de secuencias multilocus (mlst) de brachyspira spp. y evaluaci\u00f3n de dos preparados vacunales."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Jes\u00fas Mar\u00eda Osorio Arguello <\/strong><\/h2>\n<p>Las espiroquetas del g\u00e9nero brachyspira son bacterias anaerobias que colonizan el intestino de aves y mam\u00edferos, incluido el hombre. La especie m\u00e1s conocida y relevante de este g\u00e9nero es brachyspira hyodysenteriae, agente etiol\u00f3gico de la disenter\u00eda porcina. Otras cinco especies m\u00e1s del g\u00e9nero brachyspira han sido capaces de colonizar el intestino del cerdo, incluyendo tanto especies pat\u00f3genas como comensales. Desde que en 1971 se confirmara por primera vez la colonizaci\u00f3n del cerdo por espiroquetas intestinales, no han parado las investigaciones en este campo que se han llevado a cabo en europa, estados unidos y australia. Estos estudios nos han aportado un importante grado de conocimiento de aspectos cl\u00ednicos, epidemiol\u00f3gicos y bacteriol\u00f3gicos, quedando a\u00fan muchas cosas por aprender de estas peculiares bacterias.             en espa\u00f1a, carvajal et al. (2006) ha detectado la participaci\u00f3n de b. Hyodysenteriae en un 34,1% de los brotes de diarrea en granjas porcinas distribuidas por todo el pa\u00eds, mientras que b. Pilosicoli se detect\u00f3 \u00fanicamente en el 2,9% de los brotes. M\u00e1s recientemente, seg\u00fan osorio et al. (2010), las especies de espiroquetas intestinales apat\u00f3genas del cerdo m\u00e1s frecuentemente detectadas en nuestro pa\u00eds fueron b. Murdochii y b. Innocens.             en esta tesis se han identificado y caracterizado gen\u00e9ticamente aislados d\u00e9bilmente \u00edY-hemol\u00edticos de brachyspira spp. De origen porcino obtenidos en nuestro laboratorio desde 2001 a 2007. Estos aislados no hab\u00edan sido caracterizados previamente por serotipado ni por t\u00e9cnicas basadas en adn. Los 18 aislados se obtuvieron de 14 explotaciones tanto de cerdo blanco como ib\u00e9rico y pertenecieron a 6 comunidades aut\u00f3nomas y 9 provincias de nuestro pa\u00eds, excepto uno que procedi\u00f3 de una granja de portugal.             se ha podido comprobar que el m\u00e9todo de mlst desarrollado por r\u00ed\u00a5sb\u00ed\u00a4ck et al. (2007) es eficaz para la detecci\u00f3n, identificaci\u00f3n y an\u00e1lisis de las diferentes especies del g\u00e9nero brachyspira. Los loci empleados en este estudio han mostrado una excelente diversidad entre nuestros aislados. Sin embargo, no todos los loci pudieron ser amplificados para algunos aislados con lo que el sistema necesitar\u00e1 ser mejorado. Los resultados mostraron que los aislados d\u00e9bilmente \u00edY-hemol\u00edticos son gen\u00e9ticamente heterog\u00e9neos con una media de 13,2 variantes por locus a nivel nucleot\u00eddico y de 9,2 a nivel aminoac\u00eddico que determinaron un total de 17 perfiles al\u00e9licos diferentes (sts) y 16 tipos aminoac\u00eddicos (aats). Tanto el an\u00e1lisis del gen nox como el an\u00e1lisis de mlst empleando 5 loci mostraron una resoluci\u00f3n taxon\u00f3mica muy elevada.             estos aislados d\u00e9bilmente \u00edY-hemol\u00edticos fueron identificados como b. Murdochii, b. Innocens y b. Pilosicoli. Adem\u00e1s, un nuevo grupo gen\u00e9tico formado por \u00fanicamente dos aislados procedentes de cerdo ib\u00e9rico de la zona de extremadura ha sido descrito. No obstante, para que estos aislados sean reconocidos como una nueva especie del g\u00e9nero es necesario que sean incluidos en la lista de nuevas especies que regularmente publica la revista international journal of systematic and evolutionary microbiology y, para ello, se necesita una caracterizaci\u00f3n mucho m\u00e1s exhaustiva. En este sentido, el an\u00e1lisis filogen\u00e9tico basado en varios genes tendr\u00e1 mucho protagonismo, especialmente cuando se haga m\u00e1s factible en un futuro cercano. Esto unido a la informaci\u00f3n obtenida por el conocimiento de las secuencias completas de los primeros genomas de tres especies del g\u00e9nero hace preveer que en los pr\u00f3ximos a\u00f1os se producir\u00e1n nuevos hallazgos dentro de este g\u00e9nero.             adem\u00e1s, mediante el an\u00e1lisis burst de los datos obtenidos mediante mlst pudimos detectar la existencia de relaciones evolutivas estrechas entre aislados d\u00e9bilmente \u00edY-hemol\u00edticos de diferentes pa\u00edses, lo que a su vez corrobora la utilidad de la t\u00e9cnica de mlst como herramienta en estudios epidemiol\u00f3gicos.             por otro lado, se ha aplicado por primera vez a aislados espa\u00f1oles de origen porcino el esquema de mlst recientemente descrito para el an\u00e1lisis de la epidemiolog\u00eda molecular y la estructura poblacional de b. Hyodysenteriae (la et al., 2009). De este an\u00e1lisis se dedujo que la t\u00e9cnica fue excelente en la identificaci\u00f3n de clones estables en el tiempo y que englobaron aislados procedentes de diferentes comunidades aut\u00f3nomas de todo el pa\u00eds. Tambi\u00e9n se dio el caso de aislados que a\u00fan siendo obtenidos de la misma granja presentaron un perfil al\u00e9lico diferente y se pudo poner de manifiesto la presencia de transmisi\u00f3n de aislados entre diferentes granjas porcinas. Para las secuencias analizadas, el porcentaje de sustituciones nucleot\u00eddicas de los aislados de b. Hyodysenteriae con respecto a los aislados d\u00e9bilmente \u00edY-hemol\u00edticos oscil\u00f3 entre el 3,7% y el 11,0% dependiendo del locus, con una media del 6,6%.             se comprob\u00f3 que la poblaci\u00f3n de 52 aislados de b. Hyodysenteriae de cerdos de nuestro pa\u00eds en su mayor\u00eda blancos, que incluy\u00f3 aislados de 47 granjas diferentes de 11 comunidades aut\u00f3nomas y de 21 provincias present\u00f3 una estructura clonal, con un alto grado de desequilibrio de ligamiento detectado en los genes analizados. Un resultado muy similar se obtuvo cuando se emplearon adem\u00e1s de los aislados espa\u00f1oles otros 111 aislados procedentes de muy diferentes pa\u00edses. Todos los aislados quedaron incluidos en 10 sts diferentes y en 7 aats. Ninguna de las st present\u00f3 diferencias con las restantes en todos los loci y el porcentaje de sustituciones nucleot\u00eddicas detectadas entre las cepas espa\u00f1olas no fue mayor del 0,5%. Estos resultados dan consistencia a la hip\u00f3tesis de un origen no muy diverso de las cepas espa\u00f1olas de b. Hyodysenteriae, ya que parece l\u00f3gico pensar que las cepas pertenecientes a los 10 genotipos multilocus de este estudio no divergieron hace mucho tiempo.             se ha descrito la presencia de dos clones internacionales en granjas de nuestro pa\u00eds. Uno hab\u00eda sido previamente descrito en el reino unido en diferentes granjas porcinas y asociado con resistencia a la tiamulina. El otro, hab\u00eda sido descrito en granjas de alemania y de b\u00e9lgica. El primero de ellos ha resultado ser el genotipo que ha conseguido un mayor \u00e9xito en la colonizaci\u00f3n de cerdos en nuestro pa\u00eds ya que incluy\u00f3 al 41,2% del total de los aislados espa\u00f1oles. Todos los aislados espa\u00f1oles quedaron englobados en 3 clusters cuando se represent\u00f3 en el mismo diagrama las relaciones gen\u00e9ticas entre aislados de todo el mundo.             dado que la t\u00e9cnica de mlst resulta apropiada para la epidemiolog\u00eda a largo plazo y que los datos son f\u00e1cilmente intercambiables entre laboratorios v\u00eda internet, pudimos comparar aislados de localizaciones geogr\u00e1ficas muy diferentes as\u00ed como muy separados en el tiempo a la vez que identificar las cepas que son miembros de un mismo linaje clonal globalmente distribuido. Estos clones descritos han presentado una diseminaci\u00f3n internacional y su aparici\u00f3n en espa\u00f1a demuestra la expansi\u00f3n global de algunas cepas de b. Hyodysenteriae. Dichos aislados podr\u00eda haber llegado a nuestro pa\u00eds y esos genotipos habr\u00eda encontrado las condiciones ambientales propicias para su diseminaci\u00f3n dado que en los \u00faltimos a\u00f1os se ha empleado rutinariamente tiamulina principalmente para el tratamiento y profilaxis de infecciones respiratorias en muchas granjas y tambi\u00e9n para el tratamiento de la dp.             el an\u00e1lisis basado en los aats demostr\u00f3 un mayor agrupamiento que en el caso de las st y se obtuvo informaci\u00f3n de la descendencia evolutiva de los aislados dentro de un complejo clonal, lo cual evidencia la presi\u00f3n negativa de selecci\u00f3n en los cambios nucleot\u00eddicos que resultan en cambios en la secuencia aminoac\u00eddica. Se concluy\u00f3 que el ancestro gen\u00e9tico de los aislados de b. Hyodysenteriae estudiados podr\u00eda estar representado por alguna de las cepas de 7 pa\u00edses diferentes que fueron englobadas en el aat9. Te\u00f3ricamente, de este ancestro habr\u00edan surgido en la evoluci\u00f3n de la especie los restantes tipos gen\u00e9ticos. En este fenotipo fundador se incluyeron 8 aislados espa\u00f1oles todos procedentes de cerdo blanco menos uno de origen desconocido.             un total de 21 cerdos distribuidos aleatoriamente en 3 grupos fueron empleados para la valoraci\u00f3n de la eficacia protectora de dos prote\u00ednas de membrana externa de b. Hyodysenteriae, smpa y bmpb. Se emple\u00f3 la v\u00eda intramuscular para la primera inmunizaci\u00f3n y la v\u00eda oral para la revacunaci\u00f3n. El desaf\u00edo se llev\u00f3 a cabo con la cepa de referencia b204 del serotipo 2 (atcc 31212), la misma empleada para la obtenci\u00f3n de las prote\u00ednas. Todos los cerdos del grupo control y la mayor\u00eda de los inmunizados con la prote\u00edna smpa padecieron la enfermedad mientras que se observ\u00f3 una disminuci\u00f3n de los animales afectados entre los inmunizados con la prote\u00edna bmpb, aunque las diferencias no llegaron a ser significativas. Adem\u00e1s el per\u00edodo de incubaci\u00f3n se vio claramente aumentado en este \u00faltimo grupo con respecto a los otros dos, con diferencias en este caso significativas.             en virtud de estos resultados preliminares, la prote\u00edna smpa no parece ser un buen candidato para ser incluida en estudios de seguridad y eficacia definitivos, mientras que la bmpb confiri\u00f3 un cierto grado de protecci\u00f3n. No obstante, cabe destacar que s\u00f3lo una de las inmunizaciones se llev\u00f3 a cabo v\u00eda oral que es la v\u00eda m\u00e1s adecuada para conferir al animal inmunidad de mucosas. Adem\u00e1s, no se emple\u00f3 adyuvante para la administraci\u00f3n oral aunque si se observ\u00f3 seroconversi\u00f3n en los animales tras la administraci\u00f3n. Parece interesante investigar m\u00e1s componentes de la bacteria que puedan ser empleados en el desarrollo de una vacuna inactivada acelular as\u00ed como adyuvantes de mucosas que sean capaces de estimular el tejido linfoide asociado al intestino.             hemos incluido en el trabajo una amplia revisi\u00f3n bibliogr\u00e1fica que incluye aspectos como las caracter\u00edsticas morfol\u00f3gicas y biol\u00f3gicas de las espiroquetas, la historia del g\u00e9nero brachyspira e informaci\u00f3n de cada una de las once especies del g\u00e9nero (cuatro de ellas a\u00fan no aceptadas: b. Hyodysenteriae, b. Pilosicoli, b. Intermedia, b. Innocens, b. Murdochii, b. Alvinipulli, b. Aalborgi, b. Canis, b. Pulli, b. Suanatina y b. Corvi). La informaci\u00f3n mostrada pretende poner de manifiesto la capacidad que han mostrado las diferentes especies de brachyspira para colonizar un amplio rango de hospedadores y resalta las similitudes en cuanto a morfolog\u00eda y a capacidad para producir enfermedad en dichos hospedadores. Tambi\u00e9n se detallan las numerosas t\u00e9cnicas que se han desarrollado y usado para el diagn\u00f3stico y caracterizaci\u00f3n de las espiroquetas intestinales. Se hizo referencia a la historia del cultivo in vitro, a los m\u00e9todos tradicionales de identificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n y, por \u00faltimo, a los m\u00e9todos moleculares de diagn\u00f3stico y tipificaci\u00f3n.             en este trabajo nos hemos centrado en el estudio de una colecci\u00f3n de aislados porcinos de brachyspira spp. Seleccionados de granjas de diferentes localizaciones geogr\u00e1ficas de nuestro pa\u00eds y, tambi\u00e9n, en la evaluaci\u00f3n de la eficacia de dos preparados vacunales para proteger al cerdo frente a la disenter\u00eda porcina. Con ello, esperamos aportar nuestro grano de arena al conocimiento del complejo mundo de las espiroquetas intestinales del cerdo.             esta tesis fue llevada a cabo en el grupo de investigaci\u00f3n de enfermedades digestivas del cerdo de la facultad de veterinaria de la universidad de le\u00f3n. No obstante, no hubiese sido posible su realizaci\u00f3n sin sendas colaboraciones con la universidad de murdoch (perth, australia) y con laboratorios ingenasa, s.A. (Madrid, espa\u00f1a).<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Disenter\u00eda porcina. an\u00e1lisis de secuencias multilocus (mlst) de brachyspira spp. y evaluaci\u00f3n de dos preparados vacunales.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Disenter\u00eda porcina. an\u00e1lisis de secuencias multilocus (mlst) de brachyspira spp. y evaluaci\u00f3n de dos preparados vacunales. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Jes\u00fas Mar\u00eda Osorio Arguello <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Le\u00f3n<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 08\/07\/2011<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Ana Mar\u00eda Carvajal Urue\u00f1a<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: germ\u00e1n Naharro carrasco <\/li>\n<li>margarita Mart\u00edn castillo (vocal)<\/li>\n<li>Javier Hermoso de mendoza salcedo (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda  cinta Prieto su\u00e1rez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Jes\u00fas Mar\u00eda Osorio Arguello Las espiroquetas del g\u00e9nero brachyspira son bacterias anaerobias que colonizan el intestino de 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