{"id":110218,"date":"2018-03-11T10:36:09","date_gmt":"2018-03-11T10:36:09","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/deteccion-y-cuantificacion-de-trichoderma-harzianum-y-evaluacion-de-su-actividad-biocontrol-frente-a-la-fusariosis-vascular-del-melon-mediante-la-aplicacion-de-herramientas-moleculares\/"},"modified":"2018-03-11T10:36:09","modified_gmt":"2018-03-11T10:36:09","slug":"deteccion-y-cuantificacion-de-trichoderma-harzianum-y-evaluacion-de-su-actividad-biocontrol-frente-a-la-fusariosis-vascular-del-melon-mediante-la-aplicacion-de-herramientas-moleculares","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/microbiologia\/deteccion-y-cuantificacion-de-trichoderma-harzianum-y-evaluacion-de-su-actividad-biocontrol-frente-a-la-fusariosis-vascular-del-melon-mediante-la-aplicacion-de-herramientas-moleculares\/","title":{"rendered":"Detecci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n de trichoderma harzianum, y evaluaci\u00f3n de su actividad biocontrol frente a la fusariosis vascular del mel\u00f3n mediante la aplicaci\u00f3n de herramientas moleculares"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Rub\u00e9n L\u00f3pez  Mond\u00e9jar <\/strong><\/h2>\n<p>El control biol\u00f3gico de fitopat\u00f3genos es una alternativa viable para sustituir el empleo de productos qu\u00edmicos en agricultura. Esta medida cobra gran importancia en el campo de la agricultura ecol\u00f3gica, donde el uso de estos productos qu\u00edmicos est\u00e1 prohibido por la regulaci\u00f3n europea, provocando que estos cultivos sean especialmente sensibles a diferentes pat\u00f3genos. Uno de estos pat\u00f3genos, fusarium oxysporum f. Sp. Melonis, agente causal de la fusariosis vascular del mel\u00f3n, es el principal responsable de enormes p\u00e9rdidas tanto a nivel de campo como durante la producci\u00f3n de pl\u00e1ntula en semilleros. El problema de esta enfermedad en semillero es, si cabe, a\u00fan m\u00e1s importante, ya que estas instalaciones presentan las condiciones \u00f3ptimas para el desarrollo de la enfermedad y dispersi\u00f3n del pat\u00f3geno, as\u00ed como la posibilidad de su traslado al campo, favoreciendo de este modo que la enfermedad se extienda. el empleo del hongo trichoderma harzianum ha mostrado buenos resultados como agente de control biol\u00f3gico (acb) contra este fitopat\u00f3geno a nivel de semillero. La actividad de control biol\u00f3gico que presentan los aislados de esta especie es debido principalmente a los distintos mecanismos de acci\u00f3n que presentan, tales como antibiosis y competencia por nutrientes, caracteriz\u00e1ndose adem\u00e1s por producir una gran bater\u00eda de enzimas hidrol\u00edticas que les permite actuar como micopar\u00e1sitos de otros hongos.  el empleo de estos aislados requiere, sin embargo, de herramientas que permitan no s\u00f3lo la selecci\u00f3n de aislados con un mayor potencial de control biol\u00f3gico o una mayor efectividad frente a una enfermedad, sino tambi\u00e9n de herramientas que permitan la monitorizaci\u00f3n del acb, una vez inoculado en los sustratos org\u00e1nicos para el crecimiento de pl\u00e1ntulas en semillero. A su vez, la aplicaci\u00f3n y desarrollo de estas herramientas para la r\u00e1pida detecci\u00f3n del pat\u00f3geno mejorar\u00eda enormemente el control de la enfermedad, reduciendo las posibles p\u00e9rdidas y la expansi\u00f3n de la misma. en los \u00faltimos a\u00f1os, el desarrollo de los m\u00e9todos moleculares basados en el adn y la pcr han ofrecido numerosas herramientas para el estudio en profundidad tanto de los hongos antagonistas como de los fitopat\u00f3genos. De entre estas t\u00e9cnicas destaca la pcr a tiempo real, la cual ofrece buenas alternativas al empleo de otros m\u00e9todos cl\u00e1sicos como el cultivo en placa o la microscop\u00eda a la hora de monitorizar y estudiar el uso del acb. es por ello que el objetivo de esta tesis doctoral fue aplicar y desarrollar estas herramientas moleculares en el empleo de t. Harzianum en el control de la fusariosis vascular del mel\u00f3n en semillero. Para ello, la tesis se ha estructurado en dos partes: la primera, que incluye los cap\u00edtulos 1, 2 y 3, centrada en la detecci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n tanto del acb como del fitopat\u00f3geno; y una segunda parte, que incluye los cap\u00edtulos 4 y 5, centrada en el estudio de los mecanismos biocontrol de este acb frente al pat\u00f3geno:  cap\u00edtulo 1. L\u00f3pez-mond\u00e9jar r, anton a, raidl s, ros m, pascual ja, 2010. Quantification of the biocontrol agent trichoderma harzianum with real-time taqman pcr and its potential extrapolation to the hyphal biomass. Bioresource technology 101, 2888-2891  cap\u00edtulo 2. Beaulieu r, l\u00f3pez-mond\u00e9jar r, tittarelli f, ros m, pascual ja, 2011. Qrt-pcr quantification of the biological control agent trichoderma harzianum in peat and compost-based growing media. Bioresource technology 102, 2793-2798.  cap\u00edtulo 3. L\u00f3pez-mond\u00e9jar r, beaulieu r, ros m, pascual ja, 2011. Scar-based real-time pcr for early detection of fusarium oxysporum in melon seedlings under greenhouse nursery conditions. En revisi\u00f3n.  cap\u00edtulo 4. L\u00f3pez-mond\u00e9jar r, ros m, pascual ja, 2011. Mycoparasitism-related genes expression of trichoderma harzianum isolates to evaluate their efficacy as biological control agent. Biological control 56, 59-66.  cap\u00edtulo 5. L\u00f3pez-mond\u00e9jar r, blaya j, ros m, pascual ja, 2011. Evaluation of the effect of chitin-rich residues on chitinolytic activity of trichoderma harzianum: in vitro and greenhouse nursery experiments. En revisi\u00f3n.  los resultados obtenidos en esta tesis doctoral ofrecieron un sistema molecular basado en un par de cebadores y en una sonda taqman para la detecci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n espec\u00edfica de t. Harzianum mediante pcr a tiempo real, tanto en cultivos puros como en sustratos org\u00e1nicos en semillero. Adem\u00e1s, este sistema se utiliz\u00f3 para cuantificar la cantidad de acb activo en el sustrato, mediante qrt-pcr. Los resultados obtenidos ofrecieron una curva de poblaci\u00f3n totalmente diferente a la conseguida con qpcr y\/o cultivo en placa, mostrando c\u00f3mo este hongo fue capaz de desarrollarse en los medios de crecimiento de pl\u00e1ntula bajo condiciones de semillero. el empleo de compost inoculados con t. Harzianum mostr\u00f3 tambi\u00e9n mejores resultados en el control de la enfermedad que el uso de turbas inoculadas con este acb, reduci\u00e9ndose la p\u00e9rdida de peso y la infecci\u00f3n por parte del pat\u00f3geno. Estos resultados confirmaron que los sustratos basados en compost pueden ser buenas alternativas para controlar la fusariosis vascular del mel\u00f3n a nivel de semillero. los resultados de esta tesis incluyeron, adem\u00e1s, el desarrollo de un sistema taqman para detectar y cuantificar f. Oxysporum mediante pcr a tiempo real, bajo condiciones de semillero. Este sistema permiti\u00f3 la detecci\u00f3n del hongo en tejidos de la planta en los primeros estados de la infecci\u00f3n, cuando a\u00fan no se observaban s\u00edntomas, as\u00ed como la detecci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n del pat\u00f3geno en el sustrato. Este sistema ofreci\u00f3 mayor sensibilidad y rapidez, en menos de 48 h, que los m\u00e9todos cl\u00e1sicos de cultivo en placa. el empleo de herramientas moleculares basadas en el estudio de perfiles de amplificaci\u00f3n del adn (rapd-pcr), y el estudio de expresi\u00f3n de genes relacionados con el proceso de micoparasitismo (qrt-pcr), junto al estudio de actividades enzim\u00e1ticas codificadas por estos genes, y observaciones en placa, permiti\u00f3 seleccionar aislados de t. Harzianum con un alto potencial biocontrol frente al pat\u00f3geno f. Oxysporum. La presencia de paredes celulares del pat\u00f3geno activ\u00f3 la expresi\u00f3n de estos genes, siendo su perfil de expresi\u00f3n diferente seg\u00fan cada aislado. Los aislados de t. Harzianum t-30 y t-78, que presentaron mayor actividad quitinasa, nagasa y b-1,3-glucanasa, mostraron tambi\u00e9n el mayor grado de micoparasitismo cuando fueron enfrentados en placa con el pat\u00f3geno.  \tel estudio de los perfiles de expresi\u00f3n de los genes relacionados con la capacidad de control biol\u00f3gico de t. Harzianum permiti\u00f3 tambi\u00e9n evaluar la respuesta del sistema quitinol\u00edtico de este hongo frente a tres residuos ricos en quitina. El uso tanto de quitosano, como de harina de camar\u00f3n y restos de champi\u00f1\u00f3n, activaron los genes responsables de la actividad quitinol\u00edtica de este hongo. Adem\u00e1s, nuestros resultados mostraron que el posible efecto inhibidor de algunas de estas sustancias se disipaba cuando se utilizaron como complementos de la turba en experimentos en semillero. Bajo estas condiciones de semillero, la presencia de t. Harzianum y de estos compuestos aument\u00f3 la actividad quitinol\u00edtica (quitinasa y nagasa) de los sustratos, lo cual se relacion\u00f3 con un menor efecto del pat\u00f3geno en las plantas, que presentaban un mayor mantenimiento del peso seco en presencia del fitopat\u00f3geno. Adem\u00e1s se demostr\u00f3 que peque\u00f1as cantidades de estos compuestos ricos en quitina adicionadas a turbas inoculadas con t. Harzianum, mejoraban el crecimiento de las pl\u00e1ntulas debido a su aporte nutricional, ofreciendo, por tanto, un valor a\u00f1adido para estos residuos en el campo de la agricultura.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Detecci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n de trichoderma harzianum, y evaluaci\u00f3n de su actividad biocontrol frente a la fusariosis vascular del mel\u00f3n mediante la aplicaci\u00f3n de herramientas moleculares<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Detecci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n de trichoderma harzianum, y evaluaci\u00f3n de su actividad biocontrol frente a la fusariosis vascular del mel\u00f3n mediante la aplicaci\u00f3n de herramientas moleculares <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Rub\u00e9n L\u00f3pez  Mond\u00e9jar <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Alicante<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 14\/07\/2011<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jos\u00e9 Antonio Pascual Valero<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Carlos Garc\u00eda izquierdo <\/li>\n<li>monika Schmoll (vocal)<\/li>\n<li>gisela Diaz espejo (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda  isabel Tillas gay (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Rub\u00e9n L\u00f3pez Mond\u00e9jar El control biol\u00f3gico de fitopat\u00f3genos es una alternativa viable para sustituir el empleo de 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