{"id":110287,"date":"2018-03-11T10:36:14","date_gmt":"2018-03-11T10:36:14","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/degradacion-de-derivados-cianurados-y-resistencia-al-cianuro-de-pseudomonas-pseudoalcaligenes-cect5344\/"},"modified":"2018-03-11T10:36:14","modified_gmt":"2018-03-11T10:36:14","slug":"degradacion-de-derivados-cianurados-y-resistencia-al-cianuro-de-pseudomonas-pseudoalcaligenes-cect5344","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica\/degradacion-de-derivados-cianurados-y-resistencia-al-cianuro-de-pseudomonas-pseudoalcaligenes-cect5344\/","title":{"rendered":"Degradaci\u00f3n de derivados cianurados y resistencia al  cianuro de pseudomonas pseudoalcaligenes cect5344"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Felipe Acera Hern\u00e1ndez <\/strong><\/h2>\n<p>Pseudomonas pseudoalcaligenes es una bacteria alcal\u00f3fila que resiste concentraciones de cianuro de hasta 30 mm y que crece utilizando este compuesto t\u00f3xico como \u00fanica fuente de nitr\u00f3geno. Se ha descrito es esta bacteria un una agrupaci\u00f3n g\u00e9nica en forma de oper\u00f3n donde se localizan los genes cio (\u00abcyanide insensitive oxidase\u00bb), que codifican una oxidasa terminal insensible al cianuro. Estos genes se han mostrado esenciales para la resistencia al cianuro en p. Pseudoalcaligenes ya que la inactivaci\u00f3n de los genes cio mediante inserci\u00f3n por recombinaci\u00f3n sencilla de un marcador de resistencia (gen aacc1 que confiere resistencia a kanamicina) retrasa el crecimiento en medios que contienen el t\u00f3xico. Por otro lado, p. Pseudoalcaligenes se ha mostrado capaz de crecer con una amplia variedad de compuestos cianurados como fuente de nitr\u00f3geno, entre los que se encuentra la 3-cianoalanina, un conocido intermediario en la ruta de eliminaci\u00f3n del cianuro en vegetales.  \ten este trabajo tesis se ha llevado cabo la mutag\u00e9nesis dirigida mediante inserci\u00f3n del marcador aacc1 por doble recombinaci\u00f3n en los genes que componen el oper\u00f3n cio. Se ha mutagenizado una posible nitrito\/sulfito reductasa (gen sir\/nir), que es el primer gen del oper\u00f3n; los genes cioa y ciob que dan lugar a oxidasa insensible al cianuro; un marco de lectura situado junto a ciob (denominado orf2); y una fosofoserina aminotransferasa (serc) que cierra la agrupaci\u00f3n. Tanto la inactivaci\u00f3n total del oper\u00f3n como de cualquiera de los genes cioa, ciob u orf2 sensibiliza a la bacteria frente al cianuro. Adem\u00e1s, las medidas de respiraci\u00f3n insensible al cuanuro (actividad nadh deshidrogenasa \u00abin vitro\u00bb) en extractos de membrana son significativamente inferiores en estos mutantes frente a la estirpe silvestre o la  que expresa de manera constitutiva los genes cio (mutante polar en sir\/nir). Esto experimentos implican que cioa y ciob forma parte de la oxidasa alternativa pero tambi\u00e9n orf2, por lo que proponemos su denominaci\u00f3n como cioc. Adem\u00e1s, la expresi\u00f3n de los tres genes tanto en cepas de pseudonomonas putida como de e. Coli les confiere resistencia a cianuro. \ten este trabajo de tesis se ha purificado hasta homogeneidad electrofor\u00e9tica una 3-cianoalanina nitrilasa altamente espec\u00edfica de su sustrato. Se ha demostrado que su expresi\u00f3n se induce \u00fanicamente en medio m\u00ednimo con cianuro como \u00fanica fuente de nitr\u00f3geno, lo que sugiere su posible implicaci\u00f3n en la asimilaci\u00f3n del cianuro. La enzima presenta adem\u00e1s un claro car\u00e1cter asimilador al producir dos amino\u00e1cidos proteinog\u00e9nicos a partir de 3-cianoalanina, aspartato y asparagina, previniendo la transformaci\u00f3n en amonio de todo el nitr\u00f3geno del nitrilo. Sin embargo, un mutante dirigido en el gen que codifica la 3-cianoalanina nitrilasa sigue utilizando cianuro como \u00fanica fuente de nitr\u00f3geno. Por contra, el mutante crece con 3-cianoalanina como fuente de nitr\u00f3geno de forma mucho m\u00e1s lenta que la estirpe silvestre, incluso en presencia de cianuro, que act\u00faa como inductor de la expresi\u00f3n del gen.. \tpor \u00faltimo, en esta tesis se han realizado trabajos para la finalizaci\u00f3n del proyecto de secuenciaci\u00f3n del genoma de p. Pseudoalcaligenes cect5344 consistente en el ordenamiento de las secuencias parciales obtenidas, tanto mediante la amplificaci\u00f3n y secuenciaci\u00f3n directa de los posibles huecos entre contingencias, como mediante el uso de programas bioinform\u00e1ticos. El an\u00e1lisis y anotaci\u00f3n del borrador genoma del que se dispone ha permitido que hayan sido encontrados dos operones cio adicionales y hasta nueve posible nitrilasas. Se han realizado an\u00e1lisis filogen\u00e9ticos sobre estos genes y buscado secuencias de inter\u00e9s biotecnol\u00f3gico. As\u00ed se han detectado genes implicados en la resistencia a ars\u00e9nico y mercurio y en la degradaci\u00f3n de derivados benc\u00e9nicos, atrazinas y otros compuestos contaminantes. Tambi\u00e9n se han encontrado dos operones relacionados con la s\u00edntesis y degradaci\u00f3n de biopl\u00e1sticos (polihidroxibutiratos). Este conocimiento abre la posibilidad de nuevas aplicaciones biotecnol\u00f3gicas de  pseudomonas pseudoalcaligenes cect5344, aparte de la ya conocida de asimilar cianuro.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Degradaci\u00f3n de derivados cianurados y resistencia al  cianuro de pseudomonas pseudoalcaligenes cect5344<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Degradaci\u00f3n de derivados cianurados y resistencia al  cianuro de pseudomonas pseudoalcaligenes cect5344 <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Felipe Acera Hern\u00e1ndez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Extremadura<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 15\/07\/2011<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Alberto Quesada Molina<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Francisco Castillo rodriguez <\/li>\n<li>Mar\u00eda isabel Ige\u00f1o gonz\u00e1lez (vocal)<\/li>\n<li>Fernando Rojo de castro (vocal)<\/li>\n<li>eduardo Diaz fernandez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Felipe Acera Hern\u00e1ndez Pseudomonas pseudoalcaligenes es una bacteria alcal\u00f3fila que resiste concentraciones de cianuro de hasta 30 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