{"id":110306,"date":"2018-03-11T10:36:14","date_gmt":"2018-03-11T10:36:14","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/respuesta-antioxidante-de-phycomyces-blakesleeanus-en-condiciones-de-estres-funcion-del-d-eritroascorbato\/"},"modified":"2018-03-11T10:36:14","modified_gmt":"2018-03-11T10:36:14","slug":"respuesta-antioxidante-de-phycomyces-blakesleeanus-en-condiciones-de-estres-funcion-del-d-eritroascorbato","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/radicales-libres\/respuesta-antioxidante-de-phycomyces-blakesleeanus-en-condiciones-de-estres-funcion-del-d-eritroascorbato\/","title":{"rendered":"Respuesta antioxidante de phycomyces blakesleeanus en condiciones de estr\u00e9s. funci\u00f3n del d-eritroascorbato"},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de Cristina De Castro Cristiano <\/strong><\/h2>\n

Los microorganismos son modelos ideales para estudiar diferentes aspectos de la respuesta a un estr\u00e9s a nivel molecular y celular; no obstante, el estudio en eucariotas se ha centrado en c\u00e9lulas de mam\u00edfero y levaduras, existiendo mucha menor informaci\u00f3n en relaci\u00f3n con hongos filamentosos. Phycomyces blakesleeanus es un hongo filamentoso aerobio estricto que produce \u00e1cido g\u00e1lico, beta-caroteno, d-eritroascorbato (deaa), un an\u00e1logo de 5 \u00e1tomos de carbono del \u00e1cido asc\u00f3rbico, y una forma glucosilada del mismo, d-eritroascorbato glucosilado (d-eaag). Todas estas mol\u00e9culas poseen actividad antioxidante. los objetivos planteados en este trabajo fueron: i) analizar la respuesta de p. blakesleeanus al estr\u00e9s oxidativo generado por h2o2, ii) establecer la existencia de una respuesta com\u00fan a estr\u00e9s, por medio del an\u00e1lisis, en presencia de acetato y en condiciones de ausencia de la fuente de carbono, de las enzimas y mol\u00e9culas determinadas en el estr\u00e9s oxidativo y iii) an\u00e1lisis del proteoma de p. Blakesleeanus en condiciones de estr\u00e9s por h2o2. los resultados obtenidos muestran que, cuando p. Blakesleeanus se cultiva con glucosa, existe una fuerte correlaci\u00f3n positiva entre el contenido en fenoles totales, la capacidad antioxidante frap y el contenido en \u00e1cido g\u00e1lico, por lo que este compuesto debe contribuir al potencial antioxidante del hongo. En cultivos en acetato, en donde no se detecta \u00e1cido g\u00e1lico, la correlaci\u00f3n, que sigue siendo positiva, es menos fuerte. cualquiera de los tres m\u00e9todos empleados en la determinaci\u00f3n de la capacidad antioxidante de p. Blakesleeanus, frap, abts y dpph, muestran un poder predictivo similar. En cultivos con glucosa o acetato, los contenidos m\u00e1s elevados de gssg, gsh o d-eaa se obtuvieron en fase de crecimiento exponencial, mientras que los de deaag y beta-caroteno se obtuvieron en fase estacionaria. El \u00e1cido g\u00e1lico, d-eaa y deaag presentaron una capacidad antioxidante superior a la de cualquiera de los antioxidantes sint\u00e9ticos analizados y mayor que muchos de los compuestos naturales ensayados. Existe una correlaci\u00f3n positiva entre la capacidad antioxidante, para el deaag, \u00e1cido g\u00e1lico y gsh, calculada a partir de las concentraciones intracelulares, y la capacidad antioxidante de p. Blakesleeanus cultivado con glucosa. La actividad catalasa (cat) s\u00f3lo est\u00e1 presente en la fase de crecimiento exponencial cuando p. Blakesleeanus se cultiva con glucosa, mientras que la actividad sod y de las enzimas relacionadas con el metabolismo del glutati\u00f3n, glutati\u00f3n peroxidasa (gpx), glutati\u00f3n transferasa (gst), glutati\u00f3n reductasa (gr) y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (g6pdh) o con la s\u00edntesis del d-eaa, d-arabinosa deshidrogenasa (adh) y d-arabinono-1,4-lactona deshidrogenasa (aldh) mostraron su actividad m\u00e1xima en fase estacionaria. p. Blakesleeanus muestra una alta resistencia al estr\u00e9s oxidativo generado por h2o2, es capaz de sobrevivir a la exposici\u00f3n durante 60 min a h2o2 200 mm, mostrando una viabilidad mayor en fase de crecimiento exponencial que en fase estacionaria. La resistencia de p. Blakesleeanus al estr\u00e9s oxidativo parece depender de la presencia de cat, sod, unos niveles altos de gsh y de un estado reductor intracelular alto. Las actividades gpx y gst pueden desempe\u00f1ar un papel m\u00e1s importante en fase estacionaria, ya que en ausencia de cat son las \u00fanicas actividades que pueden destoxificar el h2o2. La presencia de metabolitos secundarios, tales como el \u00e1cido g\u00e1lico y d-eaag pueden tener tambi\u00e9n un papel antioxidante, sobre todo en fase estacionaria. El efecto del estr\u00e9s oxidativo, medido por la intensidad de carbonilaci\u00f3n de prote\u00ednas, es muy acusado en la fase de crecimiento exponencial y dado que no se detecta disminuci\u00f3n en las actividades gpx, gst, gr, g6pdh, cat y sod, estas enzimas no deben estar carboniladas. En fase estacionaria, p. Blakesleeanus muestra un grado de carbonilaci\u00f3n que no se incrementa por la exposici\u00f3n al h2o2, lo que indica una relaci\u00f3n entre la carbonilaci\u00f3n de prote\u00ednas y el envejecimiento celular, como se ha descrito para muchos sistemas biol\u00f3gicos. la menor viabilidad de cultivos de p. Blakesleeanus en acetato, una fuente pobre de carbono, indican que, probablemente, existe un efecto estresante del i\u00f3n acetato que se acumula intracelularmente. Todas las actividades enzim\u00e1ticas analizadas, gpx, gst, gr, g6pdh, cat y sod, responden de manera diferencial al crecimiento en acetato respecto al de glucosa, lo cual es especialmente notable en las actividades gpx, cat y sod, siendo la primera 10 veces superior a la registrada en glucosa, la cat que no se detecta en fase estacionaria en glucosa y la sod que muestra niveles 10 veces inferiores a los de glucosa. El valor del cociente gsh\/gssg es 50 veces superior al obtenido en el cultivo con glucosa, lo que indicar\u00eda un nivel intracelular reductor mayor, tambi\u00e9n es de destacar los niveles m\u00e1s elevados de beta-caroteno y trehalosa. la respuesta de p. Blakesleeanus a la privaci\u00f3n de la fuente de carbono se podr\u00eda considerar, de forma global, como una respuesta similar al estr\u00e9s oxidativo generado por h2o2: presencia de cat, niveles altos de sod, alto cociente gsh\/gssg, aunque en este caso, de menor magnitud, como queda reflejado en una menor relaci\u00f3n sod\/cat, menor cociente gsh\/gssg y el mantenimiento de d-eaag. Estos resultados confirman la idea general asociada a la respuesta adaptativa al estr\u00e9s por privaci\u00f3n de la fuente de carbono que conduce a un incremento en la tolerancia al estr\u00e9s oxidativo en hongos, que implica la inducci\u00f3n de elementos dependientes de gsh del sistema de defensa antioxidante. El gluc\u00f3geno y la trehalosa, almacenados en p. Blakesleeanus cuando es cultivado con glucosa, podr\u00edan contribuir al mantenimiento de unas condiciones adecuadas en el hongo, que permitan su supervivencia, cuando se le somete a la privaci\u00f3n de la fuente de carbono. un estado intracelular reductor y una actividad catalasa est\u00e1n implicados en la respuesta de p. Blakesleeanus a los tres tipos de estr\u00e9s, si bien, en el estr\u00e9s por acetato y por la privaci\u00f3n de la fuente de carbono debe estar inducida una forma isoenzim\u00e1tica de la cat, que se expresa en respuesta a la ausencia de glucosa. No obstante, el an\u00e1lisis global de las mol\u00e9culas estudiadas no permite establecer una respuesta com\u00fan de p. blakesleeanus al estr\u00e9s oxidativo por h2o2, por acetato y por la privaci\u00f3n de la fuente de carbono. se llev\u00f3 a cabo una optimizaci\u00f3n del protocolo de extracci\u00f3n, solubilizaci\u00f3n y precipitaci\u00f3n de las prote\u00ednas a partir de micelio de p. Blakesleeanus, as\u00ed como del proceso de separaci\u00f3n de prote\u00ednas por electroforesis bidimensional, con objeto de obtener el mapa bidimensional de prote\u00ednas intracelulares del hongo, que nos permitiera establecer la existencia de cambios prote\u00f3micos generados por el estr\u00e9s oxidativo. De forma global, tanto en el control como en el estr\u00e9s por h2o2, el mayor n\u00famero de manchas proteicas se observan en la zona del punto isoel\u00e9ctrico correspondiente al intervalo de ph neutro-ligeramente b\u00e1sico y con masas moleculares comprendidas entre 31 y 66 kda. El estr\u00e9s oxidativo produce una expresi\u00f3n diferencial de prote\u00ednas, incrementando la oxidaci\u00f3n reversible de grupos tioles proteicos. Mediante espectrofotometr\u00eda de masas se identific\u00f3 el factor de elongaci\u00f3n de la traducci\u00f3n 1-alfa de p. Blakesleeanus, que presumiblemente debe contener ciste\u00edna\/s oxidadas reversiblemente. El procesamiento definitivo de los resultados obtenidos de este an\u00e1lisis prote\u00f3mico, as\u00ed como la obtenci\u00f3n de nuevos resultados deber\u00e1 conducirnos a la identificaci\u00f3n de prote\u00ednas que respondan al estr\u00e9s oxidativo por h2o2, lo que se podr\u00e1 conseguir cuando est\u00e9 disponible el genoma de p. Blakesleeanus.<\/p>\n

 <\/p>\n

Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abRespuesta antioxidante de phycomyces blakesleeanus en condiciones de estr\u00e9s. funci\u00f3n del d-eritroascorbato<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
    \n
  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Respuesta antioxidante de phycomyces blakesleeanus en condiciones de estr\u00e9s. funci\u00f3n del d-eritroascorbato <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 Cristina De Castro Cristiano <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 Le\u00f3n<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 15\/07\/2011<\/li>\n<\/ul>\n

     <\/p>\n

    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
      \n
    • Director de la tesis<\/strong>\n
        \n
      • M\u00aa Dolores Arriaga Giner<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
          \n
        • Presidente del tribunal: arturo P\u00e9rez eslava <\/li>\n
        • Jos\u00e9 Antonio Barcena ruiz (vocal)<\/li>\n
        • angel Reglero chillon (vocal)<\/li>\n
        • mercedes Renobales scheifler (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

           <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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