{"id":110543,"date":"2018-03-11T10:36:35","date_gmt":"2018-03-11T10:36:35","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/expresion-recombinante-de-protea%c2%adnas-relacionadas-con-el-metabolismo-del-nitrogeno-en-haloferax-mediterranei\/"},"modified":"2018-03-11T10:36:35","modified_gmt":"2018-03-11T10:36:35","slug":"expresion-recombinante-de-protea%c2%adnas-relacionadas-con-el-metabolismo-del-nitrogeno-en-haloferax-mediterranei","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/metabolismo-microbiano\/expresion-recombinante-de-protea%c2%adnas-relacionadas-con-el-metabolismo-del-nitrogeno-en-haloferax-mediterranei\/","title":{"rendered":"Expresi\u00f3n recombinante de prote\u00ednas relacionadas con el metabolismo del nitr\u00f3geno en haloferax mediterranei"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Basilio Zafrilla  Requena <\/strong><\/h2>\n<p>De un tiempo a esta parte, haloferax mediterranei se ha convertido en un modelo para el estudio de microorganismos halof\u00edlicos. Esta arquea, es capaz de reducir nitrato a trav\u00e9s de las dos principales rutas presentes en el ciclo del nitr\u00f3geno. Dependiendo de las condiciones del medio, este microorganismo es capaz reducir el no3- hasta nh4+ con el fin de incorporarlo en su metabolismo. Este tipo de metabolismo se da cuando el organismo detecta escasez de nh4+ o amino\u00e1cidos. Asimismo, este microorganismo es capaz de reducir el no3- hasta nitr\u00f3geno elemental a trav\u00e9s de una cadena respiratoria. Mediante esta v\u00eda, el no3- es utilizado como aceptor terminal de electrones, logrando una fuente de energ\u00eda alternativa cuando la concentraci\u00f3n de ox\u00edgeno se vuelve limitante para el crecimiento.  los resultados derivados del estudio de ambas v\u00edas han suscitado un gran inter\u00e9s biotecnol\u00f3gico dada la capacidad potencial de estos microorganismos para ser utilizados en la biorremediaci\u00f3n de suelos altamente eutr\u00f3ficos. Estos suelos, generados por el uso abusivo de fertilizantes y con una alta concentraci\u00f3n de sales, suponen un peligro para las actividades humanas debido a la posibilidad de contaminar acu\u00edferos subterr\u00e1neos a trav\u00e9s de su lixiviaci\u00f3n. Dado que la respiraci\u00f3n y la asimilaci\u00f3n de no3- son dos v\u00edas inducibles en hfx. Mediterranei, el estudio de ambas rutas metab\u00f3licas y su posible empleo en biorremediaci\u00f3n se encuentran totalmente subordinados a las condiciones del medio en que se desarrolla el microorganismo. A partir de esta premisa, se genera la necesidad de alcanzar una expresi\u00f3n controlada de la maquinaria enzim\u00e1tica de ambas rutas, bien para profundizar en su caracterizaci\u00f3n o bien para estudiar su posible aplicaci\u00f3n.  los m\u00e9todos de expresi\u00f3n heter\u00f3loga utilizando e. Coli como hu\u00e9sped han resultado efectivos para obtener de forma activa un gran n\u00famero de enzimas halof\u00edlicas. No obstante, parece que las condiciones existentes en el citoplasma de este hu\u00e9sped mes\u00f3filo no son las adecuadas para la expresi\u00f3n de enzimas dependientes de cofactores complejos como las presentes en la maquinaria asimilativa y respiratoria del no3-. Asimismo, los protocolos de renaturalizaci\u00f3n a partir de cuerpos de inclusi\u00f3n, tampoco han ofrecido una soluci\u00f3n efectiva a este problema. Esto se debe a que la incorporaci\u00f3n de cofactores durante el plegamiento de estas enzimas, es un proceso complejo que depende en gran medida de maquinarias enzim\u00e1ticas auxiliares especializadas en el plegamiento de prote\u00ednas.  a lo largo de este trabajo, se han buscado alternativas a la t\u00e9cnica de expresi\u00f3n heter\u00f3loga con el objetivo de mejorar los rendimientos y el control de la expresi\u00f3n dependientes del microorganismo. Para lograr este objetivo, se han abierto dos l\u00edneas de investigaci\u00f3n alternativas. En la primera de ellas, se ha estudiado todo lo relacionado con la s\u00edntesis de centros [fe-s] en organismos halof\u00edlicos. Estos cofactores met\u00e1licos est\u00e1n presentes en un gran n\u00famero de enzimas involucradas en la asimilaci\u00f3n y respiraci\u00f3n. Asimismo, mediante el estudio de otros organismos, se sabe que la s\u00edntesis de estos centros no ocurre de manera espont\u00e1nea sino que requiere de diversas maquinarias celulares espec\u00edficas. La enzima central de estos complejos es una ciste\u00edn desulfurasa (cd) denominada com\u00fanmente como prote\u00edna tipo nifs. De esta manera, gran parte de la investigaci\u00f3n de este trabajo se ha centrado en la identificaci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de enzimas con actividad cd presentes en organismos hal\u00f3filos, a trav\u00e9s de una aproximaci\u00f3n tanto gen\u00f3mica como prote\u00f3mica. En este sentido, se han descubierto, clasificado y caracterizado varias enzimas tipo nifs involucradas en mayor o menor grado en la de s\u00edntesis de centros [fe-s] de organismos hal\u00f3filos. De igual manera, se ha valorado su posible aplicaci\u00f3n para la renaturalizaci\u00f3n in vitro de la nitrito reductasa asimilativa de hfx. Mediterranei (hm-nir).  en la segunda l\u00ednea de investigaci\u00f3n, se ha trabajado con la posibilidad de reemplazar la expresi\u00f3n heter\u00f3loga en e. Coli por una expresi\u00f3n hom\u00f3loga en un organismo hal\u00f3filo como hfx. Volcanii. Al lograr este objetivo, se evita tener que llevar a cabo renaturalizaci\u00f3n in vitro de la prote\u00edna expresada, ya que te\u00f3ricamente el citoplasma del hu\u00e9sped halof\u00edlico proporciona gran parte de las condiciones necesarias para el plegamiento espont\u00e1neo de la prote\u00edna recombinante. Tras poner correctamente a punto la nueva t\u00e9cnica, se ha comprobado su utilidad llevando a cabo de manera eficiente la expresi\u00f3n y la caracterizaci\u00f3n tanto de la enzima asimilativa hm-nir, como de la nitrito reductasa respiratoria de hfx. Mediterranei (hm-nirk).  finalmente, cabe destacar que los datos obtenidos a partir de cada una de las dos l\u00edneas de investigaci\u00f3n han supuesto una gran aportaci\u00f3n al conjunto de t\u00e9cnicas empleadas en la expresi\u00f3n de prote\u00ednas halof\u00edlicas. Asimismo, se ha dado un primer paso hacia la compresi\u00f3n de los mecanismos presentes en haloarqueas para la s\u00edntesis de cofactores tan esenciales y tan ampliamente distribuidos como los centros [fe-s]. Asimismo, cabe destacar que a trav\u00e9s de este trabajo, se ha mejorado sustancialmente la caracterizaci\u00f3n a nivel f\u00edsico-qu\u00edmico, cin\u00e9tico y estructural de dos enzimas clave para la asimilaci\u00f3n y respiraci\u00f3n de no3- como son la hm-nir y la hm-nirk.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Expresi\u00f3n recombinante de prote\u00ednas relacionadas con el metabolismo del nitr\u00f3geno en haloferax mediterranei<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Expresi\u00f3n recombinante de prote\u00ednas relacionadas con el metabolismo del nitr\u00f3geno en haloferax mediterranei <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Basilio Zafrilla  Requena <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Alicante<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 22\/07\/2011<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Mar\u00eda Jos\u00e9 Bonete  P\u00e9rez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Jos\u00e9 Mar\u00eda Vega piqueres <\/li>\n<li>julia m. (secretario) Esclapez espliego (vocal)<\/li>\n<li>Juan  Luis Serra ferrer (vocal)<\/li>\n<li>Francisco Castillo rodriguez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Basilio Zafrilla Requena De un tiempo a esta parte, haloferax mediterranei se ha convertido en un modelo [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[19166,36606,27261,45171,978],"tags":[220629,20893,2152,4474,220630,19263],"class_list":["post-110543","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-alicante","category-biologia-molecular-de-microorganismos","category-bioquimica-y-microbiologia-de-los-procesos-fermentativos","category-compuestos-de-nitrogeno","category-metabolismo-microbiano","tag-basilio-zafrilla-requena","tag-francisco-castillo-rodriguez","tag-jose-maria-vega-piqueres","tag-juan-luis-serra-ferrer","tag-julia-m-secretario-esclapez-espliego","tag-maria-jose-bonete-perez"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/110543","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=110543"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/110543\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=110543"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=110543"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=110543"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}