{"id":110942,"date":"2018-03-11T10:37:15","date_gmt":"2018-03-11T10:37:15","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-del-desarrollo-de-la-baya-de-vid-y-produccion-de-resveratrol-en-cultivos-celulares-mediante-las-tecnicas-de-proteomica-cuantitativa-dige-e-itraq\/"},"modified":"2018-03-11T10:37:15","modified_gmt":"2018-03-11T10:37:15","slug":"estudio-del-desarrollo-de-la-baya-de-vid-y-produccion-de-resveratrol-en-cultivos-celulares-mediante-las-tecnicas-de-proteomica-cuantitativa-dige-e-itraq","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/proteinas\/estudio-del-desarrollo-de-la-baya-de-vid-y-produccion-de-resveratrol-en-cultivos-celulares-mediante-las-tecnicas-de-proteomica-cuantitativa-dige-e-itraq\/","title":{"rendered":"Estudio del desarrollo de la baya de vid y producci\u00f3n de resveratrol en cultivos celulares mediante las t\u00e9cnicas de prote\u00f3mica cuantitativa dige e itraq"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Mar\u00eda Jos\u00e9 Mart\u00ednez Esteso <\/strong><\/h2>\n<p>La vid (vitis vinifera) pertenece a la familia de las vitaceas y es en t\u00e9rminos econ\u00f3micos el cultivo frut\u00edcola m\u00e1s importante a nivel mundial, con superficies cultivadas superiores a 7,4 millones de hect\u00e1reas (fao, 2007). De forma aproximada, el 71% de la producci\u00f3n es utilizado en el vino, el 27% como fruto fresco y el 2% como fruto seco. La baya de vid es un fruto no climat\u00e9rico que presenta una curva de crecimiento doble sigmoidal, que consta de dos fases del crecimiento bien diferenciadas separadas por una fase estacionaria. la fitoalexina producida en la vid es el resveratrol (r). El resveratrol es un compuesto perteneciente a la familia de estilbenos, formado como producto final de la ruta de fenilpropanoides en una rama alternativa a la s\u00edntesis de flavonoides por medio de la enzima estilbeno sintasa. El r es un metabolito particularmente interesante por sus probadas propiedades potencialmente beneficiosas para la salud humana por su alta actividad antioxidante, por presentar efectos cardioprotectores, inhibici\u00f3n del crecimiento tumoral en cultivos celulares y algunos modelos animales, entre otras propiedades. los cultivos celulares de vid son sistemas modelo de reducida complejidad para el estudio de mecanismos de defensa y s\u00edntesis de fitoalexinas en respuesta a elicitores.  el objetivo general de esta tesis es estudiar los aspectos de la biolog\u00eda de la vid planteados en la introducci\u00f3n mediante la aplicaci\u00f3n de las aproximaciones de prote\u00f3mica cuantitativa libres de hip\u00f3tesis, dige e itraq, as\u00ed como an\u00e1lisis funcional mediante el software blast2go, para caracterizar los procesos biol\u00f3gicos relacionados con la calidad de las bayas de vid y la producci\u00f3n de resveratrol. Los procesos biol\u00f3gicos de inter\u00e9s destacados se tratan en esta tesis en dos partes. La primera parte comprende el estudio del desarrollo de la baya de vid (cv. Muscat hamburg) con el objetivo espec\u00edfico de la caracterizaci\u00f3n del proteoma diferencial desregulado durante el desarrollo completo de la baya de vid en los tejidos de mesocarpo y exocarpo para detectar las prote\u00ednas, rutas metab\u00f3licas y procesos biol\u00f3gicos relevantes para la calidad de la baya de vid en estos tejidos. La segunda parte recoge el estudio de la s\u00edntesis de resveratrol como parte de las respuestas de defensa mediante a los cultivos celulares de vid (cv. Gamay) debido a la elicitaci\u00f3n con metil jamonato (meja) y ciclodextrina dimetilada (mbcd) con el objectivo espec\u00edfico de caracterizar el proteoma diferencial desregulado y perfil de estilbenos en el medio extracelular e intracelular para desvelar un nuevo conocimiento de los procesos del proceso de bios\u00edntesis de resveratrol y su acumulaci\u00f3n extracelular y profundizar en otras respuestas de defensa inducidas por la elicitaci\u00f3n. en la primera parte de la tesis se muestrean siete estad\u00edos del desarrollo, cuatro pertenecientes a la primera fase del desarrollo: cuajado, 4mm, 7mm, 15mm seleccionados en base al di\u00e1metro del fruto y en maduraci\u00f3n se recogen tres estad\u00edos, envero (v-100) y dos estad\u00edos seleccionados en base a la densidad del fruto (110 y 140 g\/l). Se identifican y cuantifican mediante las t\u00e9cnicas de prote\u00f3mica cuantitativa dige e itraq, 154 y 411 prote\u00ednas, respectivamente para la primera fase del desarrollo de la baya de vid en pericarpo y 67 y 613 prote\u00ednas, respectivamente para la segunda fase de maduraci\u00f3n de la baya en mesocarpo. El an\u00e1lisis en detalle de las prote\u00ednas identificadas llev\u00f3 a detectar con ambas t\u00e9cnicas los mayores cambios del proteoma al final de la primera fase del desarrollo (7mm-15mm) y comienzo de maduraci\u00f3n (15mm-v100, v100-110g\/l). El an\u00e1lisis itraq ha permitido una cobertura del proteoma diferencial de vid entre 2 y 6 veces superior al an\u00e1lisis mediante la t\u00e9cnica dige para el an\u00e1lisis de la primera fase del desarrollo y maduraci\u00f3n, respectivamente. Sin embargo, la separaci\u00f3n a nivel de prote\u00edna y no de p\u00e9ptido mediante dige ofrece una informaci\u00f3n m\u00e1s robusta de la existencia de diferentes isoformas y especies de prote\u00ednas, lo que evidencia la complementariedad de ambas estrategias. El an\u00e1lisis de exocarpo llev\u00f3 a cuantificar 513 prote\u00ednas mediante la t\u00e9cnica itraq.  las prote\u00ednas identificadas y cuantificadas en ambas fases del desarrollo y en los tejidos de pericarpo, mesocarpo y exocarpo, se analizaron mediante un an\u00e1lisis funcional mediante el software blast2go tras la aplicaci\u00f3n de un an\u00e1lisis de enriquecimiento de t\u00e9rminos go basado en el test de fisher que permiti\u00f3 detectar lo t\u00e9rminos enriquecidos destacados para cada una de las fases del desarrollo tanto de procesos biol\u00f3gicos, componentes celulares y funci\u00f3n molecular. El proteoma diferencial de exocarpo y mesocarpo de la baya aporta una informaci\u00f3n valiosa en cuanto a procesos determinantes para la calidad del fruto y sus productos derivados, destacando estos procesos: -identificaci\u00f3n de par\u00e1logos espec\u00edficos glutati\u00f3n-s-transferasa (gst-tau1) con perfiles de acumulaci\u00f3n paralelos a la prote\u00edna ufgt, lo que sugiere su implicaci\u00f3n en el transporte y acumulaci\u00f3n de antocianinas en la vacuola.  -identificaci\u00f3n de prote\u00ednas relacionadas con la s\u00edntesis de monoterpenos en piel y mesocarpo, prote\u00ednas candidatas como posibles biomarcadores del aroma de las bayas de vid espec\u00edficamente con la variedad cv. Muscat hamburg. -identificaci\u00f3n en exocarpo de prote\u00ednas implicadas en la ruta del \u00e1cido octadecanoico que indican la s\u00edntesis de compuestos arom\u00e1ticos. -identificaci\u00f3n de isoflavona reductasa like-6 validada a nivel de transcrito no caracterizada en vid y posiblemente implicada en la s\u00edntesis de fenilpropanoides vol\u00e1tiles relacionados con el desarrollo de aromas. el proteoma diferencial de mesocarpo y exocarpo de la baya de vid aporta una informaci\u00f3n valiosa en cuanto a procesos determinantes del desarrollo del fruto. Los perfiles de prote\u00ednas obtenidos apoyan la formulaci\u00f3n de nuevas hip\u00f3tesis que ayudan a esclarecer las rutas metab\u00f3licas que act\u00faan en cada fase del desarrollo del fruto de vid en relaci\u00f3n a: metabolismo energ\u00e9tico (fotos\u00edntesis, respiraci\u00f3n y fermentaci\u00f3n), metabolismo de amino \u00e1cidos y nitr\u00f3geno, metabolismo secundario, transporte, metabolismo de carbohidratos, metabolismo de l\u00edpidos, stress y biog\u00e9nesis de componentes celulares. Cabe destacar por su implicaci\u00f3n en el balance az\u00facar\/\u00e1cido, la detecci\u00f3n de puntos clave para entender el metabolismo de carbohidratos en perocarpo\/mesocarpo de los intercambios entre las enzimas siguientes: invertasa \u00e1cida vacuolar (inv)\/sacarosa sintasa (susy), fosfofructoquinasa dependiente de pirofosfato (pfp) y fosfofructoquinasa (pfk-1), as\u00ed como de fosfoenolpiruvato carboxiquinasa (pepck) y malato deshidrogenasa (mdhc). en la segunda parte de la tesis se estudia las respuestas de defensa y producci\u00f3n de resveratrol en cultivos celulares de vid (cv. Gamay) a nivel del proteoma y perfil de estilbenos tras la comparaci\u00f3n de los medios extra- e intracelulares tras los tratamientos de elicitaci\u00f3n a 96 horas: control, meja, mbcd y mbcd+meja. En el medio extracelular el proteoma se estudi\u00f3 mediante electroforesis bidimensional convencional detectando 233 spots y seleccionando 39 spots diferenciales. Se identificaron 25 spots codificados por 10 genes diferentes, detectando diferentes isoformas y especies de prote\u00ednas diferenciadas por pi y mw. Las prote\u00ednas identificadas se agruparon en peroxidasas, prote\u00ednas pr y prote\u00ednas apopl\u00e1sticas. En el medio intracelular, analizado por dige, se detectaron 1031 spots, seleccionando como diferenciales 67 e identificando 58 spots y nos centramos en aquellas prote\u00ednas con funciones relacionadas con el ciclo de divisi\u00f3n celular, la producci\u00f3n de resveratrol y prote\u00ednas de defensa. El perfil de estilbenos indica que el medio intracelular acumula formas libres y glicosiladas de r mientras que solamente las formas libres se secretan al medio extracelular. En cualquier caso, los niveles de resveratrol aumentan por el tratamiento de elicitaci\u00f3n de forma creciente a meja, mbcd y mbcd+meja, existiendo un efecto sin\u00e9rgico en la acumulaci\u00f3n de r en el tratamiento combinado de ambos elicitores. Aunque en caso del tratamiento con mbcd o mbcd+meja, las grandes cantidades de r producidas se acumulan en el medio extracelular. En el control las peque\u00f1as cantidades de r permanecen en el medio intracelular y por tratamiento con meja aunque no existe s\u00edntesis de novo, s\u00ed que hay una translocaci\u00f3n de t-r al medio extracelular. Los niveles de pice\u00eddas en el medio intracelular no var\u00edan pr\u00e1cticamente por la elicitaci\u00f3n. En todos los casos los niveles de las formas isom\u00e9ricas trans- fueron superiores a las formas cis-. Los resultados obtenidos en esta segunda parte de la tesis muestran que la elicitaci\u00f3n de cultivos celulares de vid por la acci\u00f3n combinada de ambos elicitores induce la acumulaci\u00f3n extracelular de t-r, de isoformas b\u00e1sicas de peroxidasas (peroxidasa secretora b\u00e1sica clase iii), prote\u00ednas pr (ntpr27, quitinasa iii, \u00edY-1,3-glucanasa) y refuerzo de las paredes celulares (xiloglucano endotransglicosilasa, subtilisin proteasa, comt, pcber), mientras que el efecto aislado de meja influye en el proceso de divisi\u00f3n celular probablemente mediante la reducci\u00f3n de los nivles de samsy. El tratamiento con meja produce una represi\u00f3n de la acumulaci\u00f3n de prote\u00ednas de defensa apopl\u00e1sticas y la acumulaci\u00f3n intracelular de una isoformas de pr-10, lo que implicar\u00eda un papel alternativo a la defensa de esta prote\u00edna. La isoforma de peroxidasa secretora b\u00e1sica clase iii inducida por mbcd (cdi-poxiii) y quitinasa iii, probablemente relacionadas con sar apuntan como posibles biomarcadores de respuesta de defensa por su papel predominante en la elicitaci\u00f3n con mbcd. La acumulaci\u00f3n de gst clase tau2 con perfiles de acumulaci\u00f3n paralelos a estilbeno sintasa y la acumulaci\u00f3n extracelular de t-r sugiere su implicaci\u00f3n en un sistema de transporte extracelular de t-r.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio del desarrollo de la baya de vid y producci\u00f3n de resveratrol en cultivos celulares mediante las t\u00e9cnicas de prote\u00f3mica cuantitativa dige e itraq<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio del desarrollo de la baya de vid y producci\u00f3n de resveratrol en cultivos celulares mediante las t\u00e9cnicas de prote\u00f3mica cuantitativa dige e itraq <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Mar\u00eda Jos\u00e9 Mart\u00ednez Esteso <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Alicante<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 19\/09\/2011<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Roque Bru Martinez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Mar\u00eda jos\u00e9 Bonete  p\u00e9rez <\/li>\n<li>Ana Mar\u00eda Maldonado alconada (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda Jos\u00e9 Carmona quiles (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda  purificaci\u00f3n Corchete s\u00e1nchez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Mar\u00eda Jos\u00e9 Mart\u00ednez Esteso La vid (vitis vinifera) pertenece a la familia de las vitaceas y es 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