{"id":111020,"date":"2018-03-11T10:37:20","date_gmt":"2018-03-11T10:37:20","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/caracterizacion-de-autoanta%c2%adgenos-en-la-diabetes-tipo-1-papel-de-las-galectinas-en-la-etiopatogenia-de-la-enfermedad\/"},"modified":"2018-03-11T10:37:20","modified_gmt":"2018-03-11T10:37:20","slug":"caracterizacion-de-autoanta%c2%adgenos-en-la-diabetes-tipo-1-papel-de-las-galectinas-en-la-etiopatogenia-de-la-enfermedad","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica\/caracterizacion-de-autoanta%c2%adgenos-en-la-diabetes-tipo-1-papel-de-las-galectinas-en-la-etiopatogenia-de-la-enfermedad\/","title":{"rendered":"Caracterizaci\u00f3n de autoant\u00edgenos en la diabetes tipo 1. papel de las galectinas en la etiopatogenia de la enfermedad"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Iria Mar\u00eda G\u00f3mez Touri\u00f1o <\/strong><\/h2>\n<p>La diabetes tipo 1 es una enfermedad autoinmune en la que las c\u00e9lulas \u00edY de los islotes de langerhans son selectivamente destruidas por linfocitos t autorreactivos espec\u00edficos para ant\u00edgenos propios de estas c\u00e9lulas (autoant\u00edgenos), disminuy\u00e9ndose gravemente la cantidad de insulina secretada, lo que conduce a la patogenia de la enfermedad. Estos linfocitos t autorreactivos pueden haber sido generados por alteraciones en la tolerancia central y\/o en la tolerancia perif\u00e9rica. Por todo ello en este trabajo de tesis nos hemos propuesto i) clonar, expresar y purificar autoant\u00edgenos importantes en la diabetes tipo 1 para desarrollar sistemas de detecci\u00f3n de autoanticuerpos espec\u00edficos contra ellos; ii) identificar los epitopos derivados del autoant\u00edgeno s100\u00edY procesados y presentados de manera natural a linfocitos t por mol\u00e9culas de histocompatibilidad que confieren susceptibilidad a padecer la enfermedad (hla-drb1*04:01 y hla-a*02:01); y iii) estudiar la s\u00edntesis de galectinas en sujetos sanos y pacientes con diabetes tipo 1, ya que estas prote\u00ednas desempe\u00f1an un papel importante en el mantenimiento de la tolerancia central y perif\u00e9rica. en el presente trabajo se han clonado, expresado y purificado los autoant\u00edgenos igrp (subunidad catal\u00edtica de la glucosa-6-fosfatasa espec\u00edfica de los islotes), gfap (prote\u00edna \u00e1cida de la gl\u00eda) y s100\u00edY, las dos \u00faltimas en cantidades y pureza suficientes como para llevar a cabo los experimentos subsiguientes. Se han desarrollado dos sistemas de elisa para la detecci\u00f3n de autoanticuerpos contra gfap y s100\u00edY: en el caso de gfap la sensibilidad del ensayo es de 24,6% con una especificidad del 98,9% y un valor predictivo del 94,7%, existiendo diferencias significativas en la frecuencia de individuos positivos en pacientes con diabetes tipo 1 respecto de controles sanos, adem\u00e1s de poseer aqu\u00e9llos t\u00edtulos de anticuerpo superiores, que correlacionan con el tiempo transcurrido desde el diagn\u00f3stico y con el n\u00famero de complicaciones diab\u00e9ticas. En lo que respecta a s100\u00edY no existen diferencias ni en frecuencia de positividad ni en t\u00edtulo de autoanticuerpos entre controles y pacientes. Sin embargo por western blot se ha detectado un tipo de autoanticuerpo presente exclusivamente en los pacientes diab\u00e9ticos, que sugiere la presencia de una respuesta humoral diferente contra este autoant\u00edgeno en comparaci\u00f3n con controles sanos. se han identificado p\u00e9ptidos derivados del autoant\u00edgeno s100\u00edY procesados y presentados de manera natural (pppmn) tanto por la mol\u00e9cula de histocompatibilidad hla-drb1*04:01 (dr4) como por la mol\u00e9cula hla-a*02:01 (a2.1). En el caso de dr4 se ha dise\u00f1ado un sistema de presentaci\u00f3n de ant\u00edgeno en c\u00e9lulas homocigotas para dr4 a las que se les suministr\u00f3 s100\u00edY, se han inmunopurificado las mol\u00e9culas dr4, y los p\u00e9ptidos unidos a ellas han sido identificados por espectrometr\u00eda de masas. Los 44 pppmn identificados se solapan parcialmente, como era de esperar para una mol\u00e9cula de histocompatibilidad de clase ii, constituyendo 3 regiones, de las que hemos dise\u00f1ado 4 p\u00e9ptidos consenso: s100 6-25, s100 21-36, s100 25-46 y s100 68-92. En un ensayo de uni\u00f3n in vitro a dr4 se ha comprobado que s100 68-92 y, en menor medida, s100 6-25 se unen in vitro a dr4, siendo el complejo resultante estable, y se ha delimitado la posible secuencia de uni\u00f3n. A continuaci\u00f3n se ha detectado la presencia de linfocitos t autorreactivos espec\u00edficos para estos epitopos en controles sanos y pacientes diab\u00e9ticos mediante ensayos de elispot para las citocinas ifn-\u00c2\u00bf, il-10 e il-17. Los pacientes muestran un fenotipo claramente proinflamatorio, con linfocitos t autorreactivos espec\u00edficos para los p\u00e9ptidos consenso de s100\u00edY secretando ifn-\u00c2\u00bf y, en menor medida, il-17. Los controles muestran, sin embargo, un fenotipo inmunoregulador, secretando il-10 en respuesta a estos p\u00e9ptidos, especialmente contra s100 68-92. En el caso de a2.1 se han generado c\u00e9lulas dobles transfectantes que expresan a2.1 y s100\u00edY, de las cuales se han extra\u00eddo los p\u00e9ptidos presentados por dichas mol\u00e9culas de histocompatibilidad y se han identificado 5 pppmn por espectrometr\u00eda de masas. Mediante un ensayo in vitro se ha comprobado que al menos dos de los 5 pppmn (s100 10-18 y s100 20-28) pueden haber sido generados por digesti\u00f3n en el proteosoma, un complejo multicatal\u00edtico clave en la generaci\u00f3n de p\u00e9ptidos para su uni\u00f3n a mol\u00e9culas de histocompatibilidad de clase i. Finalmente, hemos ensayado la capacidad de uni\u00f3n in vitro de estos pppmn a la mol\u00e9cula a2.1, resultando que el p\u00e9ptido s100 10-18 se une con baja afinidad a la mol\u00e9cula de histocompatibilidad, caracter\u00edstica compartida por otros p\u00e9ptidos derivados de autoant\u00edgenos descritos en la literatura. Se han generado adem\u00e1s hibridomas a partir de linfocitos t infiltrantes de islotes de langerhans de ratones nod (no obesos diab\u00e9ticos), el modelo animal de la diabetes tipo 1. Hemos comprobado que al menos 2 de los siete hibridomas generados son espec\u00edficos de s100\u00edY, ya que reconocen epitopos derivados de esta prote\u00edna presentados por mol\u00e9culas de histocompatibilidad de clase ii. finalmente, y teniendo en cuenta el gran papel inmunoregulador que desempe\u00f1an las galectinas -1 y -3 al mantener la tolerancia central y perif\u00e9rica, en el presente trabajo se ha estudiado la s\u00edntesis de estas galectinas, en primer lugar, en diferentes subtipos de linfocitos t colaboradores (th), y en segundo lugar en distintos tipos celulares de controles sanos y pacientes con diabetes tipo 1. En lo que respecta a los linfocitos th, es el subtipo th17 el que mayores niveles de galectina-1 y -3 produce, respecto de los linfocitos th1 y th2. En cuanto al estudio en controles sanos y pacientes con diabetes tipo 1, c\u00e9lulas mononucleares de sangre perif\u00e9rica (pbmcs) de pacientes secretan menores cantidades de ambas galectinas respecto de controles sanos. La secreci\u00f3n reducida de galectina-1 es debida a c\u00e9lulas carentes del marcador cd4 (monocitos, linfocitos b y\/o linfocitos t cd8+), reducci\u00f3n que supone una mayor resistencia de los linfocitos t autorreactivos a la muerte por apoptosis. Los linfocitos t cd4+ de diab\u00e9ticos no presentan problemas de secreci\u00f3n de galectina-1, pero poseen niveles significativamente mayores de galectina-1 en superficie, que tambi\u00e9n conllevan una mayor resistencia a la muerte por apoptosis. Finalmente, los linfocitos t reguladores (treg) de diab\u00e9ticos poseen menores niveles de galectina-1 en superficie, probablemente reduciendo su poder supresor. as\u00ed pues en este trabajo de tesis se purifican autoant\u00edgenos importantes en la diabetes autoinmune, se desarrollan t\u00e9cnicas de elisa para la detecci\u00f3n de autoanticuerpos espec\u00edficos contra ellos, se identifican pppmn derivados de s100\u00edY y presentados por mol\u00e9culas de histocompatibilidad que confieren susceptibilidad a padecer la enfermedad, se detectan linfocitos t autorreactivos espec\u00edficos para p\u00e9ptidos derivados de s100\u00edY en pacientes diab\u00e9ticos, se generan hibridomas de linfocitos t infiltrantes de rat\u00f3n nod que reconocen s100\u00edY y se describen varios fallos en la s\u00edntesis de galectinas por parte de c\u00e9lulas de pacientes con diabetes tipo 1 respecto de controles sanos.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Caracterizaci\u00f3n de autoant\u00edgenos en la diabetes tipo 1. papel de las galectinas en la etiopatogenia de la enfermedad<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Caracterizaci\u00f3n de autoant\u00edgenos en la diabetes tipo 1. papel de las galectinas en la etiopatogenia de la enfermedad <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Iria Mar\u00eda G\u00f3mez Touri\u00f1o <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Santiago de compostela<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 23\/09\/2011<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Manuel F\u00e9lix Cami\u00f1a Darriba<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: africa Gonzalez fernandez <\/li>\n<li>mark johan Van raaij (vocal)<\/li>\n<li>Francisco Javier Benavente mart\u00ednez (vocal)<\/li>\n<li>joan Verdaguer autonell (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Iria Mar\u00eda G\u00f3mez Touri\u00f1o La diabetes tipo 1 es una enfermedad autoinmune en la que las c\u00e9lulas 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