{"id":111139,"date":"2018-03-11T10:37:31","date_gmt":"2018-03-11T10:37:31","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estudio-de-la-funcionalidad-espermatica-interaccion-de-gametos-y-analisis-proteico-en-espermatozoides-epididimarios-y-eyaculados-en-la-especie-porcina\/"},"modified":"2018-03-11T10:37:31","modified_gmt":"2018-03-11T10:37:31","slug":"estudio-de-la-funcionalidad-espermatica-interaccion-de-gametos-y-analisis-proteico-en-espermatozoides-epididimarios-y-eyaculados-en-la-especie-porcina","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/fisiologia-de-la-reproduccion\/estudio-de-la-funcionalidad-espermatica-interaccion-de-gametos-y-analisis-proteico-en-espermatozoides-epididimarios-y-eyaculados-en-la-especie-porcina\/","title":{"rendered":"Estudio de la funcionalidad esperm\u00e1tica, interacci\u00f3n de gametos y an\u00e1lisis proteico en espermatozoides epididimarios y eyaculados en la especie porcina"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Karen Guadalupe Aviles Lopez <\/strong><\/h2>\n<p>La capacitaci\u00f3n es un proceso fisiol\u00f3gico que el espermatozoide debe experimentar para que la fecundaci\u00f3n del ovocito tenga lugar. Este proceso se encuentra regulado en el espermatozoide por diferentes v\u00edas moleculares, varias de las cuales, a d\u00eda de hoy, se desconocen o no est\u00e1n totalmente dilucidadas. Estos eventos moleculares que acontecen en el espermatozoide durante el proceso de capacitaci\u00f3n est\u00e1n condicionados por distintos factores que rodean su entorno, entre los cuales podemos destacar el ambiente epididimario, el plasma seminal o las secreciones del aparato reproductor femenino como el fluido oviductal.   \t el objetivo principal de este trabajo fue analizar el comportamiento de espermatozoides epididimarios-ep (en contacto con el fluido epididimario y no con el plasma seminal) y eyaculados-ey (en contacto con el plasma seminal) sometidos a 3 tratamientos diferentes: 1) espermatozoides no tratados (grupo control-c); 2) lavados a trav\u00e9s de gradientes de percoll e incubados en medio de capacitaci\u00f3n talp (grupo lavados-l); 3) espermatozoides lavados e incubados en fluido oviductal porcino (grupo fop).  Los espermatozoides de los diferentes grupos experimentales fueron analizados mediante diversas t\u00e9cnicas seg\u00fan los experimentos realizados:   &quot;\texperiencia i &#8211; an\u00e1lisis esperm\u00e1tico: se analizaron los par\u00e1metros de motilidad, descondensaci\u00f3n de la cromatina y reacci\u00f3n acros\u00f3mica.  &quot;\texperiencia ii &#8211; an\u00e1lisis de la interacci\u00f3n de gametos y fecundaci\u00f3n: se evalu\u00f3 la uni\u00f3n esperm\u00e1tica a la zona pel\u00facida y la activaci\u00f3n y formaci\u00f3n pronuclear mediante la inyecci\u00f3n intracitoplasm\u00e1tica de espermatozoides (icsi).  &quot;\texperiencia iii &#8211; an\u00e1lisis de la fosforilaci\u00f3n de la tirosina: evaluado mediante western-blot (wb)  e inmunofluorescencia indirecta (ifi).  i. \tAl realizar el an\u00e1lisis de los par\u00e1metros de motilidad en los 6 grupos experimentales, (ep y ey x c, l y l-fop) observamos que en los espermatozoides de ep el grupo c se comportaba de diferente manera en pr\u00e1cticamente todos los par\u00e1metros respecto al grupo l, sin embargo el grupo fop en algunos casos era similar al grupo c y en otros a ambos grupos (c y l). Si comparamos los 3 grupos experimentales de espermatozoides ey entre s\u00ed, el grupo c en la mayor\u00eda de los par\u00e1metros estudiados se comportaban de manera diferente a los grupos l y l-fop, siendo estos similares en la mayor\u00eda de los par\u00e1metros analizados. Por otro lado, observamos una menor descondensaci\u00f3n de la cromatina en los grupos c, en relaci\u00f3n a los grupos l y l-fop. Adem\u00e1s, se evalu\u00f3 la reacci\u00f3n acros\u00f3mica a diferentes tiempos de incubaci\u00f3n de los espermatozoides con medio de capacitaci\u00f3n (ep: c, 0h, 3h y fop-3h; ey: c, 0h, 3h y fop-3h). Los valores m\u00e1s elevados de espermatozoides reaccionados correspondieron al grupo fop-3h. \t \ten t\u00e9rminos generales y para los par\u00e1metros estudiados, observamos que los grupos l y l-fop independientemente del origen esperm\u00e1tico se comportan de una manera similar entre s\u00ed y diferentes de los grupos c.   ii.\tEn el grupo de espermatozoides incubados con fop se observ\u00f3, en ambos tipos de espermatozoides (ep y ey), un descenso de estos a la uni\u00f3n a la zona pel\u00facida comparado con los otros 2 grupos experimentales, donde en el grupo c se obtuvieron los valores m\u00e1s elevados de uni\u00f3n. En el caso de la inyecci\u00f3n intracitoplasm\u00e1tica de espermatozoides, la activaci\u00f3n ovocitaria y la descondensaci\u00f3n esperm\u00e1tica fueron menores en el grupo ep que en el ey. Observamos una mayor activaci\u00f3n y descondensaci\u00f3n esperm\u00e1tica en los grupos l y l-fop correspondiente al grupo ey.  \tteniendo en cuenta todos los datos de este apartado, podemos decir que el fop modula la uni\u00f3n esperm\u00e1tica a la zp y a su vez, junto con el grupo l, provoca una mayor activaci\u00f3n ovocitaria y grado de descondensaci\u00f3n esperm\u00e1tica.  iii.  En esta \u00faltima experiencia se analiz\u00f3 la fosforilaci\u00f3n de residuos de tirosina. En primer lugar se analiz\u00f3 la fosforilaci\u00f3n mediante wb. En t\u00e9rminos generales, encontramos bandas reactivas a la fosforilaci\u00f3n de tirosina entre 15 y 175 kda. Una de las diferencias significativas entre espermatozoides ep y ey, fue la ausencia de la banda de 20 kda en el grupo c de ey, con respecto al resto de grupos experimentales. Adem\u00e1s, y seg\u00fan la bibliograf\u00eda unas de las prote\u00ednas m\u00e1s importantes a la hora de valorar la capacitaci\u00f3n en la especie porcina es la fosforilaci\u00f3n de la banda de 32 kda (p32). En espermatozoides de ep, \u00e9sta aparece fosforilada con poca intensidad en los grupos c y l. En el grupo ey, aparece claramente en el grupo l pero no en el grupo c.   teniendo en cuenta por separado los experimentos realizados en este apartado:  &quot;\tefecto de la presencia alb\u00famina (bsa): el patr\u00f3n de bandas fosforiladas fue similar, independientemente del uso de bsa.  &quot;\tefecto de la incubaci\u00f3n con fop: en espermatozoides ep el grupo c y l presentaban menos fosforilaci\u00f3n de la p32 que en el grupo fop. En el grupo ey no se encontraron diferencias sobre el patr\u00f3n de bandas con respecto al grupo l cuando se incubaron los espermatozoides en fop.   &quot;\tefecto del tiempo de incubaci\u00f3n: el tiempo de incubaci\u00f3n influye en mayor medida en los espermatozoides de ep, donde a las 4 horas de incubaci\u00f3n, las bandas de 44, 42 y 32 kda aumentan en intensidad con respecto a los otros grupos experimentales de ep, adquiriendo un patr\u00f3n similar a los espermatozoides ey.  \tpor \u00faltimo, se analiz\u00f3 la localizaci\u00f3n de la fosforilaci\u00f3n de tirosina mediante ifi en los espermatozoides sometidos a los mismos tiempos de incubaci\u00f3n que el experimento anterior. Se obtuvieron 8 patrones diferentes de fosforilaci\u00f3n los cuales fueron reagrupados en 3:   i.\tEspermatozoides no capacitados: espermatozoides sin ninguna fluorescencia, fluorescencia baja o en regi\u00f3n acrosomal y\/o cola. ii.\tEspermatozoides capacitados fosforilados en las regiones subecuatorial y acrosomal. iii.\tEspermatozoides capacitados fosforilados en la regi\u00f3n subecuatorial, acrosoma y\/o cola.   \tlos grupos c presentaron el porcentaje m\u00e1s alto de espermatozoides con una baja fosforilaci\u00f3n o ausencia de la misma (no capacitados). En el caso de los espermatozoides considerados como capacitados encontramos que para el grupo de espermatozoides del grupo iii, el mayor porcentaje de espermatozoides inmunorreactivos a fosfotirosina se encontraron en los espermatozoides de ep (ep-l 0, 3 y 4h), seguido de ey-l 0h, mientras que los grupos fop (tanto en ep como ey) el porcentaje de fosforilaci\u00f3n fue menor. Esto nos podr\u00eda indicar el papel modulador del fop en el proceso de capacitaci\u00f3n.  por otro lado, la fosforilaci\u00f3n en el flagelo se asocia con la hiperactivaci\u00f3n. Nuestros resultados mostraron que en los grupos c y ey-0h la fosforilaci\u00f3n de la cola fue baja o nula con respecto al resto de grupos.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estudio de la funcionalidad esperm\u00e1tica, interacci\u00f3n de gametos y an\u00e1lisis proteico en espermatozoides epididimarios y eyaculados en la especie porcina<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estudio de la funcionalidad esperm\u00e1tica, interacci\u00f3n de gametos y an\u00e1lisis proteico en espermatozoides epididimarios y eyaculados en la especie porcina <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Karen Guadalupe Aviles Lopez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Murcia<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 29\/09\/2011<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Francisco Alberto Garcia Vazquez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: salvador Ruiz lopez <\/li>\n<li>Francisco Marco jim\u00e9nez (vocal)<\/li>\n<li>empar Garc\u00eda rosell\u00f3 (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 \u00e1lvaro Cebri\u00e1n p\u00e9rez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Karen Guadalupe Aviles Lopez La capacitaci\u00f3n es un proceso fisiol\u00f3gico que el espermatozoide debe experimentar para que [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center 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