{"id":111740,"date":"2011-11-11T00:00:00","date_gmt":"2011-11-11T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/mecanismos-regulatorios-de-las-actividades-oxidasa-en-marinomonas-mediterraneas\/"},"modified":"2011-11-11T00:00:00","modified_gmt":"2011-11-11T00:00:00","slug":"mecanismos-regulatorios-de-las-actividades-oxidasa-en-marinomonas-mediterraneas","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/microbiologia\/mecanismos-regulatorios-de-las-actividades-oxidasa-en-marinomonas-mediterraneas\/","title":{"rendered":"Mecanismos regulatorios de las actividades oxidasa en marinomonas mediterr\u00e1neas."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Luisa Raquel Molina Quintero <\/strong><\/h2>\n<p>La bacteria marina marinomonas mediterranea fue aislada de las costas murcianas del mar mediterr\u00e1neo y forma parte de la microbiota asociada a la planta marina posidonia oceanica. El inter\u00e9s de este microorganismo marino est\u00e1 basado en sus caracter\u00edsticas fisiol\u00f3gicas \u00fanicas. Es una bacteria gram-negativa y melanog\u00e9nica que expresa diferentes actividades oxidasa de inter\u00e9s biotecnol\u00f3gico. As\u00ed, posee todas las polifenol oxidasa (ppo) conocidas, ya que expresa dos cuproprote\u00ednas diferentes. La primera, conocida como ppoa, es una multicobre oxidasa (mco) con actividad lacasa y tirosinasa, cuya funci\u00f3n fisiol\u00f3gica a\u00fan es desconocida. La segunda ppo, ppob1, es una tirosinasa activable por sds que est\u00e1 implicada en la s\u00edntesis de melaninas. M. Mediterranea tambi\u00e9n sintetiza otra oxidasa, denominada loda, con actividad l-lisina-?-Oxidasa (lod) (ec 1.4.3.20). Esta enzima genera per\u00f3xido de hidr\u00f3geno como producto de la oxidaci\u00f3n de la l-lisina, lo que le confiere actividad antimicrobiana. Se ha demostrado que loda contribuye al desarrollo de biopel\u00edculas microbianas provocando muerte celular en el centro de las microcolonias. La gran variedad de actividades oxidasa expresadas por esta bacteria la convierten en un buen modelo para el estudio de la relevancia fisiol\u00f3gica de estas enzimas y de los mecanismos regulatorios de su expresi\u00f3n. una primera aproximaci\u00f3n seguida en esta tesis para el estudio de la relevancia fisiol\u00f3gica de las actividades oxidasa de m. Mediterranea, fue la construcci\u00f3n de mutantes con deleciones en los genes lodab, ppoa y ppob, as\u00ed como un doble mutante ppoa\/ppob. Estos mutantes fueron obtenidos con el marcador sacb, que hasta ahora ha sido muy poco utilizado en bacterias marinas. La deleci\u00f3n de un gen produjo la p\u00e9rdida de actividad enzim\u00e1tica de la prote\u00edna codificada por dicho gen, sin afectar a los niveles de las otras oxidasas, lo que indica que la expresi\u00f3n de cada oxidasa es independiente del resto. La deleci\u00f3n de las oxidasas no afecta al crecimiento ni a la supervivencia de m. Mediterranea en medios de cultivo con limitaci\u00f3n por fuente de carbono o de nitr\u00f3geno. En esta \u00faltima condici\u00f3n de cultivo, m. Mediterranea muestra una alta tasa de supervivencia incluso cuando sintetiza melaninas en presencia de l-tirosina. De igual manera, la deleci\u00f3n de dichos genes no afecta a la supervivencia celular en presencia de compuestos fen\u00f3licos u oxidantes.  en cuanto a los mecanismos regulatorios, la actividad lod es inducida por l-lisina, l-arginina, l-ornitina, l-norleucina y dap, de los cuales s\u00f3lo la l-lisina es sustrato de la enzima. Los estudios regulatorios utilizando tanto fusiones plodab-lacz, como la t\u00e9cnica de la pcr cuantitativa en tiempo real (qrt-pcr), revelaron que estos compuestos inductores act\u00faan a nivel post-transcripcional. Por otro lado, la actividad lod es reprimida a nivel transcripcional por el amino\u00e1cido l-tirosina. Estos efectos regulatorios de amino\u00e1cidos no afectan a las actividades ppo, siendo por tanto espec\u00edficas de lod. la actividad lod de m. Mediterranea parece tener otros elementos regulatorios comunes con las actividades ppo. Por un lado, todas son inducidas durante la fase estacionaria de crecimiento y por otro, los niveles de actividad enzim\u00e1tica de las mismas son mucho menores en el mutante t103. Este mutante est\u00e1 afectado en la histid\u00edn quinasa sensora de membrana ppos. Sin embargo, existen diferencias en el tipo de regulaci\u00f3n que sobre las tres oxidasas objeto de estudio, ya que ppos regula la actividad lod a nivel transcripcional, mientras que ppob est\u00e1 regulada a nivel post-transcripcional. La regulaci\u00f3n de ppoa parece ser tanto a nivel transcripcional como post-transcripcional. Estas observaciones sugieren que pueden estar interviniendo elementos adicionales en dicha regulaci\u00f3n. adem\u00e1s de t103, nuestro grupo hab\u00eda detectado otro mutante regulatorio afectado en las actividades ppo, llamado t102. En este trabajo se logr\u00f3, mediante el uso de la t\u00e9cnica del paseo cromos\u00f3mico, la clonaci\u00f3n y secuenciaci\u00f3n del gen interrumpido por el transpos\u00f3n mini-tn10 en el mutante t102. Este gen muestra similitud con los reguladores de respuesta en los sistemas de dos componentes y se le denomin\u00f3 ppor, por regulador de las actividades ppo. Mediante rt-pcr se ha demostrado que ppor forma parte de un oper\u00f3n junto con uvrc.  los mutantes t103 (ppos-) y t102 (ppor-) muestran gran similitud fenot\u00edpica. Ambos son amelanog\u00e9nicos, tienen bajos niveles de actividad ppo y en ninguno de los dos se detecta actividad lod. Tanto t103 como t102 est\u00e1n afectados en el crecimiento en medios limitados por nitr\u00f3geno y en la supervivencia celular en medios limitados por carbono. Todos estos datos constituyen evidencias gen\u00e9ticas de que ambas prote\u00ednas interaccionan en un mismo sistema de fosfotransferencia, que es una versi\u00f3n compleja de los sistemas regulatorios de dos componentes  sistemas similares a ppos\/ppor se han descrito en otras gammaproteobacterias, donde controlan diversos procesos celulares y reciben diferentes denominaciones, por ejemplo gacs\/gaca en pseudomonas. El sistema detectado en m. Mediterranea es el primero descrito que controla la expresi\u00f3n de una prote\u00edna antimicrobiana al mismo tiempo que la expresi\u00f3n de ppo, y con ello la s\u00edntesis de melaninas. Adem\u00e1s, tambi\u00e9n participa en el control de la muerte celular en medios limitados por carbono y en el crecimiento en medios limitados por nitr\u00f3geno.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Mecanismos regulatorios de las actividades oxidasa en marinomonas mediterr\u00e1neas.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Mecanismos regulatorios de las actividades oxidasa en marinomonas mediterr\u00e1neas. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Luisa Raquel Molina Quintero <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Murcia<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 11\/11\/2011<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Patricia Lucas El\u00edo<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Francisco Garc\u00eda carmona <\/li>\n<li>Mar\u00eda  auxiliadora Prieto jimenez (vocal)<\/li>\n<li>bruno Gonzalez zorn (vocal)<\/li>\n<li>Juan a P\u00e9rez torres (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Luisa Raquel Molina Quintero La bacteria marina marinomonas mediterranea fue aislada de las costas murcianas del mar 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