{"id":111872,"date":"2018-03-11T10:38:33","date_gmt":"2018-03-11T10:38:33","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/biologa%c2%ada-celular-y-molecular-de-sh3tc2-el-gen-responsable-de-la-enfermedad-de-charcot-marie-tooth-4c\/"},"modified":"2018-03-11T10:38:33","modified_gmt":"2018-03-11T10:38:33","slug":"biologa%c2%ada-celular-y-molecular-de-sh3tc2-el-gen-responsable-de-la-enfermedad-de-charcot-marie-tooth-4c","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/biologia-celular\/biologa%c2%ada-celular-y-molecular-de-sh3tc2-el-gen-responsable-de-la-enfermedad-de-charcot-marie-tooth-4c\/","title":{"rendered":"Biolog\u00eda celular y molecular de sh3tc2, el gen responsable de la enfermedad de charcot-marie-tooth 4c"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Vincenzo Lupo <\/strong><\/h2>\n<p>La enfermedad de charcot-marie-tooth (cmt) es una neuropat\u00eda hereditaria sensitivo-motora que cursa principalmente con una atrofia y debilidad muscular progresiva distal con p\u00e9rdida de la sensibilidad en las extremidades. La enfermedad cmt se clasifica en neuropat\u00edas desmielinizantes (cmt1) y neuropat\u00edas axonales (cmt2). Para ambas entidades se han descrito diversos patrones de herencia. Las formas autos\u00f3micas recesivas desmielinizantes (cmt4) y axonales (ar-cmt2) son menos frecuentes aunque suelen presentar un fenotipo cl\u00ednico m\u00e1s grave y agresivo. En nuestro pa\u00eds se han descrito con relativa frecuencia las formas cmt4a y cmt4c, \u00e9sta \u00faltima en familias de origen gitano [claramunt r, sevilla t, lupo v et al. Clinical genetics 2007]. Mutaciones en el gen sh3tc2 son responsables de la enfermedad cmt4c. El trabajo realizado en este proyecto de tesis doctoral se puede resumir en dos partes: (1) estudio de la biolog\u00eda de sh3tc2 y de mutantes cl\u00ednicos, que han sido recientemente publicados [lupo v et al. Hum mol gen 2009];   (2) estudio del posible papel de sh3tc2 sobre la ruta de se\u00f1alizaci\u00f3n de nrg1\/erbb.  1. Estudio de la biolog\u00eda de sh3tc2 y de mutantes cl\u00ednicos. mediante ensayos de inmunofluorescencia en diferentes l\u00edneas celulares, hemos demostrado que sh3tc2 colocaliza con la membrana plasm\u00e1tica y con varios componentes de la ruta endoc\u00edtica: endosomas tempranos, endosomas tard\u00edos y parcialmente con ves\u00edculas recubiertas de clatrina. Adem\u00e1s, se ha demostrado que sh3tc2 sufre una miristoilaci\u00f3n co-trasducional en la glicina 2 para poderse anclar a las membranas celulares. La localizaci\u00f3n de sh3tc2 en la membrana plasm\u00e1tica ha sido confirmada tambi\u00e9n mediante fraccionamiento subcelular en gradiente de sacarosa. Adem\u00e1s, ensayos bioqu\u00edmicos, nos sugieren que la prote\u00edna est\u00e1 fuertemente asociada a las membranas celulares y que tambi\u00e9n se encuentra parcialmente asociada a microdominios ricos en colesterol (balsas lip\u00eddicas &#8211; en ingl\u00e9s, lipid rafts). Posteriormente, estudiamos el efecto sobre la localizaci\u00f3n de sh3tc2 de mutantes que carec\u00edan de los dominios sh3 y\/o tpr. Nuestros resultados sugieren que ambos dominios combinados de manera independiente con la miristoilaci\u00f3n, son suficientes para permitir que sh3tc2 se una a las membranas celulares. Probablemente, ambos dominios est\u00e1n mediando la interacci\u00f3n de sh3tc2 con otras prote\u00ednas. Nuestro objetivo m\u00e1s inmediato fue examinar lo que ocurr\u00eda con aquellas mutaciones cl\u00ednicas de sh3tc2 responsables de la enfermedad, y nos preguntamos si estos resultados nos podr\u00edan ayudar a deslucidar sobre la patogenicidad de estas mutaciones. Para ello, testamos los efectos de aquellas mutaciones cl\u00ednicas de sh3tc2 que hab\u00edan sido encontradas en nuestra serie de pacientes y en nuestro laboratorio, p.R529q, p.A758d, p.C737_p738delinsx, p.R954x y p.R1109x. Tambi\u00e9n se analizaron otras dos mutaciones ya descritas por su proximidad, junto a p.R529q y a758d, al primer dominio tpr. Las tres mutaciones que conducen a una prote\u00edna truncada y la con cambio de amino\u00e1cido p.A758d presentaban el mismo patr\u00f3n de expresi\u00f3n que la prote\u00edna completa de sh3tc2. En cambio, las otras tres mutaciones con cambio de amino\u00e1cido (p.R529q, e657k y r658c), presentaban variaciones en la localizaci\u00f3n respecto a la prote\u00edna completa. La similitud en la localizaci\u00f3n de estas tres prote\u00ednas mutantes sugiere la regi\u00f3n que comprende estas tres mutaciones, que incluye el primer dominio tpr, es importante para la localizaci\u00f3n de sh3tc2. Parece ser que el primer dominio tpr, junto con el dominio de miristoilaci\u00f3n, sea suficiente para que la prote\u00edna se dirija a su correcta localizaci\u00f3n.   2. Estudio del posible papel de sh3tc2 sobre la ruta de se\u00f1alizaci\u00f3n de nrg1\/erbb. en un estudio reciente se ha generado y caracterizado el modelo murino deficiente de la prote\u00edna sh3tc2 (ko de sh3tc2). Este rat\u00f3n representa un buen modelo para estudiar la fisiopatolog\u00eda de la enfermedad de cmt4c. En este trabajo los ratones ko presentaban un proceso de hipomielinizaci\u00f3n en edad post-natal de 28 dias (p28).  en un proyecto colaborativo con el laboratorio del dr. Roman chrast de la universidad de lausanne, con el fin de investigar cu\u00e1l es el estadio primario de establecimiento de la patolog\u00eda en los ratones ko, ahondamos en el estudio de microscop\u00eda electr\u00f3nica examinando ratones con una edad muy temprana (p5 y p10). Nuestros resultados demuestran que las capas de mielina que envuelven los axones, est\u00e1n reducidas en n\u00famero en el rat\u00f3n ko, de modo que el proceso de hipomielinizaci\u00f3n debe de empezar en fase temprana de desarrollo de la mielina. Un estudio comparativo del fenotipo encontrado con otros modelos murino de enfermedades neurodegenerativas, mostr\u00f3 que los ratones ko de erbb2 presentaban un fenotipo de hipomielinizaci\u00f3n muy similar al ko de sh3tc2. Erb2 junto a erbb3, son receptores fundamentales para los procesos de mielinizaci\u00f3n, y su actividad est\u00e1 mediada por la nrg1. La fosforilaci\u00f3n cruzada de erbb2 y erbb3 conduce a su internalizaci\u00f3n mediada por prote\u00ednas adaptadoras, y la posterior  activaci\u00f3n de la ruta de se\u00f1alizaci\u00f3n i3p\/akt. Nuestro objetivo se centr\u00f3 en estudiar si la deficiencia de sh3tc2 pudiese afectar la activaci\u00f3n normal de la ruta nrg1\/erbb. Por ello llevamos a cabo an\u00e1lisis de extractos proteicos del endonerium de nervio ci\u00e1tico mediante western blot. Los resultados demuestraron que los receptores erbb2 y erbb3 est\u00e1n hiperfosforilados en los ratones ko de edad temprana (p2 y p5), y que la expresi\u00f3n  de krox20, un factor de transcripci\u00f3n activado tambi\u00e9n por la ruta nrg1\/erbb, est\u00e1 fuertemente disminuida a p10. Para determinar como la deficiencia de sh3tc2 provoca un aumento de la fosforilaci\u00f3n de los receptores erbb2 y erbb3, se estudi\u00f3 el efecto de la sobreexpresi\u00f3n de sh3tc2 sobre la internalizaci\u00f3n del receptor erb2 en c\u00e9lulas de hela. Los resultados indican que la internalizaci\u00f3n tanto de erbb2 aumenta cuando se sobreexpresa sh3tc2. Conjuntamente, estos resultados sugieren que sh3tc2 podr\u00eda regular la internalizaci\u00f3n de los receptores erbb2 y erbb3, cuya activaci\u00f3n es fundamental para los procesos de mielinizaci\u00f3n de los nervios perif\u00e9ricos. Otros ensayos de inmunofluorescencia confirman nuevamente la asociaci\u00f3n entre sh3tc2 y los receptores erbb durante su internalizaci\u00f3n. en definitiva, en este trabajo hemos aportado no s\u00f3lo conocimientos sobre la biolog\u00eda de sh3tc2, sino tambi\u00e9n sobre los posibles mecanismos patol\u00f3gicos que subyacen en la enfermedad de cmt4c. Adem\u00e1s nos proporcionan nuevos conocimientos sobre los mecanismos relacionados con el desarrollo de la mielina durante la fase de desarrollo.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Biolog\u00eda celular y molecular de sh3tc2, el gen responsable de la enfermedad de charcot-marie-tooth 4c<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Biolog\u00eda celular y molecular de sh3tc2, el gen responsable de la enfermedad de charcot-marie-tooth 4c <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Vincenzo Lupo <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Universitat de val\u00e9ncia (estudi general)<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 25\/11\/2011<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Carmen Espin\u00f3s Armero<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Mar\u00eda  isabel Fari\u00f1as gomez <\/li>\n<li>Juan  Jes\u00fas Vilchez padilla (vocal)<\/li>\n<li>pascual Sanz bigorra (vocal)<\/li>\n<li>M\u00aajes\u00fas Sobrido g\u00f3mez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Vincenzo Lupo La enfermedad de charcot-marie-tooth (cmt) es una neuropat\u00eda hereditaria sensitivo-motora que cursa principalmente con una 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