{"id":114250,"date":"2013-05-06T00:00:00","date_gmt":"2013-05-06T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/gastro-resistant-microparticles-as-an-oral-cholera-vaccine-approach\/"},"modified":"2013-05-06T00:00:00","modified_gmt":"2013-05-06T00:00:00","slug":"gastro-resistant-microparticles-as-an-oral-cholera-vaccine-approach","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/evaluacion-de-farmacos\/gastro-resistant-microparticles-as-an-oral-cholera-vaccine-approach\/","title":{"rendered":"Gastro-resistant microparticles as an oral cholera vaccine approach"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Marta Pastor Navarro <\/strong><\/h2>\n<p>Resumen tesis doctoralgastro resistant microparticles as an oral cholera vaccine approachmicropart\u00edculas gastrorresistentes como estrategia para una vacuna oral frente al c\u00f3leraa pesar de que la enfermedad del c\u00f3lera y su agente causante, el vibrio cholerae, son conocidos desde el siglo xix, el c\u00f3lera sigue siendo una enfermedad con una alta incidencia hoy en d\u00eda, sobre todo en los lugares donde las criterios m\u00ednimos de higiene no se cumplen. En este contexto, la prevenci\u00f3n de la enfermedad es un punto clave. Dentro de las estrategias de prevenci\u00f3n y control de la enfermedad, se sit\u00faan la implementaci\u00f3n del saneamiento as\u00ed como la vacunaci\u00f3n. Desde 1999 la organizaci\u00f3n mundial de la salud (oms) recomienda el uso de la vacuna oral frente al c\u00f3lera en ciertas regiones end\u00e9micas o situaciones de emergencias. Tras el re-an\u00e1lisis del ensayo cl\u00ednico realizado en bangladesh con una vacuna oral del c\u00f3lera se observ\u00f3 que el hecho de que una parte de la poblaci\u00f3n estuviese vacunada proporcionaba una protecci\u00f3n comunitaria. Es por ello, que el desarrollo de una vacuna eficaz y segura frente al c\u00f3lera supondr\u00eda un paso m\u00e1s en el control de los brotes de la enfermedad. En la actualidad existen dos vacunas autorizadas para su comercializaci\u00f3n. No obstante, no cumplen todos los requisitos que la oms cree que deber\u00eda tener la vacuna oral ideal para c\u00f3lera que son las siguientes:- poder administrarse en una sola dosis y sin agua o tamp\u00f3n.- No necesitar cadena de fr\u00edo- ser apta para ni\u00f1os menores de 2 a\u00f1os- conferir protecci\u00f3n a largo plazoen el transcurso de las \u00faltimas d\u00e9cadas se ha profundizado en el desarrollo de micropart\u00edculas como veh\u00edculos que aportan longevidad y potencia a\u00f1adida a los epitopos, dando lugar a un nuevo arsenal para la elaboraci\u00f3n de vacunas novedosas. Teniendo esto en mente los objetivos de esta tesis son los que se describen a continuaci\u00f3n:1.\tOptimizar una t\u00e9cnica de secado por atomizaci\u00f3n o \u00c2\u00bfspray drying\u00c2\u00bf con el fin de obtener micropart\u00edculas gastrorresistentes cargadas con vibrio cholerae c7258 inactivado t\u00e9rmicamente. M\u00e1s concretamente, se busca estudiar la influencia de la temperatura de entrada a la c\u00e1mara en las micropart\u00edculas obtenidas usando diferentes pol\u00edmeros metacr\u00edlicos como son el eudragit\u00c2\u00ae fs30d y eudragit\u00c2\u00ae l30 d-55. Asimismo, se persigue establecer la capacidad de las micropart\u00edculas de eudragit\u00c2\u00ae para inducir respuesta inmune en ratas tras su administraci\u00f3n oral.2.\tEstudiar y caracterizar las micropart\u00edculas de eudragit\u00c2\u00ae l30 d-55 con o sin agentes mucoadhesivos, tales como el alginato o el carbomero 934, carbopol\u00c2\u00ae. Llevar a cabo un estudio de estabilidad en condiciones de largo plazo, intermedias y aceleradas para analizar el comportamiento t\u00e9rmico de las part\u00edculas. La evaluaci\u00f3n de la respuesta en ratas tras la administraci\u00f3n de diferentes reg\u00edmenes de administraci\u00f3n de las micropart\u00edculas de eudragit\u00c2\u00ae l30 d-55 con y sin mucoadhesivos.3.\tExaminar la toxicidad tras dosis repetidas de las micropart\u00edculas de eudragit\u00c2\u00ae l30 d-55 con y sin alginato. La toxicidad se estudiar\u00e1 en base a la evoluci\u00f3n del peso, la ingesta de agua y alimentos as\u00ed como a los par\u00e1metros hematol\u00f3gicos y las histolog\u00edas y peso de los \u00f3rganos tras la necropsia. Se controlar\u00e1 la respuesta inmunol\u00f3gica desarrollada a trav\u00e9s de la detecci\u00f3n de t\u00edtulos vibriocidas.4.\tAplicar la t\u00e9cnica de \u00c2\u00bfspray drying\u00c2\u00bf para elaborar y caracterizar micropart\u00edculas de acetatoftalato de celulosa, aquacoat\u00c2\u00ae cpd. Asimismo, analizar la respuesta inmune in vivo mediante el an\u00e1lisis de la producci\u00f3n y distribuci\u00f3n de las diferentes inmunoglobulinas adem\u00e1s de la detecci\u00f3n de los niveles de interfer\u00f3n gamma.En la primera parte de este trabajo se emplearon los pol\u00edmeros eudragit\u00c2\u00ae fs30d y eudragit\u00c2\u00ae l30 d-55 con el fin de obtener micropart\u00edculas mediante \u00c2\u00bfspray drying\u00c2\u00bf a diferentes temperaturas de entrada, 60\u00c2\u00bac, 80\u00c2\u00bac y 100\u00c2\u00bac. Estas part\u00edculas se caracterizaron en t\u00e9rminos de la morfolog\u00eda de la superficie por microscopia, de tama\u00f1o de part\u00edcula, eficiencia de encapsulaci\u00f3n, antigenicidad y perfil de liberaci\u00f3n. Se pudo observar que las part\u00edculas preparadas a 60 y 80\u00c2\u00bac presentaron los mejores resultados en t\u00e9rminos de antigenicidad y eficacia de encapsulaci\u00f3n. Las micropart\u00edculas a partir de eudragit\u00c2\u00ae fs30d mostraron resultados siempre inferiores a las de eudragit\u00c2\u00ae l30 d-55, sobre todo en lo que a antigenicidad y perfil de liberaci\u00f3n se refiere. En los consiguientes experimentos con animales, se pudo observar, a pesar de que las diferencias no resultaron estad\u00edsticamente significativas, que las micropart\u00edculas a base de eudragit\u00c2\u00ae l30 d-55 fueron capaces de estimular una respuesta inmune m\u00e1s intensa. En el siguiente estudio in vivo realizado se compararon diferentes dosis de las micropart\u00edculas de eudragit\u00c2\u00ae l30 d-55 frente a las mismas dosis de la bacteria libre. De esta manera se pudo ver que las dosis 70 y 35 mg de micropart\u00edculas obtuvieron la respuesta inmune m\u00e1s intensa incluso que la misma dosis de vibrio cholerae en suspensi\u00f3n.En el segundo trabajo experimental se examinaron micropart\u00edculas elaboradas con eudragit\u00c2\u00ae l30 d-55 a las que se les a\u00f1adieron alginato o carbomero, carbopol\u00c2\u00ae como agente mucoadhesivo. Adem\u00e1s tambi\u00e9n se prepararon micropart\u00edculas sin ninguno de estos agentes. Todas estas formulaciones presentaron un tama\u00f1o entre 7 y 9 \u00c2\u00b5m, una alta eficacia de encapsulaci\u00f3n y un perfil de liberaci\u00f3n dependiente del ph. En el caso de las micropart\u00edculas que conten\u00edan carbopol\u00c2\u00ae la antigenicidad se vio comprometida, cayendo de los valores usuales hasta un 25%. A continuaci\u00f3n se procedi\u00f3 a estudiar la estabilidad de las micropart\u00edculas sin y con alginato. Para ello las muestras se dispusieron en c\u00e1maras clim\u00e1ticas a 25\u00c2\u00bac y 60% de humedad relativa (hr) durante12meses, 30\u00c2\u00bac y 65% hr y 40\u00c2\u00bac y 75% hr durante 6 meses siguiendo la gu\u00eda ich q1 a (r2). Tras esta etapa de almacenamiento las part\u00edculas continuaron presentando propiedades gastrorresistentes y su antigenicidad se mantuvo dentro del criterio propuesto por la fda (67% de las muestras deb\u00eda mantenerse dentro del 15% de cambio y el 33% podr\u00eda estar fuera del 15%). Asimismo la morfolog\u00eda no sufri\u00f3 cambios que pudieran sugerir una degradaci\u00f3n observable como podr\u00eda ser la erosi\u00f3n o el hinchamiento. El tama\u00f1o de part\u00edculas present\u00f3 cambios estad\u00edsticamente significativos, no obstante se mantuvieron dentro del 10% respecto al inicio del estudio. S\u00f3lo un valor de micropart\u00edculas con alginato se desv\u00edo del 10%, pero no supero el 25%. En la tercera fase de este trabajo se realizaron las pruebas en ratas. En un primer experimento las tres formulaciones desarrolladas fueros administradas siguiendo una posolog\u00eda de dos administraciones los d\u00edas 0 y 14. Se pudo observar el d\u00eda 21, que las micropart\u00edculas con carbopol\u00c2\u00ae produjeron una respuesta inmune inferior a la del vibrio cholerae en suspensi\u00f3n. Esto junto los resultados in vitro obtenidos nos llevo a descartar las part\u00edculas con carbopol\u00c2\u00ae para los siguientes estudios. En el siguiente experimento se analiz\u00f3 la influencia del n\u00famero de dosis. Para ello se administraron una o dos dosis de micropart\u00edculas con y sin alginato as\u00ed como vibrio cholerae. Se pudo observar que la administraci\u00f3n de dos dosis de micropart\u00edculas con alginato produc\u00eda una respuesta estad\u00edsticamente superior a la del vibrio cholerae y las micropart\u00edculas sin mucoadhesivos. Finalmente, se administraron diferentes dosis-60, 30, 15, 7.5 mg- de micropart\u00edculas con alginato y se constato que las dosis de 60 y 30 mg daban lugar a un mayor nivel de t\u00edtulos vibriocidas. Tras estos esperanzadores resultados se procedi\u00f3 al estudio de la toxicidad de las micropart\u00edculas. Para ello, se administraron 3 dosis de micropart\u00edculas con y sin alginato y se estudi\u00f3 la evoluci\u00f3n del peso, apetito y sed de las ratas. Adem\u00e1s los par\u00e1metros hematol\u00f3gicos, las histolog\u00edas tras las necropsias y los t\u00edtulos vibriocidas fueron examinados. De este estudio se pudo inferir que las micropart\u00edculas con y sin alginato eran efectivas y seguras, ya que ninguno de los par\u00e1metros estudiados present\u00f3 tendencias negativas por el tratamiento. En el estudio experimental que cierra esta tesis se investig\u00f3 la aplicaci\u00f3n de otro pol\u00edmero, el acetatoftalato de de celulosa, para el desarrollo de micropart\u00edculas como candidato vacunal frente al c\u00f3lera. As\u00ed, se siguieron las pautas anteriormente marcadas y se emple\u00f3 la t\u00e9cnica de secado por atomizaci\u00f3n para su elaboraci\u00f3n. Esta vez, se estudiaron dos temperaturas diferentes de entrada a la c\u00e1mara, 60 y 80\u00c2\u00bac. Estas part\u00edculas se caracterizaron una vez m\u00e1s mediante microscop\u00eda, tama\u00f1o, eficiencia de encapsulaci\u00f3n, antigenicidad y perfil de liberaci\u00f3n. Las part\u00edculas obtenidas presentaron un tama\u00f1o de 6 \u00c2\u00b5m con una alta eficiencia de encapsulaci\u00f3n entre 90 y 95%. Adem\u00e1s la antigenicidad present\u00f3 unos valores entre 86 y 97%, con lo que la integridad del ant\u00edgeno tras su encapsulaci\u00f3n estaba confirmada. En el estudio de gastrorresistencia se pudo observar que las micropart\u00edculas cumpl\u00edan con el criterio establecido por la farmacopea al liberarse menos del 10% durante la incubaci\u00f3n en la etapa \u00e1cida y liberando su contenido en la etapa de ph neutro. Con el objetivo de ver el efecto in vivo de las formulaciones desarrolladas se prosigui\u00f3 con la experimentaci\u00f3n en ratas. Para esta etapa se seleccionaron las micropart\u00edculas elaboradas a 80\u00c2\u00bac con y sin alginato. Se estableci\u00f3 un protocolo de dos administraciones de 60 o 30 mg de micropart\u00edculas con y sin alginato los d\u00edas 0 y 14. Con las muestras plasm\u00e1ticas se analizaron las poblaciones de igg, igg2b, igg2c, igm e interfer\u00f3n-\u00c2\u00bf. Para la igg total se vio que la dosis de 60 mg produjo una respuesta inmune m\u00e1s d\u00e9bil que la dosis de 30 mg con alginato y el vibrio cholerae en ciertas semanas. En el caso de las igg2b no se detect\u00f3 diferencia alguna entre los grupos. Para las igg2c, en cambio, las dosis de 60 mg presentaron unos niveles inferiores a los del vibrio cholerae. Cuando se procedi\u00f3 a la cuantificaci\u00f3n de los niveles de igm, se observ\u00f3 que por un lado las formulaciones sin alginato, tanto a 30 como a 60 mg, presentaron niveles m\u00e1s bajo de inmunoglobulinas que el vibrio cholerae y las part\u00edculas con alginato en dosis de 30 mg. Sin embrago, hacia el final del estudio fueron las micropart\u00edculas de 60 mg con alginato las que demostraron ser menos inmunog\u00e9nicas que la dosis inferior de vibrio cholerae. Al analizar la producci\u00f3n de interfer\u00f3n gamma no se detecto ninguna diferencia entre grupos. Tras analizar los resultados del in vivo se pudo apreciar que las micropart\u00edculas de aquacoat\u00c2\u00ae cpd cuando se combinan con alginato son capaces de producir una respuesta inmune en t\u00e9rminos de igg total, igg2b, igg2c, igm e inf-\u00c2\u00bf similares a las producidas por el vibrio cholerae. Las micropart\u00edculas elaboradas tienen la ventaja de estar en forma de polvo, lo que facilita su transporte y adem\u00e1s brinda la posibilidad de desarrollar otras formas farmac\u00e9utica tales como comprimidos o granulados. Teniendo en cuenta los resultados resumidos previamente, esta tesis llevo a las siguientes conclusiones:-la t\u00e9cnica de \u00c2\u00bfspray dyring\u00c2\u00bf result\u00f3 adecuada para el desarrollo de micropart\u00edculas a partir de los pol\u00edmero seleccionados. Se obtuvieron micropart\u00edculas de 3 a 9 \u00c2\u00b5m con una alta eficacia de encapsulaci\u00f3n. Las part\u00edculas presentaron propiedades gastro resistentes en todos los casos llegando a liberar el 30% tras 24 horas. Las formulaciones mantuvieron la antigenicidad de la bacteria (>75%), salvo cuando se le a\u00f1ad\u00eda carbopol\u00c2\u00ae.-Tras la administraci\u00f3n oral de las micropart\u00edculas se pudo detectar que cuando el pol\u00edmero utilizado era el eudragit\u00c2\u00ae l30 d-55, los animales presentaron valores m\u00e1s elevados de t\u00edtulos vibriocidas que con eudragit\u00c2\u00ae fs30d. -Las micropart\u00edculas a base de eudragit\u00c2\u00ae l30 d-55 con alginato presentaron mayor inmunogenicidad que las part\u00edculas sin alginato o con carbopol\u00c2\u00ae.-El estudio de estabilidad 25\u00c2\u00bac y 60% de humedad relativa (hr) durante12meses, 30\u00c2\u00bac y 65% hr y 40\u00c2\u00bac y 75% hr durante 6 meses (ich q1 a (r2) se pudo ver que la antigenicidad se mantuvo dentro de los valores de aceptaci\u00f3n. Asimismo, las micropart\u00edculas con alginato presentaron un perfil de liberaci\u00f3n m\u00e1s adecuado.-Tras el estudio de toxicidad de dosis repetidas se constato que las micropart\u00edculas de eudragit\u00c2\u00ae l30 d-55 con o sin alginato son seguras.-Bas\u00e1ndonos en los resultados de los experimentos in vivo, de estabilidad y toxicidad, el vibrio cholerae microencapsulado en eudragit\u00c2\u00ae l30 d-55, y especialmente cuando se a\u00f1ade alginato, da lugar a una vacuna segura, efectiva y que no precisa cadena de fr\u00edo.-Los resultados del estudio in vitro de las micropart\u00edculas de aquacoat\u00c2\u00ae cpd con y sin alginato mostraron que las part\u00edculas obtenidas presentaban un tama\u00f1o entorno a 6 \u00c2\u00b5m, con una eficacia de encapsulaci\u00f3n de 89-95% y una alta antigenicidad. El perfil de liberaci\u00f3n present\u00f3 propiedades gastrorresistentes liberando el 30% de la bacteria a las 24 horas. -Los resultados del estudio in vivo de las micropart\u00edculas de aquacoat\u00c2\u00ae cpd revelaron que las micropart\u00edculas con y sin alginato y en dosis de 30 mg son capaces de inducir una respuesta inmune similar al vibrio cholerae.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Gastro-resistant microparticles as an oral cholera vaccine approach<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Gastro-resistant microparticles as an oral cholera vaccine approach <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Marta Pastor Navarro <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Pa\u00eds vasco\/euskal herriko unibertsitatea<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 05\/06\/2013<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Amaya Esquisabel Alegria<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: carla Caramella &#8212; <\/li>\n<li>manuela Igartua olaechea (vocal)<\/li>\n<li>Antonio Rabasco alvarez (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda  dolores Torres l\u00f3pez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Marta Pastor Navarro Resumen tesis doctoralgastro resistant microparticles as an oral cholera vaccine approachmicropart\u00edculas gastrorresistentes como estrategia [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[2445,12909,3304],"tags":[104482,11840,168560,98812,67569,226546],"class_list":["post-114250","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-evaluacion-de-farmacos","category-pais-vasco-euskal-herriko-unibertsitatea","category-preparacion-de-farmacos","tag-amaya-esquisabel-alegria","tag-antonio-rabasco-alvarez","tag-carla-caramella","tag-manuela-igartua-olaechea","tag-maria-dolores-torres-lopez","tag-marta-pastor-navarro"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/114250","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=114250"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/114250\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=114250"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=114250"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=114250"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}