{"id":115686,"date":"2018-03-11T10:44:21","date_gmt":"2018-03-11T10:44:21","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/modelo-de-levadura-humanizada-mediange-expresion-de-la-protea%c2%adna-oncogenica-pi3k-aplicacion-a-la-busuqueda-de-inhibidores-y-al-estudio-de-la-senalizacion-lipa%c2%addica\/"},"modified":"2018-03-11T10:44:21","modified_gmt":"2018-03-11T10:44:21","slug":"modelo-de-levadura-humanizada-mediange-expresion-de-la-protea%c2%adna-oncogenica-pi3k-aplicacion-a-la-busuqueda-de-inhibidores-y-al-estudio-de-la-senalizacion-lipa%c2%addica","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/microbiologia\/modelo-de-levadura-humanizada-mediange-expresion-de-la-protea%c2%adna-oncogenica-pi3k-aplicacion-a-la-busuqueda-de-inhibidores-y-al-estudio-de-la-senalizacion-lipa%c2%addica\/","title":{"rendered":"Modelo de levadura  humanizada mediange expresi\u00f3n de la prote\u00edna oncog\u00e9nica pi3k: aplicaci\u00f3n a la b\u00fasuqueda de  inhibidores y al estudio de la se\u00f1alizaci\u00f3n lip\u00eddica."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Teresa Fernandez-acero Bascones <\/strong><\/h2>\n<p>Las fosfatidilinositol-3 quinasas de clase i (pi3k) son prote\u00ednas de mam\u00edfero que fosforilan el ptdins-4,5p2 en posici\u00f3n 3\u00c2\u00bf dando lugar ptdins-3,4,5p3 en la membrana plasm\u00e1tica. Este segundo mensajero es reconocido por la prote\u00edn quinasa akt, que de esta forma se localiza en la membrana donde es activada para regular a su vez un gran n\u00famero de efectores intracelulares, que finalmente favorecen la proliferaci\u00f3n celular e inhiben la apoptosis. El principal regulador negativo de esta ruta es la fosfatasa pten, que convierte ptdins-3,4,5p3 en ptdins-4,5p2. La hiperactivaci\u00f3n de esta v\u00eda es una causa frecuente de la aparici\u00f3n y el desarrollo de tumores en mam\u00edferos. Nuestro equipo de investigaci\u00f3n ha desarrollado un sistema de levadura humanizada mediante expresi\u00f3n de los principales elementos de esta ruta, ausentes de forma natural en este organismo modelo. La expresi\u00f3n de una versi\u00f3n de la subunidad catal\u00edtica de pi3k que est\u00e1 dirigida artificialmente a la membrana plasm\u00e1tica, p110alfa-caax, origina la inhibici\u00f3n del crecimiento de la levadura. Este efecto puede ser empleado para la investigaci\u00f3n aplicada, tanto para la realizaci\u00f3n de estudios funcionales de las prote\u00ednas oncog\u00e9nicas pi3k y akt como para la b\u00fasqueda de compuestos que inhiban su actividad. A lo largo de este trabajo hemos puesto a punto un bioensayo de inhibici\u00f3n de pi3k en levadura utilizando diferentes inhibidores espec\u00edficos de esta prote\u00edna mediante estrategias que favorecen el aumento de las concentraciones intracelulares de los compuestos ensayados. Estas condiciones nos han permitido emplear este bioensayo a escala piloto con una colecci\u00f3n de extractos de origen microbiano, en colaboraci\u00f3n con la plataforma hts de la fundaci\u00f3n medina, para la b\u00fasqueda de extractos con actividad inhibidora sobre pi3k. De 9600 extractos rastreados, 55 mostraron actividad frente a esta prote\u00edna de forma reproducible, espec\u00edfica y dosis-dependiente.Adem\u00e1s, el sistema de levadura humanizada tambi\u00e9n puede emplearse en investigaci\u00f3n b\u00e1sica, como herramienta para el estudio de las funciones de su sustrato, el ptdins-4,5p2, en este organismo. La falta de ptdins-4,5p2 origina la p\u00e9rdida de polaridad del citoesqueleto de actina y provoca diversas alteraciones en el tr\u00e1fico intracelular de ves\u00edculas. Por otro lado hemos demostrado que la eliminaci\u00f3n de ptdins-4,5p2 inducida por expresi\u00f3n de pi3k causa en la levadura la activaci\u00f3n de una cascada se se\u00f1alizaci\u00f3n intracelular, denominada ruta de integridad celular, mediada por la mapk slt2, dando lugar a una respuesta transcripcional caracter\u00edstica de la estimulaci\u00f3n de esta ruta en condiciones de da\u00f1o sobre la pared celular. Hemos puesto de manifiesto que algunos de los componentes que gobiernan las primeras etapas en esta ruta, wsc1, pkc1, rho1, y que participan en la se\u00f1alizaci\u00f3n en condiciones de eliminaci\u00f3n de ptdins-4,5p2 se encuentran localizados de forma an\u00f3mala en endosomas de reciclaje, en lugar de la membrana plasm\u00e1tica, su ubicaci\u00f3n habitual. Posiblemente desde estos compartimentos transmiten la se\u00f1al de activaci\u00f3n a la cascada de mapks. Por \u00faltimo, hemos llevado a cabo un rastreo sobre la colecci\u00f3n gen\u00f3mica de mutantes delecionados en genes no esenciales de levadura para la b\u00fasqueda de procesos regulados por ptdins-4,5p2, empleando una versi\u00f3n miristoilada de p110alfa que inhibe el crecimiento de la levadura parcialmente. Hemos hallado diversos mutantes en los que el efecto de inhibici\u00f3n de crecimiento se agrava, relacionados con la traducci\u00f3n proteica y con el aparato de golgi; y otros en los que este efecto se alivia, relacionados con el procesamiento del rna y con la se\u00f1alizaci\u00f3n celular. Algunos de los resultados obtenidos permiten explicar aspectos que hemos observado en la situaci\u00f3n experimental que causa la expresi\u00f3n de p110 en levadura y otros aportan nuevos indicios acerca de la participaci\u00f3n del ptdins-4,5p2 en funciones celulares no descritas hasta el momento en este organismo.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Modelo de levadura  humanizada mediange expresi\u00f3n de la prote\u00edna oncog\u00e9nica pi3k: aplicaci\u00f3n a la b\u00fasuqueda de  inhibidores y al estudio de la se\u00f1alizaci\u00f3n lip\u00eddica.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Modelo de levadura  humanizada mediange expresi\u00f3n de la prote\u00edna oncog\u00e9nica pi3k: aplicaci\u00f3n a la b\u00fasuqueda de  inhibidores y al estudio de la se\u00f1alizaci\u00f3n lip\u00eddica. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Teresa Fernandez-acero Bascones <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Complutense de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 25\/05\/2014<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Victor Jim\u00e9nez  Cid<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: javier Arroyo nombela <\/li>\n<li>Miguel \u00e1ngel Pe\u00f1alva soto (vocal)<\/li>\n<li> Rodr\u00edguez pach\u00f3n Jos\u00e9 m. (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda francisca Vicente p\u00e9rez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Teresa Fernandez-acero Bascones Las fosfatidilinositol-3 quinasas de clase i (pi3k) son prote\u00ednas de mam\u00edfero que fosforilan el [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[986,278],"tags":[29916,197896,99967,40097,228739,140569],"class_list":["post-115686","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-complutense-de-madrid","category-microbiologia","tag-javier-arroyo-nombela","tag-maria-francisca-vicente-perez","tag-miguel-angel-penalva-soto","tag-rodriguez-pachon-jose-m","tag-teresa-fernandez-acero-bascones","tag-victor-jimenez-cid"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/115686","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=115686"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/115686\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=115686"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=115686"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=115686"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}