{"id":115916,"date":"2018-03-11T10:44:41","date_gmt":"2018-03-11T10:44:41","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/utilizacion-de-elementos-regulares-en-cis-y-trans-para-la-mejora-de-vectores-baculovirus\/"},"modified":"2018-03-11T10:44:41","modified_gmt":"2018-03-11T10:44:41","slug":"utilizacion-de-elementos-regulares-en-cis-y-trans-para-la-mejora-de-vectores-baculovirus","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/ciencias-veterinarias\/utilizacion-de-elementos-regulares-en-cis-y-trans-para-la-mejora-de-vectores-baculovirus\/","title":{"rendered":"Utilizaci\u00f3n de elementos regulares en cis y trans para la mejora de vectores baculovirus"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Javier Lopez Vidal <\/strong><\/h2>\n<p>Con la producci\u00f3n de la primera mol\u00e9cula proteica recombinante, la industria farmac\u00e9utica ha empleado los productos biol\u00f3gicos de manera prioritaria frente a los sintetizados qu\u00edmicamente. Actualmente, ersas tecnolog\u00edas recombinantes compiten por satisfacer la demanda de la industria, por lo que la ucci\u00f3n de los costes y la cantidad y funcionalidad de los productos generados son determinantes. La g\u00eda de expresi\u00f3n de vectores baculovirus bevs es un sistema de expresi\u00f3n de prote\u00edna recombinante eucariota vers\u00e1til y robusto, muestra de ello son los productos generados y puestos ya en el mercado, principalmente vacunas. Sin embargo, la calidad y la cantidad de la prote\u00edna recombinante obtenida son, todav\u00eda, dos de los principales desaf\u00edos pendientes que restan competitividad a este sistema de presi\u00f3n.  Objetivo de esta tesis fue dar un impulso a esta tecnolog\u00eda tratando de solventar algunas de sus principales desventajas. Para ello, se han caracterizado nuevos elementos gen\u00e9ticos reguladores omotores, transactivadores y secuencias enhancer que una vez combinados han permitido desarrollar un nuevo casete de expresi\u00f3n optimizado. Para llevar a cabo estos estudios se han empleado t\u00e9cnicas bioqu\u00edmicas y de biolog\u00eda molecular y se han dise\u00f1ado y analizado m\u00e1s de 40 nuevos baculovirus en cultivo celular sf21, sf9 y tn-5 y en larvas del insecto trichoplusia ni t. Ni. Entre los hallazgos, destaca la caracterizaci\u00f3n de nuevos promotores de expresi\u00f3n g\u00e9nica derivados de t. Ni para su uso en l vector baculovirus acmnpv, destacando el denominado pb2, por su actividad m\u00e1s temprana y homog\u00e9nea que la del promotor de baculovirus polh. Adem\u00e1s, la cooperaci\u00f3n sin\u00e9rgica entre esta secuencia y el promotor p10 del baculovirus pb2p10 result\u00f3 de inter\u00e9s biotecnol\u00f3gico. El an\u00e1lisis de la secuencia pb2 permiti\u00f3 la determinaci\u00f3n de sus regiones esenciales fragmento pb29 en acmnpv. Adem\u00e1s, se ha caracterizado funcionalmente la co expresi\u00f3n de una segunda copia de los actores reguladores ie1 e ie0 de acmnpv mediante la inserci\u00f3n en el genoma del virus del cdna ac ie 01, codificante para ambos factores. Como resultado se observ\u00f3 un mayor incremento del crecimiento de la poblaci\u00f3n celular respecto a la infectada con el baculovirus convencional y un aumento de la pervivencia celular tras la infecci\u00f3n, reflejado en una mayor viabilidad celular a tiempos tard\u00edos posinfecci\u00f3n. Por \u00faltimo, la generaci\u00f3n de un casete de expresi\u00f3n compuesto por el cdna acie 01 y la secuencia intensificadora hr1 de acmnpv, operativamente unida alpromotor p10 o a h\u00edbridos de p10 con otros promotores, result\u00f3 en una mayor proliferaci\u00f3n celular a tiempos tempranos de la infecci\u00f3n, un mejor mantenimiento de la integridad celular a tiempos tard\u00edos y en un incremento de la producci\u00f3n de prote\u00edna recombinante de hasta cuatro veces respecto a un vector baculovirus convencional, junto con una reducci\u00f3n de la prote\u00f3lisis y de las formas proteicas aberrantes, caracter\u00edsticas de este sistema. Adem\u00e1s, la funcionalidad del nuevo casete se prob\u00f3 con \u00e9xito tanto con una prote\u00edna reportadora gfp como con una prote\u00edna vacunal de inter\u00e9s comercial prote\u00edna de la c\u00e1psida del circovirus tipo 2. En definitiva, el nuevo casete desarrollado confiri\u00f3 capacidades productivas no alcanzadas con anterioridad por esta tecnolog\u00eda. La proliferaci\u00f3n celular en las primeras horas de la infecci\u00f3n junto con el aumento de la viabilidad celular en su fase final, tienen como consecuencia un mejor procesamiento de las prote\u00ednas recombinantes obtenidas tanto en c\u00e9lulas de insecto como en larvas de t. Ni. Este casete de expresi\u00f3n se ha validado en un modelo de expresi\u00f3n de una prote\u00edna formadora de pseudopart\u00edculas v\u00edricas, obteniendo incrementos de productividad respecto a un baculovirus convencional del 400 por ciento en cultivo celular y del 200 por ciento en larvas del lepid\u00f3ptero t. Ni.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Utilizaci\u00f3n de elementos regulares en cis y trans para la mejora de vectores baculovirus<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Utilizaci\u00f3n de elementos regulares en cis y trans para la mejora de vectores baculovirus <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Javier Lopez Vidal <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Complutense de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 26\/06\/2014<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Silvia G\u00f3mez Sebasti\u00e1n<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Jes\u00fas Perez gil <\/li>\n<li>joaquim Segal\u00e9s i coma (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda no Esteban rodriguez (vocal)<\/li>\n<li>Francisco Parra fernandez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Javier Lopez Vidal Con la producci\u00f3n de la primera mol\u00e9cula proteica recombinante, la industria farmac\u00e9utica ha empleado 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