{"id":116029,"date":"2014-07-07T00:00:00","date_gmt":"2014-07-07T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/salmonella-enterica-ren-andui-monofasikoen-karakterizazio-molekularra-eta-epidemiologikoa-caracterizacion-molecular-y-epidemiologica-de-cepas-monofasicas-de-salmonella-enterica\/"},"modified":"2014-07-07T00:00:00","modified_gmt":"2014-07-07T00:00:00","slug":"salmonella-enterica-ren-andui-monofasikoen-karakterizazio-molekularra-eta-epidemiologikoa-caracterizacion-molecular-y-epidemiologica-de-cepas-monofasicas-de-salmonella-enterica","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/microbiologia\/salmonella-enterica-ren-andui-monofasikoen-karakterizazio-molekularra-eta-epidemiologikoa-caracterizacion-molecular-y-epidemiologica-de-cepas-monofasicas-de-salmonella-enterica\/","title":{"rendered":"Salmonella enterica-ren andui monofasikoen karakterizazio molekularra eta epidemiologikoa\/caracterizaci\u00f3n molecular y epidemiol\u00f3gica de cepas monof\u00e1sicas de salmonella enterica"},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de Lorena Laorden Mu\u00f1oz <\/strong><\/h2>\n

La salmonelosis, producida por bacterias del g\u00e9nero salmonella, es unade las intoxicaciones alimentarias m\u00e1s comunes en los pa\u00edses desarrolladossiendo la principal manifestaci\u00f3n la gastroenteritis aguda. Salmonella entericaes un pat\u00f3geno conocido desde el siglo xix y en la actualidad hay descritosm\u00e1s de 2.500 serotipos. Sin embargo no todos han tenido la misma relevancia ypor tanto, son los m\u00e1s frecuentemente aislados en muestras cl\u00ednicas los que hanrecibido un control y seguimiento epidemiol\u00f3gico m\u00e1s exhaustivo. Lavirulencia de salmonella es muy compleja y var\u00eda enormemente entre serotiposy cepas dentro de un mismo serotipo.Si bien es cierto que la aparici\u00f3n de nuevas variantes monof\u00e1sicas no esun evento exclusivo de los \u00faltimos a\u00f1os, las herramientas disponiblesactualmente en biolog\u00eda molecular han facilitado la identificaci\u00f3n de un mayorn\u00famero de variantes no caracterizadas previamente. El trabajo de esta tesisdoctoral se centr\u00f3 en la caracterizaci\u00f3n molecular de aislamientos de la variantemonof\u00e1sica 4,[5],12:i:- del serotipo typhimurium circulantes en nuestro pa\u00edsas\u00ed como de otros aislamientos monof\u00e1sicos con importancia cl\u00ednica en los\u00faltimos a\u00f1os: 4,5,12:b:- y 4,12:d:-, tratando de identificar su posible origenevolutivo. Del mismo modo y como segundo objetivo se plante\u00f3 el ofrecer lasherramientas epidemiol\u00f3gicas dise\u00f1adas y utilizadas en el transcurso de esteproyecto de investigaci\u00f3n para favorecer la detecci\u00f3n, control y seguimiento deestas nuevas variantes monof\u00e1sicas.El origen y posterior evoluci\u00f3n de las variantes caracterizadas en estetrabajo son el resultado de la evoluci\u00f3n biol\u00f3gica fundamentada en lasmutaciones espont\u00e1neas, la selecci\u00f3n y el aislamiento en las que puede verseimplicada la transposici\u00f3n de elementos gen\u00e9ticos m\u00f3viles. Los elementosgen\u00e9ticos transponibles o transposones, se descubrieron por primera vez en lad\u00e9cada de los 70 siendo la primera secuencia de inserci\u00f3n identificada la is1 ene. Coli. Las secuencias de inserci\u00f3n aparec\u00edan como constituyentes normales delcromosoma o de los pl\u00e1smidos de las bacterias gram-negativas. Habitualmentelas is muestran una preferencia en la inserci\u00f3n en determinadas regiones deladn, lo cual sugiere que los extremos terminales de las is pueden reconocerdeterminadas secuencias diana presentes en el cromosoma durante el proceso deinserci\u00f3n.En este trabajo se han caracterizado cuatro colecciones de aislados conlas f\u00f3rmulas antig\u00e9nicas 4,[5],12:i:-, 4,5,12:b:- y 4,12:d:-, mediantefagotipificaci\u00f3n, antibiotipificaci\u00f3n, pfge, mlva, pcr y secuenciaci\u00f3n. Conlos datos obtenidos se ha podido concluir que las cepas de las colecciones 1 y 2provienen de salmonella typhimurium, sin embargo entre ellas se diferenciandiferentes l\u00edneas evolutivas.La primera colecci\u00f3n est\u00e1 configurada por un clon procedente de unacepa de salmonella typhimurium u302 con pl\u00e1smido pu302l y con perfil demultirresistencia r- acsugstsxt, donde la tercera copia de is26 delpl\u00e1smido pu302l al reconocer una secuencia en el cromosoma originar\u00eda ladeleci\u00f3n del flagelo de segunda fase y este evento habr\u00eda ocurrido al menos entres ocasiones diferentes comenzando siempre la deleci\u00f3n en el mismo punto.La alta homogeneidad detectada las clasifica como pertenecientes a un mismoclon denominado por otros autores c\u00f3mo clon espa\u00f1ol. En la segunda colecci\u00f3nse diferencian las otras dos l\u00edneas, d\u00f3nde las tres primeras cepas de la colecci\u00f3nson muy similares a las cepas descritas en estados unidos y a su vezdiferenciables del resto de aislados de nuestro pa\u00eds, se\u00f1alando un origen oancestro com\u00fan con las cepas monof\u00e1sicas americanas. El resto de cepascaracterizadas en la segunda colecci\u00f3n con deleciones de menor tama\u00f1o,\u00fanicamente comparten entre ellas el perfil de tetrarresistencia y el punto final deinserci\u00f3n de la secuencia is26 se\u00f1alando las caracter\u00edsticas principales del cloneuropeo. Sin embargo las diferencias mostradas por el pfge, mlva y pcr dela deleci\u00f3n muestran que no comparten un origen com\u00fan pr\u00f3ximo en el tiempopero si est\u00e1n m\u00e1s estrechamente relacionadas entre ellas que con las otras dosl\u00edneas descritas. En esta colecci\u00f3n se han detectado tres aislados monof\u00e1sicoscuya f\u00f3rmula antig\u00e9nica se\u00f1ala la falta del flagelo de segunda fase, pero porpcr y secuenciaci\u00f3n se comprob\u00f3 que a\u00fan conservan el gen fljb seguido devarias secuencias is26, estas cepas podr\u00edan ser similares al ancestro del queevolucionar\u00edan las variantes de la colecci\u00f3n.Las cepas de salmonella enterica 4,5,12:b:- analizadas en la terceracolecci\u00f3n de este trabajo, son variantes monof\u00e1sicas provenientes de una terceral\u00ednea clonal de salmonella paratyphi b dt(+) sin resistencias a antimicrobianos,con la excepci\u00f3n de una cepa que no es capaz de metabolizar el tartrato (dt-),que provendr\u00eda de salmonella paratyphi b dt(-). A pesar de habercaracterizado la deleci\u00f3n en la mayor\u00eda de los aislados no se han obtenidosuficientes datos que permitan conocer el evento gen\u00e9tico implicado en lamisma. La mayor\u00eda presentan una deleci\u00f3n de 27 genes adyacentes al gen fljb,la cual pudo ser ocasionada por una transposasa, pero que posteriormenteperdi\u00f3 parte de su estructura dejando un fragmento inservible de 281 pb. Elpfge muestra una elevada diversidad entre las cepas de esta variante. Sinembargo dentro del pulsotipo a, las cepas presentaron una alta homolog\u00eda eincluso son las que presentaron la deleci\u00f3n descrita. Entre los otros cuatropulsotipos se engloban las cepas cuya deleci\u00f3n no se pudo caracterizar, por loque nos llev\u00f3 a concluir que estas 10 cepas podr\u00edan pertenecer a diferentesl\u00edneas evolutivas y por lo tanto presentar diferentes tipos de deleciones de losgenes implicados en la s\u00edntesis del flagelo de segunda fase.Las cepas de salmonella enterica 4,12:d:- que configuran la cuartacolecci\u00f3n son variantes monof\u00e1sicas provenientes de salmonellaschwarzengrund, altamente homog\u00e9neas por lo que podr\u00edan configurar unmismo clon y en cuyo caso la deleci\u00f3n de once genes entre los que seencuentran los genes implicados en la s\u00edntesis del flagelo de segunda fase, fueoriginada por una is30. Esta variante mostro una alta homogeneidad tanto enlos datos de pfge, como antibiograma y como en el tipo de deleci\u00f3ncaracterizada. El final de la inserci\u00f3n de la is30 coincide en el mismonucle\u00f3tido que el final de la inserci\u00f3n descrito en las cepas del clon europeo.Finalmente como conclusi\u00f3n a este trabajo podemos afirmar que la zonade s\u00edntesis del flagelo de segunda fase supone un punto caliente para lasinserciones de secuencias de inserci\u00f3n o transposones afectando a la capacidadde s\u00edntesis de la flagelina de segunda fase en cepas de salmonella enterica. Sinembargo, esta deficiencia, no ha supuesto una desventaja evolutiva para estetipo de variantes.Salmonelosia, salmonella generoko bakterioak eragindako janariintoxikazio ohikoenetariko bat da herrialde garatuetan eta gastroenteritiszorrotza da manifestazio nagusia. Salmonella enterica xix mendetik ezagunaden patogeno bat da, eta gaur egun 2.500 serotipoak baino gehiago deskribatutadaude. Hala ere, guztiak ez dute garrantzi bera izan, eta lagin klinikoetan maizisolatuak direnak izan dira kontrol eta segimendu epidemiologiko sakonagoajaso dituztenak. Salmonella-ren birulentzia oso konplexua da eta ikaragarrialdatzen da serotipoen eta serotipo beraren barruan dauden anduien artean.Bariante monofasiko berrien agerpena azken urteen esklusiboa ez izanarren, gaur egun biolog\u00eda molekularrean eskuragarri dauden erremintak erraztudute aurrez karakterizatu gabe zeuden barianteen gehiagoren identifikazioa.Doktore-tesi honen lana oinarritu zen gure herrialdean zirkulatzaileak direntyphimurium serotipoko 4,[5],12:i:- bariante monofasikoaren isolatuenkarakterizazio molekularrean, baita azken urteetan garrantzi klinikoko besteisolamendu monofasikoena: 4,5,12:b:- eta 4,12:d:- isolatuena, bere jatorriebolutibo posiblea identifikatzen saiatuz. Era berean eta bigarren helburu bezalaikerkuntza proiektu honetan zehar diseinatutako eta erabilitako erremintaepidemiologikoak eskaintzea bariante monofasiko berri hauen detekzioa,kontrola eta segimendua hobetzeko.Lan honetan karakterizatutako barianteen jatorria eta eboluzioa,mutazioen, hautespen-naturalaren eta isolamenduaren ondorioa dira, hain zuzenere elementu genetiko mugikorren transposizioaz eraginda izan daitezkela.Elementu genetiko transposagarriak edo transposonak 70. Hamarkadan aurkituziren eta is1 izan zen identifikatutako lehenengo insertzio sekeuntzia, e. Coli-n.Insertzio-sekuentziak baketrio gram-negatiboen kromosomaren edoplasmidoen osagai arruntak bezala agertzen ziren. Normalean is-ak dnarenzonalde konkretuekiko preferentzia. Normalean is-ek lehentasuna erakustendute dnako eskualde zehaztuetan txertatzeko, zeinek iradokitzen du is-enmutur terminalek zenbait itu-sekuentzia ezagutu ditzaketela kromosomanzeharreko txertatze-prozesuan.Lan honetan 4,[5],12:i:-, 4,5,12:b:- eta 4,12:d:- formula antigenikoekikolau isolatuten bildumak karakterizatu dira, fagotipifikazioaren,antibitipifikazioaren, pfge-a, mlva, pcr-a eta sekuentziazioaren bitartez.Lortutako datuekin 1 eta 2 bildumetako anduiak salmonella typhimurium-etikdatozela ondorioztatu ahal izan da, hala ere haien artean lerro ebolutibodesberdinak bereizten dira.Lehen bilduma osatzen duen klonak, salmonella typhimurium u302fagotipodun andui batetik dator, pu302l plasmidoarekin eta r-acsugstsxterresistentzia anitzetako profilarekin, bertan pu302l plasmidoko is26-renhirugarren kopiak kromosomaren sekuentzia ezagun bat detektatzean bigarrenfaseko flageloaren delezioa sortuko lukeen toki horretan txertatu ondoren etagertaera hau gutxienez hiru aldi desberdinetan gertatuko zen baina delezioarenhasiera beti puntu berean izango zen. Antzemandako homogeneotasun altuasailkatzen ditu andui hauek klon bereko kideak bezala, eta beste egile batzuekklon espainiarra bezala izendatu dute. Bigarren bilduman beste bi lerroakbereizten dira, non bildumako lehenengo hiru anduiak oso antzekoak direnestatu batuetan deskribatutako anduiekin eta berriz, jatorria edo anduimonofasiko amerikarrekiko arbaso komuna seinalatuz, eta gure herrikogainerako anduietatik diferentziatuz. Bigarren bilduman tamaina txikiagokodelezioekin karakterizatutako gainerako anduiek, haien artean bakarrik dutekomunean tetraerresistentzia-profila eta is26 sekuentziaren txertaketarenamaiera-puntua, klon europarraren ezaugarri nagusiak seinalatuz. Hala erepfge-ak, mlva-k eta delezioaren pcr-ak erakutsitako desberdintasunek,adierazten dute ez dutela denbora hurbilean jatorri komuna, baina haien arteanbadaude hertsikiago erlazionatuta deskribatutako beste bi lerroekin baino.Bilduma honetan hiru isolatu monofasiko detektatu dira eta formulaantigenikoan bigarren faseko flageloaren gabezia seinalatzen da, baina pcrreneta sekuentziazioaren bidez egiaztatu da fljb genea oraindik mantentzen dutelahainbat is26 sekuentziaz jarraituta, andui hauek bildumaren barianteekeboluzionatuko luketen arbasoaren antzekoak izan litezke.Salmonella enterica-ko 4,5,12:b:- anduiak lan honen hirugarrenbilduman analizatuta, salmonella paratyphi b dt(+)-ren hirugarren lerroklonaletik datozten bariante monofasikoak dira eta antibiotikoekiko aurkakoerresistentziarik gabe. Dena den, salbuespena, tartratoa metabolizatzekogaitasuna ez duen anduia (dt-) salmonella paratyphi b dt(-)-tik etorrikolitzateke. Delezioa isolatu gehienetan karakterizatu arren, ez dira datu nahikoriklortu delezioan inplikatutako gertaera genetikoa ezagutzeko. Isolatuengehiengoak fljb genearen alboko 27 generen delezioa aurkezten dute. Delezioatransposasa batek eragin ahal izan zuen, baina geroago bere egituraren zati batgaldu zuen 281 bp-eko zati erabilezina utziz. Pfge-ak bariante honetakoanduien arteko aniztasun handia erakusten du. Hala ere a pultsotipo barruan,anduiek homolog\u00eda altua aurkeztu dute eta gainera deskribatutako delezioaaurkeztu zutenak dira. Beste lau pultsotipoen artean biltzen dira karakterizatugabeko delezioa zuten anduiak. Ondorioztatu genuen beraz, 10 andui haueklerro ebolutibo desberdinetakoak izan litezkeela eta ondorioz, bigarren fasekoflageloaren sintesian inplikatutako generen delezioaren mota desberdinakaurkeztea.Salmonella enterica-ko 4,12:d:- anduiak laugarren bilduma osatzendutenak salmonella schwarzengrund-etik datozten bariante monofasikoak diraeta oso homogeneoak direnez, klon bera osatu lezakete. Delezionatu direnhamaika generen artean bigarren faseko flageloaren sintesian inplikatutakogeneak aurkitzen dira eta delezioa is30 batek sortu zuen. Bariante hauhomogeneotasun altua erakutsi du pfge zein antibiograma-datuetan, baitakarakterizatutako delezio motan ere. Beste aldetik, is30-aren txertatzearenamaiera muturra klon europarraren anduietan deskribatutako nukleotidoberarekin bat dator.Azkenik, lan honen konklusio bezala baiezta dezakegu bigarren fasekoflageloaren sintesiaren zonaldea insertzio-sekuentzien edo transposonentxertaketarako puntu beroa dela eta salmonella enterica-ko anduietan bigarrenfaseko flagelinaren sintesi-ahalmenean eragiten dutela. Hala ere, huts honek ezdu desabantaila ebolutiboa ekarri bariante-mota hauetarako<\/p>\n

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Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abSalmonella enterica-ren andui monofasikoen karakterizazio molekularra eta epidemiologikoa\/caracterizaci\u00f3n molecular y epidemiol\u00f3gica de cepas monof\u00e1sicas de salmonella enterica<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
    \n
  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Salmonella enterica-ren andui monofasikoen karakterizazio molekularra eta epidemiologikoa\/caracterizaci\u00f3n molecular y epidemiol\u00f3gica de cepas monof\u00e1sicas de salmonella enterica <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 Lorena Laorden Mu\u00f1oz <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 Pa\u00eds vasco\/euskal herriko unibertsitatea<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 07\/07\/2014<\/li>\n<\/ul>\n

     <\/p>\n

    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
      \n
    • Director de la tesis<\/strong>\n
        \n
      • Silvia Herrera Leon<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
          \n
        • Presidente del tribunal: ramon Cisterna cancer <\/li>\n
        • Mar\u00eda aurora Echeita sarrionandia (vocal)<\/li>\n
        • benito Regueiro garcia (vocal)<\/li>\n
        • rosario Rodicio rodicio (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

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