{"id":116033,"date":"2014-07-07T00:00:00","date_gmt":"2014-07-07T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/busqueda-racional-de-nuevas-etiquetas-de-fusion-aplicaciones-biotecnologicas-de-los-dominios-lectina-trebol-b\/"},"modified":"2014-07-07T00:00:00","modified_gmt":"2014-07-07T00:00:00","slug":"busqueda-racional-de-nuevas-etiquetas-de-fusion-aplicaciones-biotecnologicas-de-los-dominios-lectina-trebol-b","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica\/busqueda-racional-de-nuevas-etiquetas-de-fusion-aplicaciones-biotecnologicas-de-los-dominios-lectina-trebol-b\/","title":{"rendered":"B\u00fasqueda racional de nuevas etiquetas de fusi\u00f3n: aplicaciones biotecnol\u00f3gicas de los dominios lectina tr\u00e9bol b."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Ivan Acebron Avalos <\/strong><\/h2>\n<p>Las lectinas son prote\u00ednas con capacidad de reconocer carbohidratos que no poseen un origen inmunol\u00f3gico. Forman un grupo amplio de prote\u00ednas que se encuentran ampliamente distribuidas en todos los reinos biol\u00f3-gicos. Por esta misma raz\u00f3n, las lectinas est\u00e1n involucradas en gran cantidad de procesos esenciales para las c\u00e9lulas: comunicaci\u00f3n celular, se\u00f1alizaci\u00f3n, defensa, patog\u00e9nesis, etc. Aunque las lectinas procedentes de animales y plantas han sido extensamente estudiadas desde un punto de vista estructural y funcional, el reino de los hongos ha atra\u00eddo la atenci\u00f3n estos \u00faltimos a\u00f1os debido a que son una fuente de nuevas lectinas con potenciales aplicaciones en biomedicina y biotecnolog\u00eda.En este contexto, recientemente se caracteriz\u00f3 funcional y estructuralmente una nueva lectina del hongo basidiomiceto laetiporus sulphureous. Esta lectina, denominada lsla, consta de dos m\u00f3dulos: un m\u00f3dulo lectina n-terminal (lsl150) y un m\u00f3dulo c-terminal formador de poros (pfm). El m\u00f3dulo lectina exhibe una estructura tipo tr\u00e9bol \u00c2\u00bf formada por la repetici\u00f3n de tres subdominios (\u00c2\u00bf, \u00c2\u00bf y \u00c2\u00bf), constituidos cada uno por cuatro hebras \u00c2\u00bf, que generan una estructura globular con pseudosimetr\u00eda interna de orden tres. La base adquiere la forma de barril \u00c2\u00bf, mientras que la copa est\u00e1 formada por un triplete de horquillas \u00c2\u00bf donde reside la capacidad de unir carbohidratos.Una b\u00fasqueda racional de lectinas hom\u00f3logas a lsl150 permiti\u00f3 identificar tres prote\u00ednas f\u00fangicas que a\u00fan no hab\u00edan sido caracterizadas: lbl, ssl y anl. La producci\u00f3n recombinante en c\u00e9lulas de e. Coli de estas prote\u00ednas s\u00f3lo fue satisfactoria en la obtenci\u00f3n de los m\u00f3dulos lectina lsl150 y lbl152, que, en definitiva, fueron los que se estudiaron en detalle con el fin de desarrollar aplicaciones biotecnol\u00f3gicas novedosas.La caracterizaci\u00f3n de estas lectinas ha incluido la resoluci\u00f3n estructural mediante cristalograf\u00eda de rayos x de los complejos con lactosa o n-acetillactosamina, dos ligandos espec\u00edficos de estas lectinas, as\u00ed como un profundo an\u00e1lisis biof\u00edsico para valorar la estabilidad y la afinidad de estos sistemas. Adem\u00e1s, la especificidad de estas lectinas fue estudiada mediante la moderna tecnolog\u00eda de los glycan array masivos, donde se vio que las cadenas de poli-lacnac son el mejor ligando para estas lectinas. La versatilidad de estos dominios para reconocer ligandos multivalentes demostr\u00f3 que pueden unir extractos celulares de organismos invertebrados, lo que puede dar las primeras pistas acerca de su posible funci\u00f3n biol\u00f3gica.En el caso particular de lsl150, se realiz\u00f3 un an\u00e1lisis mediante mutag\u00e9nesis dirigida para encontrar los determinantes que albergan los sitios de uni\u00f3n para reconocer az\u00facares. De esta forma, conseguimos restituir la funcionalidad en el subdominio \u00c2\u00bf que a priori era incapaz de unir ninguna mol\u00e9cula de ligando. Este estudio permiti\u00f3 tener una visi\u00f3n global del reconocimiento, que demostr\u00f3 ser un evento de elevada complejidad donde no s\u00f3lo las interacciones entre el ligando y los amino\u00e1cidos del sitio de uni\u00f3n juegan un papel clave, sino que el papel del solvente es un elemento cr\u00edtico que debe ser considerado.Finalmente, toda la informaci\u00f3n recabada nos dio la oportunidad de desarrollar tres aplicaciones bio-tecnol\u00f3gicas basadas en la utilizaci\u00f3n de estos dominios como poderosas etiquetas de fusi\u00f3n. En primer lugar, dise\u00f1amos un m\u00e9todo de expresi\u00f3n y purificaci\u00f3n de prote\u00ednas recombinantes utilizando cromatograf\u00eda de afinidad a agarosa. En segundo lugar, empleamos el dominio lectina como una herramienta alternativa para la inmovilizaci\u00f3n de prote\u00ednas de inter\u00e9s industrial. Por \u00faltimo, hemos desarrollado un sistema basado en na-nopart\u00edculas magn\u00e9ticas que sirve para anclar prote\u00ednas mediante los m\u00f3dulos lectina reversiblemente y de forma orientada, lo que es una ventaja, por ejemplo, en el dise\u00f1o de biosensores.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>B\u00fasqueda racional de nuevas etiquetas de fusi\u00f3n: aplicaciones biotecnol\u00f3gicas de los dominios lectina tr\u00e9bol b.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 B\u00fasqueda racional de nuevas etiquetas de fusi\u00f3n: aplicaciones biotecnol\u00f3gicas de los dominios lectina tr\u00e9bol b. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Ivan Acebron Avalos <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Complutense de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 07\/07\/2014<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jos\u00e9 Miguel Manche\u00f1o G\u00f3mez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Jos\u00e9 gregorio Gavilanes franco <\/li>\n<li>margarita Menendez fernandez (vocal)<\/li>\n<li>Antonio Romero garrido (vocal)<\/li>\n<li>mart\u00edn Mart\u00ednez ripoll (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Ivan Acebron Avalos Las lectinas son prote\u00ednas con capacidad de reconocer carbohidratos que no poseen un origen 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