{"id":116142,"date":"2018-03-11T10:45:07","date_gmt":"2018-03-11T10:45:07","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/desarrollo-y-validacion-de-tecnicas-de-diagnostico-de-infeccion-fungica-invasora\/"},"modified":"2018-03-11T10:45:07","modified_gmt":"2018-03-11T10:45:07","slug":"desarrollo-y-validacion-de-tecnicas-de-diagnostico-de-infeccion-fungica-invasora","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/microbiologia\/desarrollo-y-validacion-de-tecnicas-de-diagnostico-de-infeccion-fungica-invasora\/","title":{"rendered":"Desarrollo y validaci\u00f3n de tecnicas de diagn\u00f3stico de infecci\u00f3n f\u00fangica invasora."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Sara Gago Prieto <\/strong><\/h2>\n<p>La infecci\u00f3n f\u00fangica grave causa la muerte a 1,3 millones de personas anualmente. Se ha descrito que el diagn\u00f3stico temprano de la infecci\u00f3n reduce la mortalidad asociada. Sin embargo, muchas de las t\u00e9cnicas actuales no permiten una respuesta r\u00e1pida y var\u00edan en cuanto a sensibilidad y especificidad. Por ello, se necesitan nuevas aproximaciones que den respuesta en tiempos m\u00e1s cortos y que permitan realizar un diagn\u00f3stico diferencial cuando varios microorganismos causan el mismo cuadro cl\u00ednico. En esta tesis, se han desarrollado herramientas basadas en pcr en tiempo real (rt-pcr) f\u00e1cilmente transferibles al sistema nacional de salud para el diagn\u00f3stico e identificaci\u00f3n de especies de hongos de gran importancia m\u00e9dica.En el primer objetivo, se han dise\u00f1ado herramientas para el diagn\u00f3stico diferencial de la neumon\u00eda f\u00fangica oportunista en pacientes con sida (neumocistosis, histoplasmosisy coccidioidomicosis) y la coccidioidomicosis. Se desarrollaron dos ensayos, uno de ellos en formato m\u00faltiple para la detecci\u00f3n simult\u00e1nea de pneumocystis jirovecii, histoplasma capsulatum y cryptococcus neoformans; y el otro para la detecci\u00f3n de adn de coccidioides. Los cebadores y sondas espec\u00edficas de tipo molecular beacon se dirigieron a la regi\u00f3n its del adn ribos\u00f3mico de cada una de las especies. Ambas t\u00e9cnicas presentaron valores de sensibilidad y especificidad in vitro del 100% y coeficientes de variaci\u00f3n del 3%. La validaci\u00f3nde las t\u00e9cnicas en muestras cl\u00ednicas de pacientes con infecci\u00f3n probada present\u00f3 valores de sensibilidad y especificidad superiores al 90%. En el caso de la coccidioidomicosis, se compar\u00f3 la utilidad de la rt-pcr con el cultivo microbiol\u00f3gico en un modelo murino de infecci\u00f3n durante 14 d\u00edas. Las t\u00e9cnicas mostraron una concordancia muy buena y evaluaron la progresi\u00f3n de la infecci\u00f3n en el mismo sentido en h\u00edgado, bazo y pulm\u00f3n. Sin embargo, la rt-pcr detect\u00f3 una carga f\u00fangica entre 10-1000 veces mayor que el cultivo microbiol\u00f3gico.En el segundo objetivo, se ha evaluado la utilidad de la rt-pcr y el an\u00e1lisis de curvas de fusi\u00f3n de alta resoluci\u00f3n (hrm) para la identificaci\u00f3n de hongos pat\u00f3genos humanos. Lasherramientas de identificaci\u00f3n molecular han ayudado a descubrir que muchas especiesclasificadas por los m\u00e9todos morfol\u00f3gicos como una sola, son en realidad complejos deespecies. Adem\u00e1s, algunas de estas especies presentan diferencias en cuanto a epidemiolog\u00eda, virulencia o sensibilidad a los antif\u00fangicos. Por ello, se han desarrollado dos m\u00e9todos de hrm para la identificaci\u00f3n de especies del g\u00e9nero cryptococcus y el complejo candida parapsilosis. Los procedimientos desarrollados permitieron la amplificaci\u00f3n espec\u00edfica de regiones del adn ribos\u00f3mico, 100 pb de la regi\u00f3n its de cryptococcus y 70 pb de la regi\u00f3n igs-1 del complejo c. Parapsilosis. La concordancia entre hrm y la identificaci\u00f3n mediante secuenciaci\u00f3n de las mismas dianas fue del 100%. Este m\u00e9todo es sencillo, r\u00e1pido y no requiere de una base de datos de secuencias fiable para su aplicaci\u00f3n, lo que facilita su transferencia a los laboratorios cl\u00ednicos.Finalmente, y dentro de este segundo objetivo, se analizaron regiones de microsat\u00e9lites en tres genes (cdc3, his3 y ef3) de varias cepas de candida albicans, responsables de infecci\u00f3n recurrente, mediante hrm y electroforesis capilar. Ambas t\u00e9cnicas demostraron que las cepas responsables de los episodios de infecci\u00f3n ten\u00edan un origen clonal a pesar de sus diferencias en la susceptibilidad a los azoles. Aunque el poder de discriminaci\u00f3n mediante hrm (0,77) fue menor que mediante electroforesis capilar (0,92), el hrm permite un cribado de las cepas relacionadas de forma r\u00e1pida y econ\u00f3mica. Adem\u00e1s, esta metodolog\u00eda permitir\u00eda el estudio de brotes y evita el uso de m\u00e9todos de tipado complejos y de dif\u00edcil implantaci\u00f3n en los laboratorios asistenciales.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Desarrollo y validaci\u00f3n de tecnicas de diagn\u00f3stico de infecci\u00f3n f\u00fangica invasora.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Desarrollo y validaci\u00f3n de tecnicas de diagn\u00f3stico de infecci\u00f3n f\u00fangica invasora. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Sara Gago Prieto <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Complutense de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 17\/07\/2014<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Isabel Cuesta De La Plaza<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: jose Prieto prieto <\/li>\n<li>Jos\u00e9 Miguel Rubio mu\u00f1oz (vocal)<\/li>\n<li>julio Garcia rodriguez (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda soledad Cu\u00e9tara Garc\u00eda (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Sara Gago Prieto La infecci\u00f3n f\u00fangica grave causa la muerte a 1,3 millones de personas anualmente. 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