{"id":116262,"date":"2014-09-09T00:00:00","date_gmt":"2014-09-09T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/desarrollo-de-anticuerpos-monoclonales-frente-a-nosema-ceranae-como-aportacion-al-diagnostico-del-sa%c2%adndrome-de-despoblamiento-de-las-colmenas\/"},"modified":"2014-09-09T00:00:00","modified_gmt":"2014-09-09T00:00:00","slug":"desarrollo-de-anticuerpos-monoclonales-frente-a-nosema-ceranae-como-aportacion-al-diagnostico-del-sa%c2%adndrome-de-despoblamiento-de-las-colmenas","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/microbiologia\/desarrollo-de-anticuerpos-monoclonales-frente-a-nosema-ceranae-como-aportacion-al-diagnostico-del-sa%c2%adndrome-de-despoblamiento-de-las-colmenas\/","title":{"rendered":"Desarrollo de anticuerpos monoclonales frente a nosema ceranae como aportaci\u00f3n al diagn\u00f3stico del s\u00edndrome de despoblamiento de las colmenas."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Carmen Fernandez Vadillo <\/strong><\/h2>\n<p>La nosemosis afecta a las abejas en todo el mundo y est\u00e1 causada por los microsporidios nosema apis y nosema ceranae. Ambas especies infectan el intestino de a. Mellifera, aunque n. Ceranaeparece ser m\u00e1s pat\u00f3gena, y se ha relacionado con los colapsos de las colmenas. Aunque por su morfolog\u00eda las esporas de nosema sp. Pueden visualizarse con microscopio \u00f3ptico (mo), el diagn\u00f3stico de especie es dif\u00edcil ya que las mayores diferencias son ultraestructurales y requieren la utilizaci\u00f3n de microscop\u00eda electr\u00f3nica de transmisi\u00f3n (met) o de t\u00e9cnicas moleculares. Estas t\u00e9cnicasson caras y poco accesibles para muchos laboratorios, por lo que el objetivo principal del trabajo fue la obtenci\u00f3n de anticuerpos monoclonales (acmc) frente a n. Ceranae y n. Apis, para el desarrollo de una inmunofluorescencia indirecta (ifi) que permita identificar ambas especies.En primer lugar se obtuvieron sueros policlonales frente a n. Ceranae y n. Apis, inoculando esporas de estas especies en conejos nueva zelanda. Los sueros de las sangr\u00edas realizadas durante la inmunizaci\u00f3n se titularon mediante ifi tanto frente a la especie hom\u00f3loga como frente a especies heter\u00f3logas de microsporidios. Al contrario que los sueros obtenidos frente a n. Apis, los sueros del lote frente a n. Ceranae no mostraron reacci\u00f3n cruzada con ninguna especie heter\u00f3loga, por lo que uno de ellos se seleccion\u00f3 para llevar a cabo la t\u00e9cnica de ifi que identificara esta especie.Dicha t\u00e9cnica se valid\u00f3 comparando sus resultados con los obtenidos en el centro ap\u00edcola regional (car) mediante mo y pcr m\u00faltiple, en el diagn\u00f3stico de muestras de colmenas. La ifi con suero policlonal, mostr\u00f3 en el test diagn\u00f3stico sensibilidad y especificidad mayores que la mo y similares a la pcr m\u00faltiple (t\u00e9cnica de referencia).M\u00e1s adelante, se obtuvieron acmc frente a n. Ceranae. Para ello se inocularon ratones balb\/c con esporas de esta especie, y sus esplenocitos se fusionaron con c\u00e9lulas de mieloma obteniendo hibridomas. Entre aquellos que secretaban el ac deseado (seleccionados con ifi), se escogieron cuatro: f1.6f10 frente a nosema sp., F1.7d2 y f4.1b11 espec\u00edficos de n. Ceranae y f4.9g2, espec\u00edfico de n. Apis. \u00e9stos se expandieron, se clonaron y, una vez estabilizados, se inocularon en ratones balb\/c para su producci\u00f3n en elevadas concentraciones en ascitis.Para carcterizar los acmc, se determin\u00f3 el isotipo (igm en todos los casos), se realizaron estudios de ifi para conocer su reactividad frente a su especie hom\u00f3loga y otras especies heter\u00f3logas de microsporidio, y se determin\u00f3 su patr\u00f3n de inmunorreconocimiento frente a n. Apis y n. Ceranae, mediante western blot.En el desarrollo de la ifi empleando los acmc, se seleccionaron diluciones que permitieran la detecci\u00f3n sin reacciones cruzadas con otras especies. Para la validaci\u00f3n, se compararon sus resultados y los obtenidos con la ifi con suero policlonal, la mo y la pcr m\u00faltiple en el diagn\u00f3stico de las muestras utilizadas anteriormente. F1.6f10 (frente a nosema sp.) Present\u00f3 sensibilidad y especificidad similares a las de la mo y muy cercanas a las de la pcr. F1.7d2 y f4.1b11, frente a n. Ceranae, presentaron una sensibilidad cercana a la de la pcr y superior a la de la mo. Aunque las especificidades de ifi y mo fueron similares, al estudiar pormenorizadamente los resultados la mo mostr\u00f3 un mayor n\u00famero de falsos diagn\u00f3sticos. Por \u00faltimo, f4.9g2 revel\u00f3 menor sensibilidad que la mo para la detecci\u00f3n de n. Apis pero su especificidad fue mayor y m\u00e1s cercana a la de la pcr.Debido a los resultados mostrados, la t\u00e9cnica de ifi desarrollada podr\u00eda ser una herramienta \u00fatil para el diagn\u00f3stico de la nosemosis en las colmenas, pudiendo utilizarla como una alternativa de menor coste, o en combinaci\u00f3n con las t\u00e9cnicas ya existentes para una mejor detecci\u00f3n e identificaci\u00f3n de las distintas especies del par\u00e1sito.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Desarrollo de anticuerpos monoclonales frente a nosema ceranae como aportaci\u00f3n al diagn\u00f3stico del s\u00edndrome de despoblamiento de las colmenas.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Desarrollo de anticuerpos monoclonales frente a nosema ceranae como aportaci\u00f3n al diagn\u00f3stico del s\u00edndrome de despoblamiento de las colmenas. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Carmen Fernandez Vadillo <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Complutense de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 09\/09\/2014<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Fernando Izquierdo Arias<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Francisco Bolas fernandez <\/li>\n<li>esperanza Rodr\u00edguez de las parras (vocal)<\/li>\n<li>soledad Fenoy rodriguez (vocal)<\/li>\n<li>carolina Hurtado marcos (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Carmen Fernandez Vadillo La nosemosis afecta a las abejas en todo el mundo y est\u00e1 causada por [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center 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