{"id":117138,"date":"2018-03-11T10:46:32","date_gmt":"2018-03-11T10:46:32","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/diseno-y-optimizacion-de-biocatalizadores-para-su-aplicacion-en-la-sa%c2%adntesis-de-carbohidratos-en-condiciones-sostenibles\/"},"modified":"2018-03-11T10:46:32","modified_gmt":"2018-03-11T10:46:32","slug":"diseno-y-optimizacion-de-biocatalizadores-para-su-aplicacion-en-la-sa%c2%adntesis-de-carbohidratos-en-condiciones-sostenibles","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/quimica-organica\/diseno-y-optimizacion-de-biocatalizadores-para-su-aplicacion-en-la-sa%c2%adntesis-de-carbohidratos-en-condiciones-sostenibles\/","title":{"rendered":"Dise\u00f1o y optimizaci\u00f3n de biocatalizadores para su aplicaci\u00f3n en la s\u00edntesis de carbohidratos en condiciones sostenibles"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Sara G\u00f3mez Quevedo <\/strong><\/h2>\n<p>La presente tesis doctoral tiene como objetivo principal la b\u00fasqueda de biocatalizadores, su dise\u00f1o y optimizaci\u00f3n, para su posterior aplicaci\u00f3n en la s\u00edntesis de carbohidratos en condiciones sostenibles. Para ello, se realiz\u00f3 un screening para la b\u00fasqueda de nuevas glicosidasas capaces de hidrolizar az\u00facares activados con grupos p-nitrofenol. De ese estudio se seleccion\u00f3 la bacteria bacillus circulans atc3182 para llevar a cabo la s\u00edntesis de disac\u00e1ridos de inter\u00e9s biol\u00f3gico. En primer lugar se caracteriz\u00f3 el microorganismo (curva de crecimiento, actividad hidrol\u00edtica y constantes catal\u00edticas) y se optimizaron las condiciones de reacci\u00f3n (ph, fuerza i\u00f3nica e inducci\u00f3n de la producci\u00f3n de enzima). Con las mejores condiciones de reacci\u00f3n, se llev\u00f3 a cabo la s\u00edntesis de disac\u00e1ridos gal\u00edY-1,3-glucnac, obteniendo un rendimiento del 52%. Para completar el estudio, se realiz\u00f3 la inmovilizaci\u00f3n del microorganismo en agarosa, agar y acrilamida, obteniendo actividad hidrol\u00edtica con los dos primeros soportes. Con el fin de optimizar el bioproceso, se realiz\u00f3 la expresi\u00f3n y purificaci\u00f3n de la enzima \u00edY-galactosidasa de bacillus circulans atc3182 mediante colas de histidina. Con el biocatalizador purificado se realiz\u00f3 el dise\u00f1o y optimizaci\u00f3n del proceso de inmovilizaci\u00f3n, empleando diferente tipo de soportes;  soportes pol\u00edmeros de naturaleza fen\u00f3lica, nanofibras de carbono y glioxil agarosas. Para todos se determinaron las mejores condiciones de inmovilizaci\u00f3n (ph \u00f3ptimo, tiempo de contacto, actividad retenida). Posteriormente, se seleccionaron las mejores condiciones en cada caso y se llev\u00f3 a cabo la s\u00edntesis de gal\u00edY-1,3-glucnac y gal\u00edY-1,3-galnac. Estudios previos del grupo hab\u00edan revelado que la utilizaci\u00f3n de disolventes sostenibles (derivados de biomasa, como glicerol o diaminas, y l\u00edquidos i\u00f3nicos) en las reacciones mejoraban los rendimientos y selectividad de la reacci\u00f3n. Por ello, se llevaron a cabo las reacciones en presencia de los diferentes solventes observando para cada caso un comportamiento diferente. En el campo de las glicosidasas, se analiz\u00f3 la actividad de la enzima \u00c2\u00bf-fucosidasa de sulfolobus sulfataricus capaz de sintetizar disac\u00e1ridos de amplio inter\u00e9s como el \u00c2\u00bf-l-fuc(1,3)-\u00c2\u00bf-d-gluc-pnf, el \u00c2\u00bf-l-fuc(1,2)-\u00c2\u00bf-d-gluc-pnf y el \u00c2\u00bf-l-fuc(1,3)-\u00c2\u00bf-d-fuc-pnf. Dentro de nuestro estudio, se evalu\u00f3 la influencia de los disolventes sostenibles como co-solventes en la reacci\u00f3n de s\u00edntesis, observ\u00e1ndose cambios en la regioselectividad de la enzima. Para comprender c\u00f3mo pod\u00eda afectar a la estructura terciaria de la prote\u00edna, se realizaron estudios de fluorescencia con aquellos disolventes de mayor inter\u00e9s. Se pudo concluir que la presencia de los derivados de biomasa gc4 y dma1 provocaban cambios conformacionales en la enzima que justificaban las diferencias apreciadas en la s\u00edntesis de disac\u00e1ridos. Por otro lado, con el objeto de obtener carbohidratos modificados regioselectivamente en condiciones sostenibles se emple\u00f3 otro grupo de enzimas que fueron las lipasas calb, c. Ant\u00e1rctica y pseudomonas stutzeri. Inicialmente, se caracteriz\u00f3 su actividad hidrol\u00edtica con sustratos activados con p-nitrofenol y se llev\u00f3 a cabo el estudio de optimizaci\u00f3n de las condiciones de inmovilizaci\u00f3n en nanofibras de carbono y el soporte comercial celite 435\u00c2\u00ae. Con las mejores condiciones obtenidas, se llev\u00f3 a cabo la inmovilizaci\u00f3n de las enzimas, para su posterior empleo en la desacetilaci\u00f3n regioselectiva de galactosa peracetilada. Finalmente, se seleccion\u00f3 el soporte celite 435 \u00c2\u00ae como el de mejor actividad, y se llev\u00f3 a cabo un estudio de estabilidad t\u00e9rmica. Finalmente, se realizaron estudios de resonancia de plasm\u00f3n superficial (spr) para evaluar la interacci\u00f3n entre carbohidratos y la prote\u00edna atiii. Se inmovilizaron los carbohidratos biotinilados sobre superficies funcionalizadas con estreptavidina, y se llevaron a cabo estudios de interacci\u00f3n con la prote\u00edna en un rango de concentraciones. Con ello, se pudieron obtener datos cin\u00e9ticos de interacci\u00f3n.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Dise\u00f1o y optimizaci\u00f3n de biocatalizadores para su aplicaci\u00f3n en la s\u00edntesis de carbohidratos en condiciones sostenibles<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Dise\u00f1o y optimizaci\u00f3n de biocatalizadores para su aplicaci\u00f3n en la s\u00edntesis de carbohidratos en condiciones sostenibles <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Sara G\u00f3mez Quevedo <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Complutense de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 15\/02\/2015<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>d\u00e9gano Hern\u00e1iz G\u00f3mez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Jos\u00e9 vicente Sinisterra gago <\/li>\n<li>eduardo Garc\u00eda-junceda redondo (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda Fernandez lobato (vocal)<\/li>\n<li>Mar\u00eda cristina Vega fern\u00e1ndez (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Sara G\u00f3mez Quevedo La presente tesis doctoral tiene como objetivo principal la b\u00fasqueda de biocatalizadores, su dise\u00f1o 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