{"id":117803,"date":"2015-06-07T00:00:00","date_gmt":"2015-06-07T00:00:00","guid":{"rendered":""},"modified":"2015-06-07T00:00:00","modified_gmt":"2015-06-07T00:00:00","slug":"human-postmitotic-neurons-derived-from-ntera2-d1-cells-by-short-exposure-to-cytosine-b-d-arabinofuranoside-characterization-of-neurotransmitter-phenotypes-and-role-of-phospholipase-c-b1-in-differenti","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/farmacologia-molecular\/human-postmitotic-neurons-derived-from-ntera2-d1-cells-by-short-exposure-to-cytosine-b-d-arabinofuranoside-characterization-of-neurotransmitter-phenotypes-and-role-of-phospholipase-c-b1-in-differenti\/","title":{"rendered":"Human postmitotic neurons derived from ntera2\/d1 cells by short exposure to cytosine-b-d-arabinofuranoside: characterization of neurotransmitter phenotypes and role of phospholipase c b1 in differenti"},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de Imanol Gonzalez Burguera <\/strong><\/h2>\n

Caracterizaci\u00c2\u00bfn fenot\u00c2\u00bfpica de neurotransmisores y papel de la fosfolipasa c \u00c2\u00bf1 en la diferenciaci\u00c2\u00bfn neuronal de c\u00c2\u00bflulas nt2 de teratocarcinoma humano mediante tratamiento con citosina-\u00c2\u00bf-d-arabinofuranosido (arac). Antecedentes y objetivosaunque, est\u00c2\u00bf bien demostrado el papel de la isoforma plc\u00c2\u00bf1 a nivel de membrana plasm\u00c2\u00bftica y citoplasma en el metabolismo de fosfoinos\u00c2\u00bftidos activado por muchos est\u00c2\u00bfmulos extracelulares, desde hace algunos a\u00c2\u00bfos se conoce la existencia de esta actividad enzim\u00c2\u00bftica tambi\u00c2\u00bfn en el n\u00c2\u00bfcleo (neri y cols., 1999; d\u00c2\u00bfsantos y cols., 2000). En ciertos modelos celulares de origen no neuronal (mioblastos c2c12), la transfecci\u00c2\u00bfn de mutantes de plc\u00c2\u00bf1 que carece de la se\u00c2\u00bfal de localizaci\u00c2\u00bfn nuclear (nls), inhiben la diferenciaci\u00c2\u00bfn celular, otorgando as\u00c2\u00bf, un papel importante a la plc\u00c2\u00bf1 nuclear en dicho proceso (faenza y cols. 2003; faenza y cols., 2007). En cuanto al proceso de diferenciaci\u00c2\u00bfn neuronal, aunque escasas, existen evidencias que apuntan a la participaci\u00c2\u00bfn de la plc\u00c2\u00bf1a\/b en el proceso. En primer lugar, el an\u00c2\u00bflisis de la expresi\u00c2\u00bfn y actividad funcional de la plc\u00c2\u00bf1 (arnm y prote\u00c2\u00bfna) en la corteza de cerebro humano adulto y fetal, muestra una elevada presencia de esta prote\u00c2\u00bfna en adultos, mientras que pr\u00c2\u00bfcticamente no se expresar\u00c2\u00bfa en la corteza cerebral fetal (caricasole y cols., 2000; peruzzi y cols., 2002; ruiz de az\u00c2\u00bfa y cols., 2006). Por otro lado, tanto ratones \u00c2\u00bfknock-out\u00c2\u00bf plc\u00c2\u00bf1 (-\/-) como mglur5 (-\/-) exhiben alteraciones en la formaci\u00c2\u00bfn de los denominados \u00c2\u00bfbarrels\u00c2\u00bf de la corteza somatosensorial, demostrando as\u00c2\u00bf la implicaci\u00c2\u00bfn de la v\u00c2\u00bfa de se\u00c2\u00bfalizaci\u00c2\u00bfn de plc\u00c2\u00bf1, activada a trav\u00c2\u00bfs de receptores mglur1, en el desarrollo de la corteza cerebral (hannan y cols., 2001; b\u00c2\u00bfhm y cols., 2002; spires y cols., 2005). Finalmente, en modelos celulares de diferenciaci\u00c2\u00bfn neuronal, como las c\u00c2\u00bflulas nt2\/d1 de teratocarcinoma humano, se ha descrito c\u00c2\u00bfmo su proceso de diferenciaci\u00c2\u00bfn hacia neuronas maduras nt2n se acompa\u00c2\u00bfa de un incremento de los niveles de expresi\u00c2\u00bfn de las prote\u00c2\u00bfnas g\u00c2\u00bfq\/11, de la isoforma plc\u00c2\u00bf1 y de la actividad fosfolipasa c (novak et al, 2000). Por lo tanto, a pesar de haberse demostrado la participaci\u00c2\u00bfn de la plc\u00c2\u00bf1 en los procesos de diferenciaci\u00c2\u00bfn neuronal, a\u00c2\u00bfn dicho conocimiento, ha sido \u00c2\u00bfnicamente descrito desde un punto de vista fenomenol\u00c2\u00bfgico, encontr\u00c2\u00bfndose a\u00c2\u00bfn por definir los mecanismos subyacentes a dicha participaci\u00c2\u00bfn. As\u00c2\u00bf, hasta la fecha no se ha descrito la importancia de cada una de las variantes de expresi\u00c2\u00bfn de la plc\u00c2\u00bf1 (variantes 1a y 1b), ni tampoco ha podido atribuirse a alguna de las localizaciones subcelulares de plc\u00c2\u00bf1 dicha participaci\u00c2\u00bfn. Por ello, en este trabajo proponemos el estudio de la implicaci\u00c2\u00bfn de la plc\u00c2\u00bf1 en los procesos de plasticidad y diferenciaci\u00c2\u00bfn neuronal empleando un modelo celular de diferenciaci\u00c2\u00bfn neuronal, la l\u00c2\u00bfnea celular humana nt2\/d1.Obtenci\u00c2\u00bfn, validaci\u00c2\u00bfn y caracterizaci\u00c2\u00bfn de un modelo de diferenciaci\u00c2\u00bfn de neurona humana: l\u00c2\u00bfnea celular nt2 de teratocarcinoma humano.Para llevar a cabo este estudio, en primer lugar, han sido desarrollados, validados y caracterizados dos protocolos de diferenciaci\u00c2\u00bfn de las c\u00c2\u00bflulas nt2 a nt2n, mediante el empleo de dos inductores, el \u00c2\u00bfcido retinoico (ra) o el antimit\u00c2\u00bftico an\u00c2\u00bflogo de la citosina (arac), bas\u00c2\u00bfndonos en los trabajos de andrews y cols., 1984 y musch. Y cols., 2010, respectivamente.De acuerdo a lo descrito ampliamente en la literatura, las c\u00c2\u00bflulas neuronales obtenidas con el \u00c2\u00bfcido retinoico (ra\/nt2n) desarrollaron una citoarquitectura polar y forman axones y dendritas identificables morfol\u00c2\u00bfgicamente. Sin embargo, este protocolo presenta una serie de limitaciones: el tiempo de tratamiento es largo (2 meses), se obtiene un bajo rendimiento de c\u00c2\u00bflulas nt2n (s\u00c2\u00bflo el 5% de las cel\u00c2\u00bflas nt2 sembradas diferencian a nt2n) y por \u00c2\u00bfltimo, y debido a ello, es dif\u00c2\u00bfcil aplicar en ellas estrategias de biolog\u00c2\u00bfa molecular. Siguiendo el trabajo de musch y colaboradores, hemos desarrollado otro protocolo de diferenciaci\u00c2\u00bfn, en el que tratando las c\u00c2\u00bflulas con arac durante tan s\u00c2\u00bflo 6 d\u00c2\u00bfas, realizando un pase a las 72h y siembra en mayor confluencia, se obtuvieron tres veces m\u00c2\u00bfs neuronas diferenciadas (arac\/nt2n) que con ra.Mediante t\u00c2\u00bfcnicas de inmunofluorescencia y western blot, observamos que las c\u00c2\u00bflulas neuronales nt2n obtenidas con ambos protocolos, expresaban marcadores neuronales tales como nf200, dcx y \u00c2\u00bf-iii-tubulina, los cuales muestran un incremento en la immunoreactividad a lo largo de los protocolos de diferenciaci\u00c2\u00bfn con ra y con arac. Incrementos en concordancia con lo observado en estudios previos para el modelo de ra\/nt2n (pleasure y cols., 1992; couillard-despress y cols 2008; megiorni y cols., 2005). Como aproximaci\u00c2\u00bfn al estudio de la funcionalidad neuronal, se ha realizado un an\u00c2\u00bflisis morfom\u00c2\u00bftrico de las c\u00c2\u00bflulas neuronales obtenidas con ambos protocolos. Para ello, se tom\u00c2\u00bf como referencia el trabajo de haile y cols (2014) analiz\u00c2\u00bfndose par\u00c2\u00bfmetros como \u00c2\u00bfrea total de la c\u00c2\u00bflula, \u00c2\u00bfrea del n\u00c2\u00bfcleo y soma, as\u00c2\u00bf como el n\u00c2\u00bfmero de neuritas que presenta cada c\u00c2\u00bflula y la longitud de \u00c2\u00bfstas. Los resultados indican un soma y n\u00c2\u00bfcleo mayor en el caso de las arac\/nt2n, y una relaci\u00c2\u00bfn menor del \u00c2\u00bfrea del n\u00c2\u00bfcleo respecto al soma de la c\u00c2\u00bflula con respecto al obtenido con ra\/nt2n. El an\u00c2\u00bflisis morfom\u00c2\u00bftrico de las neuritas mostr\u00c2\u00bf que las c\u00c2\u00bflulasarac\/nt2n presentaban una longitud total de neuritas por c\u00c2\u00bflula muy por debajo de los valores descritos en la literatura para el modelo ra\/nt2n (haile y cols., 2014). Quiz\u00c2\u00bf periodos de tratamiento m\u00c2\u00bfs largos, el uso de factores de crecimiento o incluir cultivos con astrocitos promover\u00c2\u00bfan la obtenci\u00c2\u00bfn de un cultivo de c\u00c2\u00bflulas arac\/nt2n con unas proyecciones de mayor longitud. En cualquier caso, los resultados experimentales aqu\u00c2\u00bf presentados revelan que los progenitores nt2 pueden ser inducidos a diferenciarse en un corto per\u00c2\u00bfodo de tiempo y con una alta eficiencia en c\u00c2\u00bflulas que cumplen los criterios generalmente aceptados para las neuronas postmit\u00c2\u00bfticas, y subrayar que la diferenciaci\u00c2\u00bfn inducida por arac de c\u00c2\u00bflulas nt2 representa un valioso modelo para estudiar los mecanismos moleculares de diferenciaci\u00c2\u00bfn neuronal subyacentes.Finalmente, el estudio del fenotipo neurotransmisor de ambos modelos, mediante t\u00c2\u00bfcnicas de inmunofluorescencia y western blot, revel\u00c2\u00bf fenotipos perfectamente diferenciados para cada modelo. As\u00c2\u00bf, las c\u00c2\u00bflulas ra\/nt2n obtenidas resultaron mayoritariamente gaba\u00c2\u00bfrgicas, mientras que las c\u00c2\u00bflulas tratadas con arac dieron lugar a un fenotipo neurotransmisor caracterizado por la co-expresi\u00c2\u00bfn de marcadores tanto glutamat\u00c2\u00bfrgicos como colin\u00c2\u00bfrgicos. Este fen\u00c2\u00bfmeno ha sido descrito recientemente para progenitores neurales embrionarios del hipocampo (bhargava y cols., 2010), lo que sugiere que el fenotipo de las c\u00c2\u00bflulas arac\/nt2n, quiz\u00c2\u00bf no se encontrar\u00c2\u00bfa completamente definido. Papel de la plc\u00c2\u00bf1a\/b en el proceso de diferenciaci\u00c2\u00bfn neuronal. Estudio en c\u00c2\u00bflulas pc12, nt2, y corteza cerebral de rata.Con el fin de abordar el estudio de la implicaci\u00c2\u00bfn de la plc\u00c2\u00bf1a\/b en el proceso de diferenciaci\u00c2\u00bfn neuronal, en primer lugar, se valor\u00c2\u00bf la localizaci\u00c2\u00bfn subcelular de cada una de las variantes de expresi\u00c2\u00bfn de la plc\u00c2\u00bf1 en c\u00c2\u00bflulas nt2 y en corteza cerebral de rata. Los resultados de immunofluorescencia en n\u00c2\u00bfcleos aislados de corteza cerebral de rata, indicaron que la plc\u00c2\u00bf1 solo se encontraba en n\u00c2\u00bfcleos positivos para el marcador de neurona madura neun\/fox-3, demostr\u00c2\u00bfndose a su vez su localizaci\u00c2\u00bfn en la parte interna de la membrana nuclear, donde el immunomarcado fue adem\u00c2\u00bfs positivo para el marcador de \u00c2\u00bfnuclear speckles\u00c2\u00bf sc-35. En cuanto a la distribuci\u00c2\u00bfn de ambas variantes, tanto en las fracciones celulares obtenidas a partir de corteza cerebral de rata, como en las c\u00c2\u00bflulas nt2 progenitoras, la inmunoreactividad de plc\u00c2\u00bf1a fue mayor a la de plc\u00c2\u00bf1b en todas las fracciones estudiadas, aunque la contribuci\u00c2\u00bfn relativa de cada variante a la se\u00c2\u00bfal total difer\u00c2\u00bfa entre compartimentos subcelulares, siendo a nivel nuclear donde la diferencia era menor. Posteriormente, se valor\u00c2\u00bf la participaci\u00c2\u00bfn de la plc\u00c2\u00bf1a\/b en el proceso de diferenciaci\u00c2\u00bfn, no s\u00c2\u00bflo en los modelos de neurona humana bien caracterizados ra\/nt2n y arac\/nt2n nt2, sino que tambi\u00c2\u00bfn se utiliz\u00c2\u00bf el modelo celular neuronal de feocromocitoma suprarrenal pc12 (greene y cols., 1976; yang y cols., 2011). Cuando las c\u00c2\u00bflulas pc12 son tratadas con ngf (factor de crecimiento nervioso) adquieren caracter\u00c2\u00bfsticas de neuronas simp\u00c2\u00bfticas, como cambios en la morfolog\u00c2\u00bfa; desarrollan excitabilidad el\u00c2\u00bfctrica y desarrollan largas neuritas (connolly y cols., 1979). El protocolo de diferenciaci\u00c2\u00bfn de nt2 a nt2n con ra o arac, se vio acompa\u00c2\u00bfado de un incremento en la expresi\u00c2\u00bfn de plc\u00c2\u00bf1a\/b, que fue anterior al observado para los marcadores neuronales nf200 y \u00c2\u00bf-iii tubulina. Resultados en concordancia con lo ya descrito por novak y cols 2000 en el modelo ra\/nt2n. Por el contrario, la diferenciaci\u00c2\u00bfn de las c\u00c2\u00bflulas pc12 no dio lugar a cambios en la expresi\u00c2\u00bfn de plc\u00c2\u00bf1. A continuaci\u00c2\u00bfn, mediante estrategias de biolog\u00c2\u00bfa molecular, se modific\u00c2\u00bf la expresi\u00c2\u00bfn de la plc\u00c2\u00bf1a\/b en las c\u00c2\u00bflulas pc12 y arac\/nt2n y se valor\u00c2\u00bf el efecto que estos cambios produc\u00c2\u00bfan en el proceso de diferenciaci\u00c2\u00bfn neuronal, en t\u00c2\u00bfrminos de morfolog\u00c2\u00bfa celular y la expresi\u00c2\u00bfn de marcadores neuronales. En ambos modelos, el silenciamiento de la expresi\u00c2\u00bfn proteica de la plc\u00c2\u00bf1a\/b mediante el empleo de sirnas, impidi\u00c2\u00bf los cambios morfol\u00c2\u00bfgicos y de expresi\u00c2\u00bfn de los marcadores neuronales nf200 y \u00c2\u00bf-iii tubulina, inducidos por ngf o arac. Adem\u00c2\u00bfs, la sobreexpresi\u00c2\u00bfn de cualquiera de las variantes de expresi\u00c2\u00bfn de la plc\u00c2\u00bf1 en c\u00c2\u00bflulas nt2, en ausencia de arac, dio lugar a la aparici\u00c2\u00bfn de proyecciones neuronales y un incremento en la expresi\u00c2\u00bfn de \u00c2\u00bf-iii tubulina y nf200. Resultados que junto con los derivados del empleo de sirnas, demuestra que la plc\u00c2\u00bf1a y plc\u00c2\u00bf1b no s\u00c2\u00bflo son indispensables para inducir la diferenciaci\u00c2\u00bfn de las c\u00c2\u00bflulas nt2 a nt2n con arac, si no que ser\u00c2\u00bfan suficientes.En cuanto al mecanismo por el cual la plc\u00c2\u00bf1a\/b podr\u00c2\u00bfa estar modulando estos efectos, tal y como introducimos al comienzo de este informe, estudios en l\u00c2\u00bfneas celulares no neuronales, implican a la plc\u00c2\u00bf1 nuclear en el mismo. Sin embargo, los resultados de western blot en fracciones subcelulares as\u00c2\u00bf como de immunofluorescencia, revelan que los cambios de expresi\u00c2\u00bfn de la plc \u00c2\u00bf1a\/b inducidos por el arac, se corresponden esencialmente a cambios significativos a nivel citos\u00c2\u00bflico y de membrana plasm\u00c2\u00bftica, pero no nuclear. Si bien la participaci\u00c2\u00bfn de una prote\u00c2\u00bfna en un proceso no requiere necesariamente de cambios en su expresi\u00c2\u00bfn proteica, esta observaci\u00c2\u00bfn podr\u00c2\u00bfa estar indic\u00c2\u00bfndonos la existencia de un elemento a trav\u00c2\u00bfs del cual la plc\u00c2\u00bf1 citos\u00c2\u00bflica podr\u00c2\u00bfa actuar a nivel nuclear. Recientemente, utilizando como referencia el extremo c-terminal de la plc\u00c2\u00bf1, que contiene entre otros el sitio de uni\u00c2\u00bfn primario de la subunidad \u00c2\u00bfq de la prote\u00c2\u00bfna gq, y una se\u00c2\u00bfal de localizaci\u00c2\u00bfn nuclear, ha sido identificada una nueva prote\u00c2\u00bfna de interacci\u00c2\u00bfn de la plc\u00c2\u00bf1, el factor x de asociaci\u00c2\u00bfn a translin (trax) (aisiku et al, 2010). La interacci\u00c2\u00bfn entre estas dos prote\u00c2\u00bfnas ya ha sido descrita en cultivos celulares como las c\u00c2\u00bflulas hek 293 o las pc12, donde usando t\u00c2\u00bfcnicas como coimmunofluorescencia, immunoprecipitaci\u00c2\u00bfn y fret, han demostrado una localizaci\u00c2\u00bfn fundamentalmente citos\u00c2\u00bflica del complejo trax-plc\u00c2\u00bf1a (aisiku y cols., 2010; philip y cols., 2012). En cuanto a la participaci\u00c2\u00bfn de trax en el proceso de diferenciaci\u00c2\u00bfn de las c\u00c2\u00bflulas pc12, cuando su expresi\u00c2\u00bfn es silenciada con sirnas, \u00c2\u00bfstas no muestran cambios en su morfolog\u00c2\u00bfa cuando son tratadas con ngf, sugiriendo la participaci\u00c2\u00bfn de trax en el proceso de diferenciaci\u00c2\u00bfn. Respecto al modelo neuronal de arac\/nt2n humano, se observa un incremento en su expresi\u00c2\u00bfn durante el proceso de diferenciaci\u00c2\u00bfn, incremento que desaparece cuando la expresi\u00c2\u00bfn de plc\u00c2\u00bf1a\/b es silenciada con sirnas. Adem\u00c2\u00bfs, la sobreexpresi\u00c2\u00bfn de plc\u00c2\u00bf1a, plc\u00c2\u00bf1b o ambas producen un incremento en la expresi\u00c2\u00bfn de trax. Por lo que la expresi\u00c2\u00bfn de trax, al igual que la de nf200 y \u00c2\u00bf-iii-tubulina, podr\u00c2\u00bfa estar modulada por la plc\u00c2\u00bf1a\/b. Sin embargo, el incremento de trax ser\u00c2\u00bfa posterior al incremento observado para plc\u00c2\u00bf1a\/b, y se localizar\u00c2\u00bfa a nivel nuclear, mientras que el de plc\u00c2\u00bf1a\/b se daba a nivel citos\u00c2\u00bflico y de membrana plasm\u00c2\u00bftica. Adem\u00c2\u00bfs, en nuestro modelo de diferenciaci\u00c2\u00bfn arac\/nt2n mediante la t\u00c2\u00bfcnica de fret se observa que la interacci\u00c2\u00bfn de ambas prote\u00c2\u00bfnas s\u00c2\u00bflo ocurre en el n\u00c2\u00bfcleo y a t\u00c2\u00bfrmino del tratamiento de diferenciaci\u00c2\u00bfn. Por ello, en el modelo arac\/nt2n, los resultados no sugieren una mediaci\u00c2\u00bfn de trax en la diferenciaci\u00c2\u00bfn dirigida por plc \u00c2\u00bf1 e inducida por arac.En cuanto al rol que tendr\u00c2\u00bfa el complejo trax-plc\u00c2\u00bf1a a nivel nuclear en el modelo de arac\/nt2n se encontrar\u00c2\u00bfa a\u00c2\u00bfn por definir. Seg\u00c2\u00bfn nuestros resultados, trax podr\u00c2\u00bfa encontrarse mediando en la actividad nuclear de la plc\u00c2\u00bf1 y en procesos que ir\u00c2\u00bfan m\u00c2\u00bfs all\u00c2\u00bf de la diferenciaci\u00c2\u00bfn neuronal. Futuros estudios que analizasen la funci\u00c2\u00bfn de este complejo en el n\u00c2\u00bfcleo neuronal ser\u00c2\u00bfan de gran inter\u00c2\u00bfs.<\/p>\n

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Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abHuman postmitotic neurons derived from ntera2\/d1 cells by short exposure to cytosine-b-d-arabinofuranoside: characterization of neurotransmitter phenotypes and role of phospholipase c b1 in differenti<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
    \n
  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Human postmitotic neurons derived from ntera2\/d1 cells by short exposure to cytosine-b-d-arabinofuranoside: characterization of neurotransmitter phenotypes and role of phospholipase c b1 in differenti <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 Imanol Gonzalez Burguera <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 Pa\u00eds vasco\/euskal herriko unibertsitatea<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 06\/07\/2015<\/li>\n<\/ul>\n

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    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
      \n
    • Director de la tesis<\/strong>\n
        \n
      • Garcia Del Ca\u00f1o Gontzal<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
          \n
        • Presidente del tribunal: enrique Echevarria orella <\/li>\n
        • n\u00e9stor G\u00f3mez trias (vocal)<\/li>\n
        • Ruiz de azua lopez de vicu\u00f1a i\u00f1igo (vocal)<\/li>\n
        • enrique Claro izaguirre (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

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          Tesis doctoral de Imanol Gonzalez Burguera Caracterizaci\u00c2\u00bfn fenot\u00c2\u00bfpica de neurotransmisores y papel de la fosfolipasa c \u00c2\u00bf1 en la diferenciaci\u00c2\u00bfn […]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[561,12909],"tags":[44634,61845,177588,231936,29197,158749],"class_list":["post-117803","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-farmacologia-molecular","category-pais-vasco-euskal-herriko-unibertsitatea","tag-enrique-claro-izaguirre","tag-enrique-echevarria-orella","tag-garcia-del-cano-gontzal","tag-imanol-gonzalez-burguera","tag-nestor-gomez-trias","tag-ruiz-de-azua-lopez-de-vicuna-inigo"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/117803","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=117803"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/117803\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=117803"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=117803"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=117803"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}