{"id":17142,"date":"2018-03-09T09:05:04","date_gmt":"2018-03-09T09:05:04","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/obtencion-y-purificacion-de-enzimas-implicadas-en-la-determinacion-de-colesterol-colesterol-oxidasa-y-nadh-peroxidasa\/"},"modified":"2018-03-09T09:05:04","modified_gmt":"2018-03-09T09:05:04","slug":"obtencion-y-purificacion-de-enzimas-implicadas-en-la-determinacion-de-colesterol-colesterol-oxidasa-y-nadh-peroxidasa","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/quimica\/obtencion-y-purificacion-de-enzimas-implicadas-en-la-determinacion-de-colesterol-colesterol-oxidasa-y-nadh-peroxidasa\/","title":{"rendered":"Obtenci\u00f3n y purificaci\u00f3n de enzimas implicadas en la determinaci\u00f3n de colesterol: colesterol oxidasa y nadh peroxidasa"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> M. Desamparados Sarabia Meseguer <\/strong><\/h2>\n<p>Desde la perspectiva de b\u00fasqueda de fuentes alternativas para determinar la concentraci\u00f3n de colesterol, tanto en suero como en alimentos, han sido estudiadas dos enzimas oxidativas, colesterol oxidasa y nadh peroxidasa.  la enzima coleterol oxidasa fue aislada de streptomyces lividans 1326 pco-3. En primer lugar fue realizada la optimizaci\u00f3n del cultivo del microorganismo siendo los valores 2 vvm de aireaci\u00f3n y 600 rpm de agitaci\u00f3n los \u00f3ptimos encontrados para la producci\u00f3n de la enzima. Colesterol oxidasa fue posteriormente purificada a homogeneidad en un solo paso cromatogr\u00e1fico, utilizando una columna de afinidad con colesterol consigui\u00e9ndose una purificaci\u00f3n de 8,91 veces y una actividad espec\u00edfica de 28,6.  por \u00faltimo, el gen choa productor de la enzima colesterol oxidasa fue clonado en pichia pastoris gs115, logr\u00e1ndose la integraci\u00f3n de este heter\u00f3logo en el genoma de la levadura. La producci\u00f3n m\u00e1xima de la enzima fue conseguida tras a\u00f1adir al medio de cultivo una concentraci\u00f3n de metanol del 3% y mantener las condiciones de aireaci\u00f3n y agitaci\u00f3n respectivamente en 2.5 vvm y 250 rpm mediante la utilizaci\u00f3n de un fermentador.  por otro lado, la enzima nadh peroxidasa fue aislada de la bacteria aerococcus viridans atcc 11563. Las condiciones \u00f3ptimas de producci\u00f3n de la enzima fueron obtenidas en medios con glucosa como fuente de carbono y catalasa, coincidiendo con un valor nulo de per\u00f3xido de hidr\u00f3geno en el medio extracelular. Posteriormente, la enzima fue purificada a homogeneidad mediante un protocolo que combin\u00f3 la extracci\u00f3n con lisozima, precipitaci\u00f3n con sulfato am\u00f3nico, una columna de interacci\u00f3n hidrof\u00f3bica y una columna de hidroxiapatilo, de tal forma que la actividad espec\u00edfica encontrada fue de 114 con un purificaci\u00f3n de 21,8. Tras la realizaci\u00f3n del an\u00e1lisis molecular de la enzima, el peso molecular hallado mediante la t\u00e9cnica de filtraci\u00f3n en gel fue de 215.000 da. Debido a que en<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Obtenci\u00f3n y purificaci\u00f3n de enzimas implicadas en la determinaci\u00f3n de colesterol: colesterol oxidasa y nadh peroxidasa<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Obtenci\u00f3n y purificaci\u00f3n de enzimas implicadas en la determinaci\u00f3n de colesterol: colesterol oxidasa y nadh peroxidasa <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 M. Desamparados Sarabia Meseguer <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Murcia<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 31\/05\/2002<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Francisco Garc\u00eda Carmona<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: romualdo Mu\u00f1oz gir\u00f3n <\/li>\n<li>antonia Murcia Mar\u00eda (vocal)<\/li>\n<li>Juan a Cabanes ros (vocal)<\/li>\n<li>Jos\u00e9 Manuel Lopez nicolas (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de M. Desamparados Sarabia Meseguer Desde la perspectiva de b\u00fasqueda de fuentes alternativas para determinar la concentraci\u00f3n de [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"site-sidebar-layout":"default","site-content-layout":"","ast-site-content-layout":"","site-content-style":"default","site-sidebar-style":"default","ast-global-header-display":"","ast-banner-title-visibility":"","ast-main-header-display":"","ast-hfb-above-header-display":"","ast-hfb-below-header-display":"","ast-hfb-mobile-header-display":"","site-post-title":"","ast-breadcrumbs-content":"","ast-featured-img":"","footer-sml-layout":"","theme-transparent-header-meta":"","adv-header-id-meta":"","stick-header-meta":"","header-above-stick-meta":"","header-main-stick-meta":"","header-below-stick-meta":"","astra-migrate-meta-layouts":"default","ast-page-background-enabled":"default","ast-page-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-4)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"ast-content-background-meta":{"desktop":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"tablet":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""},"mobile":{"background-color":"var(--ast-global-color-5)","background-image":"","background-repeat":"repeat","background-position":"center center","background-size":"auto","background-attachment":"scroll","background-type":"","background-media":"","overlay-type":"","overlay-color":"","overlay-gradient":""}},"footnotes":""},"categories":[160,955,8235,17],"tags":[53808,5284,53810,53809,53807,8397],"class_list":["post-17142","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-bioquimica","category-enzimologia","category-murcia","category-quimica","tag-antonia-murcia-maria","tag-francisco-garcia-carmona","tag-jose-manuel-lopez-nicolas","tag-juan-a-cabanes-ros","tag-m-desamparados-sarabia-meseguer","tag-romualdo-munoz-giron"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/17142","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=17142"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/17142\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=17142"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=17142"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=17142"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}