{"id":52820,"date":"2018-03-09T22:40:26","date_gmt":"2018-03-09T22:40:26","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/ingenieria-tisular-aplicacion-de-celulas-madre-en-reparacion-de-defectos-epidermicos\/"},"modified":"2018-03-09T22:40:26","modified_gmt":"2018-03-09T22:40:26","slug":"ingenieria-tisular-aplicacion-de-celulas-madre-en-reparacion-de-defectos-epidermicos","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/biologia-humana\/ingenieria-tisular-aplicacion-de-celulas-madre-en-reparacion-de-defectos-epidermicos\/","title":{"rendered":"Ingenier\u00eda tisular: aplicaci\u00f3n de c\u00e9lulas madre en reparaci\u00f3n de defectos epid\u00e9rmicos"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Celia Corrales G\u00f3mez <\/strong><\/h2>\n<p>Una adecuada cicatrizaci\u00f3n de las heridas de la piel es clave en el desarrollo favorable de numerosos cuadros patol\u00f3gicos. Se han descrito un gran n\u00famero de complicaciones m\u00e9dicas o quir\u00fargicas que pueden ser atribuidas a deficiencias en la cicatrizaci\u00f3n de las heridas, existiendo un amplio abanico de enfermedades y entidades patol\u00f3gicas (insuficiencia venosa perif\u00e9rica, isquemia arterial, diabetes, c\u00e1ncer, inmunodepresi\u00f3n), que influyen de forma negativa sobre la reparaci\u00f3n de las heridas, siendo la causa de una parte importante de la morbilidad e indirectamente, de la mortalidad, que encontramos a nivel hospitalario. Menci\u00f3n especial merecen por su frecuencia y por el gran impacto sanitario y socioecon\u00f3mico que acarrean sus potenciales secuelas, las \u00falceras por dec\u00fabito y\/o vasculares. la ingenier\u00eda tisular, se ha visto enriquecida en los \u00faltimos a\u00f1os por la aparici\u00f3n continua de numerosos estudios que intentan aportar m\u00e1s luz sobre la biolog\u00eda de las c\u00e9lulas madre y sus posibles aplicaciones terap\u00e9uticas. como hip\u00f3tesis de trabajo, nos planteamos, si las c\u00e9lulas madre musculares (muscle derived stem celis, mdsc) pod\u00edan representar una alternativa eficaz para la reparaci\u00f3n de defectos cut\u00e1neos excisionales. Para verificar esta hip\u00f3tesis, nos propusimos dos objetivos: &#8211; aislamiento, caracterizaci\u00f3n y elecci\u00f3n del momento para el transplante de las mdsc. &#8211; aplicaci\u00f3n de las mdsc como terapia celular sobre un modelo experimental de defecto excisional cut\u00e1neo. en el primer objetivo se dise\u00f1\u00f3 un protocolo de obtenci\u00f3n de mdsc. Las c\u00e9lulas fueron extra\u00eddas a partir de una biopsia del m\u00fasculo dorsal de conejos blancos de nueva zelanda (n=20), y se llev\u00f3 a cabo su caracterizaci\u00f3n mediante t\u00e9cnicas inmunohistoqu\u00edmicas y de western blot. Se realizaron ensayos de proliferaci\u00f3n con 3h-timidina y estudios de microscopia \u00f3ptica y electr\u00f3nica de transmisi\u00f3n y barrido. Los resultados obtenidos confirmaban que tras 14 d\u00edas en cultivo, la poblaci\u00f3n celular se compone principalmente de c\u00e9lulas precursoras, con capacidad de proliferaci\u00f3n, adhesi\u00f3n y migraci\u00f3n, lo cual recapitulaba propiedes biol\u00f3gicas, para la aplicaci\u00f3n de las mismas en el modelo experimental de cicatrizaci\u00f3n dise\u00f1ado en el segundo objetivo, donde se realiz\u00f3 un defecto excisional cut\u00e1neo de 2 cm de di\u00e1metro en cada una de las orejas del animal de experimentaci\u00f3n. Los defectos se realizaron en la cara dorsal de ambas orejas de animal con un dispositivo r\u00edgido, cil\u00edndrico y cortante. Se respet\u00f3 el tejido correspondiente al peric\u00f3ndrio del cart\u00edlago de la oreja. El sacrificio de los animales se realiz\u00f3 a los 14 d\u00edas, estableci\u00e9ndose dos grupos de estudio: grupo i &#8211; control (oreja izquierda), (n=10); defectos sin tratamiento, y grupo ii (n=10), defectos que fueron tratados con transplante de c\u00e9lulas madre aut\u00f3logas (mdsc) (oreja derecha). La poblaci\u00f3n celular, fue marcada con pkh-26 para su seguimiento dentro del defecto. Las heridas se protegieron con una cubierta de polietileno de dise\u00f1o propio. A continuaci\u00f3n, se coloc\u00f3 un collar\u00edn alrededor del cuello del animal para evitar que \u00e9ste manipulara las heridas con sus extremidades. a nivel macrosc\u00f3pico, los defectos creados fueron evaluados en cuanto a los fen\u00f3menos de contracci\u00f3n y recubrimiento. Las \u00e1reas de contracci\u00f3n y reepitelizaci\u00f3n se estudiaron por histomorfometr\u00eda. Los estudios morfom\u00e9tricos fueron realizados mediante t\u00e9cnicas de an\u00e1lisis de imagen. Para el estudio estad\u00edstico se emple\u00f3 el test de la u de mann.Whitney. los estudios histol\u00f3gicos fueron realizados empleando t\u00e9cnicas de microscopia \u00f3ptica y electr\u00f3nica de transmisi\u00f3n y barrido e inmunohistoqu\u00edmicos. los resultados morfom\u00e9tricos, muestran que el fen\u00f3meno de contracci\u00f3n fue significativamente superior en el grupo control que en el tratado (1.83 cm2 vs 2.72 cm2); *p<0.05). Expresado en porcentaje de contracci\u00f3n obsevamos un 50.83+- 12.84 % en el grupo control frente a un 22.25+- 9.56% en el grupo sometido a terapia celular. El \u00e1rea de reepitelizaci\u00f3n fue significativamente mayor en el grupo tratado que en el grupo control (2.50 cm2 vs 1.29 cm2; *p<0.05). Los respectivos porcentajes de las \u00e1reas reepitelizadas fueron de 96.33+- 3.09 % vs 70.91+- 6.94%. la microscopia \u00f3ptica mostr\u00f3 como el proceso cicatricial en las heridas control, avanza a partir de los bordes sanos cel defecto. En este proceso encontramos con frecuencia en las \u00e1reas m\u00e1s superficiales, c\u00e9lulas blancas, c\u00e9lulas de caracter\u00edsticas epiteliales y yemas vasculares. La tinci\u00f3n rojo sirio para la detecci\u00f3n de col\u00e1geno, revel\u00f3 la presencia de col\u00e1geno tipo iii en los defectos control y de col\u00e1geno tipo i o maduro en las orejas sembradas. En estos defectos el trazador pkh-26, permiti\u00f3 observar su evoluci\u00f3n dentro de la herida. En presencia del sustrato sembrado se observ\u00f3 una superficie continua entre los bordes del defecto. Este sustrato favorece la proliferaci\u00f3n y migraci\u00f3n de las c\u00e9lulas desde los bordes sanos. Los queratinocitos proliferaban sobre dicho sustrato y de forma centr\u00edpeta, hacia el centro del defecto. el estudio inmunohistoqu\u00edmico realizado sobre las muestras control y las sometidas a terapia celular, revel\u00f3 en ambos casos una ausencia de expresi\u00f3n para vimentina y desmina, mientras que la expresi\u00f3n para o-actina, se localizaba sobre los vasos nativos en los dos grupos de estudio. La expresi\u00f3n de miosina en las muestras control fue mayor que en las heridas tratadas, posiblemente correspondientes a zonas de mayor presencia de miofibroblastos y consecuentemente a \u00e1reas de contracci\u00f3n. los resultados obtenidos nos permiten formular las siguientes conclusiones: 1.- La poblaci\u00f3n aislada a partir de m\u00fasculo esquel\u00e9tico, posee las propiedades inherentes a una poblaci\u00f3n de c\u00e9lulas diferenciales y con gran capacidad de proliferaci\u00f3n y autorrenovaci\u00f3n como lo demuestran los resultados comparados con la poblaci\u00f3n de fibroblastos utilizados como control de c\u00e9lulas diferenciadas. 2.- Tras 14 d\u00edas de cultivo, la poblaci\u00f3n de mdsc es indiferenciada, proliferativa y muy adherente, por lo que consideramos que son caracter\u00edsticas id\u00f3neas para ser transplantadas como terapia celulas sobre un defecto cut\u00e1neo excisional. 3.- Los defectos sometidos a terapia celular durante dos semanas, mostraron una significativa disminuci\u00f3n del \u00e1rea de contracci\u00f3n del defecto creado, as\u00ed como una significativa aceleraci\u00f3n de la reepitelizaci\u00f3n con respecto al grupo sin tratamiento alguno. las conclusiones anteriores, nos permiten elevar nuestra hip\u00f3tesis a categor\u00eda de tesis y afirmar que: las c\u00e9lulas derivadas de c\u00e9lulas musculares indiferenciadas mdsc aisladas por nosotros y tras 14 d\u00edas de cultivo, cumplen los requisitos exigidos para su uso como terapia celular, tanto en n\u00famero como caracter\u00edsticas de adhesi\u00f3n, proliferaci\u00f3n y diferenciaci\u00f3n.\n\n\n\n&nbsp;\n\n\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Ingenier\u00eda tisular: aplicaci\u00f3n de c\u00e9lulas madre en reparaci\u00f3n de defectos epid\u00e9rmicos<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Ingenier\u00eda tisular: aplicaci\u00f3n de c\u00e9lulas madre en reparaci\u00f3n de defectos epid\u00e9rmicos <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Celia Corrales G\u00f3mez <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Alcal\u00e1<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 30\/05\/2006<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Julia Bujan Varela<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Antonio Campos mu\u00f1oz <\/li>\n<li>Jos\u00e9 Pe\u00f1a amaro (vocal)<\/li>\n<li>M\u00aa carmen Gianonatti alias (vocal)<\/li>\n<li>Francisco Javier Burgos revilla (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Celia Corrales G\u00f3mez Una adecuada cicatrizaci\u00f3n de las heridas de la piel es clave en el desarrollo 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