{"id":53031,"date":"2006-09-06T00:00:00","date_gmt":"2006-09-06T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/estabilizacion-de-penicilia-g-acilasa-por-inmovilizacion-covalente-multipuntual-dirigida-mutagenesis-de-la-superficie-de-la-enzima-para-mejorar-la-complementariedad-enzima-soporte-activado\/"},"modified":"2006-09-06T00:00:00","modified_gmt":"2006-09-06T00:00:00","slug":"estabilizacion-de-penicilia-g-acilasa-por-inmovilizacion-covalente-multipuntual-dirigida-mutagenesis-de-la-superficie-de-la-enzima-para-mejorar-la-complementariedad-enzima-soporte-activado","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/quimica\/estabilizacion-de-penicilia-g-acilasa-por-inmovilizacion-covalente-multipuntual-dirigida-mutagenesis-de-la-superficie-de-la-enzima-para-mejorar-la-complementariedad-enzima-soporte-activado\/","title":{"rendered":"Estabilizaci\u00f3n de penicilia g acilasa por inmovilizaci\u00f3n covalente multipuntual dirigida. mutag\u00e9nesis de la superficie de la enzima para mejorar la complementariedad enzima-soporte activado"},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Mar\u00eda Valeria Graz\u00fa Bonav\u00eda <\/strong><\/h2>\n<p>En esta tesis se propone una nueva estrategia para alcanzar un alto grado de estabilizaci\u00f3n de enzimas industriales: la rigidificaci\u00f3n orientada muy intensa de una determinada regi\u00f3n de la superficie enzim\u00e1tica por medio de la optimizaci\u00f3n de la uni\u00f3n covalente multipuntual sobre soportes activados pre-existentes. El principal objetivo de esta tesis doctoral involucr\u00f3 el desarrollo de los siguientes sub-objetivos:  a.- La preparaci\u00f3n a medida de soportes disulfuro-ep\u00f3xido conteniendo: i)- una peque\u00f1a proporci\u00f3n de grupos tiol-reactivos capaces de inmovilizar de forma selectiva a la enzima a trav\u00e9s de residuos de ciste\u00edna insertados en la superficie proteica; ii)- una alta concentraci\u00f3n de grupos ep\u00f3xido capaces de realizar una intensa uni\u00f3n covalente irreversible multipuntual con grupos nucle\u00f3filos de la superficie proteica cercanos a la zona donde se introdujo el residuo de ciste\u00edna. A su vez, se llevo a cabo la optimizaci\u00f3n del proceso de uni\u00f3n covalente multipunutal en los soportes  mixtos desarrollados.  b.- La obtenci\u00f3n de distintos mutantes, conteniendo un residuo de ciste\u00edna en distintas regiones de la superficie proteica con alto contenido nativo en lisinas. Con este fin se evalu\u00f3 la estructura tridimensional de la penicilina g acilasa (pga) de e. Coli, y se seleccionaron distintos amino\u00e1cidos donde realizar la mutaci\u00f3n. Despu\u00e9s de evaluar a trav\u00e9s de simulaci\u00f3n por din\u00e1mica molecular que la introducci\u00f3n de las distintas mutaciones no provocaba alteraciones en la conformaci\u00f3n de la enzima, los mutantes seleccionados fueron obtenidos por mutag\u00e9nesis dirigida.  c.- La rigidificaci\u00f3n orientada de cada uno de los distintos mutantes, con el fin de poder detectar zonas de la superficie proteica m\u00e1s sensibles a la estabilizaci\u00f3n, la cual result\u00f3 ser una regi\u00f3n cercana al centro activo de la enzima (regi\u00f3n cercana al residuo b380 de la enzima).  d.-  El enriquecimiento en residuos de lisina de la z<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Estabilizaci\u00f3n de penicilia g acilasa por inmovilizaci\u00f3n covalente multipuntual dirigida. mutag\u00e9nesis de la superficie de la enzima para mejorar la complementariedad enzima-soporte activado<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Estabilizaci\u00f3n de penicilia g acilasa por inmovilizaci\u00f3n covalente multipuntual dirigida. mutag\u00e9nesis de la superficie de la enzima para mejorar la complementariedad enzima-soporte activado <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Mar\u00eda Valeria Graz\u00fa Bonav\u00eda <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Aut\u00f3noma de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 09\/06\/2006<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Jos\u00e9 Manuel Guis\u00e1n Seijas<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: Jos\u00e9 vicente Sinisterra gago <\/li>\n<li>Jos\u00e9 Luis Garcia lopez (vocal)<\/li>\n<li>Carlos G\u00f3mez-moreno calera (vocal)<\/li>\n<li> De la mata riesgo isabel (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis 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