{"id":55022,"date":"2018-03-09T22:42:44","date_gmt":"2018-03-09T22:42:44","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/hematuria-enzootica-bovina-estudio-de-prevalencia-en-mataderos-aspectos-histopatologicos-inmunohistoquimicos-y-moleculares\/"},"modified":"2018-03-09T22:42:44","modified_gmt":"2018-03-09T22:42:44","slug":"hematuria-enzootica-bovina-estudio-de-prevalencia-en-mataderos-aspectos-histopatologicos-inmunohistoquimicos-y-moleculares","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/hematuria-enzootica-bovina-estudio-de-prevalencia-en-mataderos-aspectos-histopatologicos-inmunohistoquimicos-y-moleculares\/","title":{"rendered":"Hematuria enzootica bovina. estudio de preValencia en mataderos. aspectos histopatologicos, inmunohistoquimicos y moleculares"},"content":{"rendered":"

Tesis doctoral de David Sardon Ruiz <\/strong><\/h2>\n

La hematuria enzo\u00f3tica bovina (heb) es una enfermedad neopl\u00e1sica que afecta al ganado vacuno y que se debe a una intoxicaci\u00f3n cr\u00f3nica por la ingesti\u00f3n de hel\u00e9chos (pteridium spp.). Los animales expuestos de forma reiterada al consumo de hel\u00e9chos desarrollan lesiones tumorales en la vejiga de la orina. Se desconoce la importancia de la heb en nuestro pa\u00eds, as\u00ed como diversos aspectos de la enfermedad, sobre todo en etapas tempranas de la misma, antes de que aparezcan los tumores vesicales. En esta tesis doctoral se ha llevado a cabo un estudio de preValencia de lesiones de vejiga de la orina en ganado vacuno adulto en extensivo sacrificado en matadero y estudios histol\u00f3gicos, inmunohistoqu\u00edmicos y moleculares de lesiones vesicales de ganado bovino relacionadas con la ingesta continuada de hel\u00e9chos. para conocer la preValencia de lesiones en la vejiga de la orina en matadero y su relaci\u00f3n con el consumo de hel\u00e9chos, se llev\u00f3 a cabo la secci\u00f3n y observaci\u00f3n de la mucosa de todo el ganado bovino adulto en explotaci\u00f3n extensiva sacrificado en el matadero de bilbao (zorroza) durante un a\u00f1o (de abril de 2002 a abril de 2003), (n=126) obteni\u00e9ndose muestras de las vejigas lesionadas para posteriores an\u00e1lisis (n=46). Se incluyeron, asimismo, vejigas de la orina de vacas necropsiadas pertenecientes a una explotaci\u00f3n con hematuria enzo\u00f3tica bovina end\u00e9mica (plas\u00e9ncia, c\u00ed\u00a0ceres, explotaci\u00f3n a). Se tomaron muestras de orina a vacas adultas de la explotaci\u00f3n a (n=66; media de edad=8,8 a\u00f1os, min-max=2-16) y de otra granja afectada de heb en los molinos (Madrid, explotaci\u00f3n b) (n=54; media de edad=7,2 a\u00f1os, min-max= 2-14) para el estudio de citolog\u00edas urinarias a partir del sedimento urinario mediante la tinci\u00f3n de may-gr\u00ed\u00bcmwald-giemsa, siguiendo la metodolog\u00eda general descrita para animales dom\u00e9sticos. Se tomaron muestras de sangre a 42 animales adultos de la explotaci\u00f3n a para la determinaci\u00f3n de los niveles s\u00e9ricos de factor de necrosis tumoral-a (tnf-a) mediante la t\u00e9cnica de elisa (human tnf-a elisa, versi\u00f3n 3, blk internacional). Se emplearon muestras de sangre (n=10) y orina (n=4) de vacas sanas como controles para el estudio citol\u00f3gico y s\u00e9rico de tnf-a. se realiz\u00f3 un estudio macrosc\u00f3pico e histol\u00f3gico en un total de 56 vejigas de la orina (matadero de bilbao -50-; explotaci\u00f3n a, -6-). Se incluyeron 4 vejigas de la orina normales de ganado vacuno adulto obtenidas procedentes tambi\u00e9n del matadero de bilbao, como controles. Las muestras se procesaron para el estudio histol\u00f3gico siguiendo m\u00e9todos rutinarios y se ti\u00f1eron con h\/e. Se valor\u00f3 en la mucosa el n\u00famero de capas y aspecto de las c\u00e9lulas del epitelio de transici\u00f3n, (c\u00e9lulas normales, displ\u00e1sicas o tumorales). En la l\u00e1mina propia se analiz\u00f3 la presencia o ausencia de edema, congesti\u00f3n, fibrosis, c\u00e9lulas inflamatorias, dilataci\u00f3n de vasos linf\u00e1ticos, hemorragias, as\u00ed como el aumento de los capilares subepiteliales. Mediante la t\u00e9cnica inmunohistoqu\u00edmica de streptavidina-biotina-peroxidasa, se analiz\u00f3 la inmunoexpresi\u00f3n de h-ras (n=56), p53 (n=56), papilomavirus bovino tipo 1 (n=56), tnf-o-(n=60) y ki-67 (n=56). Se incluyeron 4 vejigas bovinas normales como controles. La inmunoexpresi\u00f3n de h-ras, ki-67 y p53 tambi\u00e9n se valor\u00f3 en citolog\u00edas urinarias fijadas en acetona (n=123). El recuento de c\u00e9lulas positivas (h-ras, ki-67 y p53) se realiz\u00f3 empleando un microscopio olympus bx 50 adosado a un ordenador provisto de un analizador de im\u00e1genes (micro image versi\u00f3n 4.0 para windows 98) con el que se valoraban en cada caso tres campos representativos (20x). el estudio molecular se centr\u00f3 en el gen h-ras, en la presencia de papilomavirus bovino y en la t\u00e9cnica differential display. De acuerdo con la bibliograf\u00eda consultada, se analiz\u00f3 mediante pcr la presencia de mutaciones en el ex\u00f3n 2 del gen h-ras en 13 muestras de vejiga de la orina seleccionadas tras el estudio anatomopatol\u00f3gico e inmunohistoqu\u00edmico y conservadas en rnaiater. Para el an\u00e1lisis molecular mediante pcr de papilomavirus bovino se analiz\u00f3 la presencia de mutaciones en un fragmento de 307 pares de bases que inclu\u00eda la secuencia de la prote\u00edna e5 de bpv-1 y bpv-2 y en una regi\u00f3n de control, denominada \u00ablong control regi\u00f3n\u00bb (lcr) de 250 pares de bases de bpv-1 y bpv-2, que es la encargada de controlar la expresi\u00f3n de los genes e6 y e7. Para ello, se seleccionaron 36 muestras de vejigas de la orina previamente caracterizadas mediante el estudio anatomopatol\u00f3gico e inmunohistoqu\u00edmico y conservadas en rnaiater. En ambos casos se utiliz\u00f3 una vejiga bovina normal como control negativo. La t\u00e9cnica de differential display se realiz\u00f3 sobre 6 vejigas preservadas en rnaiater y seleccionadas tras el estudio histopatol\u00f3gico (explotaci\u00f3n a -3-; matadero de bilbao -3-). la asociaci\u00f3n estad\u00edstica de los datos histopatol\u00f3gicos e inmunohistoqu\u00edmicos fue estudiada con software spss (versi\u00f3n 11.5) en el centro de proceso de datos de la ucm. Se consideraron significativos valores de p< 0,05. el estudio de preValencia en matadero revel\u00f3 la presencia de alteraciones macrosc\u00f3picas en un 36,5% (46\/126) del total de muestras inspeccionadas (43\/46 cistitis cr\u00f3nicas y 3\/46 procesos tumorales). Todos los animales con lesiones vesicales proced\u00edan de explotaciones extensivas con riesgo de intoxicaci\u00f3n cr\u00f3nica por hel\u00e9chos (extremadura). Dada la ausencia de alteraciones externas en las vejigas afectadas, se propone la secci\u00f3n de la vejiga de la orina como protocolo de inspecci\u00f3n rutinario en mataderos en el ganado vacuno adulto procedente de zonas de riesgo. en total (matadero y explotaci\u00f3n a) se diagnosticaron histol\u00f3gicamente 44 cistitis cr\u00f3nicas y 8 tumores. El estudio histopatol\u00f3gico de las cistitis cr\u00f3nicas, mostr\u00f3 un incremento del n\u00famero de capas del epitelio (47,7%) y cambios displ\u00e1sicos en el epitelio de transici\u00f3n (20,4%). En la l\u00e1mina propia se observ\u00f3 la presencia de edema (13,6%), linfangiectasias (56,8%), incremento de capilares subepiteliales (93,2%) y presencia de infiltrado linfocitario multifocal (70,4%) y difuso (15,9%). Los 8 tumores analizados fueron diagnosticados histol\u00f3gicamente como carcinoma de c\u00e9lulas de transici\u00f3n in situ (n=1) y tumores mixtos (n=7) con un componente epitelial (carcinoma de c\u00e9lulas de transici\u00f3n) y un componente mesenquimatoso (hemangiosarcoma). En todos los casos se observ\u00f3 una reacci\u00f3n inflamatoria cr\u00f3nica asociada en el \u00e1rea adyacente no tumoral. Este hecho, junto con el alto grado de displasia celular encontrado en las cistitis cr\u00f3nicas (20,4%), apoya la hip\u00f3tesis de que las cistitis cr\u00f3nicas en ganado adulto expuesto a la ingesti\u00f3n de hel\u00e9chos est\u00e1n relacionadas con el efecto t\u00f3xico y carcinogen\u00e9tico de esta planta. el estudio inmunohistoqu\u00edmico de h-ras, ki-67 y p53 en las vejigas de la orina, mostr\u00f3 positividad nuclear y citopl\u00e1smica con los anticuerpos frente a p53 y h-ras y \u00fanicamente nuclear en el caso de ki-67. El estudio estad\u00edstico indic\u00f3 un incremento significativo (p<0,0001) del valor medio de h-ras en cistitis cr\u00f3nicas y procesos tumorales respecto a vejigas normales, un incremento significativo (p<0,0001) del valor medio de ki-67 en vejigas tumorales respecto a cistitis cr\u00f3nicas y vejigas normales y un incremento significativo (p= 0,01) de p53 en los tumores respecto al grupo de vejigas normales y de cistitis cr\u00f3nicas. Dada su relaci\u00f3n significativa con los marcadores empleados, las caracter\u00edsticas histopatol\u00f3gicas de las cistitis cr\u00f3nicas que m\u00e1s podr\u00edan relacionarse con el avance del proceso t\u00f3xico\/neopl\u00e1sico son: el aumento difuso del n\u00famero de capas del epitelio, la inflamaci\u00f3n difusa y la presencia de agregados linfocitarios. Las muestras vesicales mostraron positividad a tnf-a en el citoplasma de las c\u00e9lulas del epitelio de transici\u00f3n, c\u00e9lulas endoteliales de los vasos, fibroblastos y c\u00e9lulas inflamatorias de la l\u00e1mina propia y c\u00e9lulas musculares lisas en vejigas de la orina normales y en las cistitis cr\u00f3nicas. Tambi\u00e9n se observ\u00f3 positividad en el par\u00e9nquima y estroma tumorales. La expresi\u00f3n inmunohistoqu\u00edmica de tnf-a en tejido vesical mostr\u00f3 un incremento significativo (p<0,0001), de la intensidad de tinci\u00f3n con tnf-a en vejigas con procesos tumorales respecto a cistitis cr\u00f3nicas y en \u00e9stas respecto a vejigas sanas en todas las c\u00e9lulas estudiadas. La expresi\u00f3n de tnf-a en el epitelio de transici\u00f3n se increment\u00f3 de manera estad\u00edsticamente significativa en asociaci\u00f3n con los otros marcadores empleados (h-ras, ki-67 y p53), indicando su relaci\u00f3n con el proceso t\u00f3xico\/neopl\u00e1sico. El estudio inmunohistoqu\u00edmico para la detecci\u00f3n de cuerpos de inclusi\u00f3n intranucleares de bpvs no permiti\u00f3 observar en ning\u00fan caso la presencia de los mismos, acorde con la no-visualizaci\u00f3n histol\u00f3gica. el examen microsc\u00f3pico del sedimento urinario revel\u00f3 la presencia de hematuria (macro y microhematuria) en un 19,3% (explotaci\u00f3n a) y un 17,1% (explotaci\u00f3n b) de los casos. Existi\u00f3 un incremento de las c\u00e9lulas descamadas del epitelio de transici\u00f3n en un 50,87% (explotaci\u00f3n a) y un 39% (explotaci\u00f3n b) de las muestras y la presencia de nidos celulares en un 40,35% (explotaci\u00f3n a) y un 17% (explotaci\u00f3n b). El diagn\u00f3stico citol\u00f3gico fue de procesos hiperpl\u00e1sicos\/inflamatorios en un 36,13% de los casos. El escaso n\u00famero de bacterias pat\u00f3genas encontradas y la ausencia de piur\u00eda permiti\u00f3 descartar el origen infeccioso de estos procesos. La tinci\u00f3n inmunocitoqu\u00edmica de las citolog\u00edas, no ofreci\u00f3 un n\u00famero suficiente de c\u00e9lulas positivas\/negativas como para establecer resultados fiables. la detecci\u00f3n de tnf-a en suero, indic\u00f3 un incremento de los valores de tnf-a en las vacas del grupo a (62,97\u00c2\u00b149,94 pg\/ml) respecto a las vacas utilizadas como control (47,18\u00c2\u00b116,61 pg\/ml), aunque no de forma significativa (p=0,069). El aumento observado en los valores s\u00e9ricos de tnf-a podr\u00eda explicarse, tal y como se ha explicado en ratas, por la exposici\u00f3n a carcin\u00f3genos (ptaquil\u00f3sido) contenidos en el hel\u00e9cho, ya que no se ha encontrado otra patolog\u00eda (incluyendo parasitosis) en las exploraciones cl\u00ednicas y anal\u00edticas realizadas en estos animales. el estudio molecular del gen h-ras, en los codones analizados, no detect\u00f3 ning\u00fan tipo de error en la s\u00edntesis del dna que pudiera explicar la sobreexpresi\u00f3n inmunohistoqu\u00edmica de esta prote\u00edna en el citoplasma celular. El an\u00e1lisis molecular mediante pcr de papilomavirus bovino (bpv) reflejaron la presencia de adn de bpv en un 37,5% (3\/8) de las vejigas. La t\u00e9cnica inmunohistoqu\u00edmica anti bpv no fue positiva en ning\u00fan caso analizado. Mediante la t\u00e9cnica de dif\u00ederential display, se encontraron 19 bandas expresadas tanto en las cistitis cr\u00f3nicas como en los tumores, indicando la expresi\u00f3n de estos genes y su posible participaci\u00f3n en el desarrollo de la heb. De ellas, 13 pudieron ser secuenciadas e identificadas como los genes codificantes para las prote\u00ednas zbtp4, flj20760, ltbp1, erbp, cald1, mylkquinasa, bov-a, titin, s16s ribosomal, rnf20, collllai y l18a ribosomal (chr7). Se caracteriz\u00f3 la banda 13 (col\u00e1geno intersticial tipo iii), sin detectarse mutaciones de inter\u00e9s. Son necesarios futuros estudios en profundidad para conocer las alteraciones g\u00e9nicas en esta enfermedad.\n\n\n\n \n\n\n

Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00abHematuria enzootica bovina. estudio de preValencia en mataderos. aspectos histopatologicos, inmunohistoquimicos y moleculares<\/strong>\u00ab<\/h3>\n
    \n
  • T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Hematuria enzootica bovina. estudio de preValencia en mataderos. aspectos histopatologicos, inmunohistoquimicos y moleculares <\/li>\n
  • Autor:<\/strong>\u00a0 David Sardon Ruiz <\/li>\n
  • Universidad:<\/strong>\u00a0 Complutense de Madrid<\/li>\n
  • Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 14\/10\/2006<\/li>\n<\/ul>\n

     <\/p>\n

    Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n
      \n
    • Director de la tesis<\/strong>\n
        \n
      • Laura Luisa Pe\u00f1a Fernandez<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n
      • Tribunal<\/strong>\n
          \n
        • Presidente del tribunal: Juan a Mar\u00eda Flores landeira <\/li>\n
        • Jos\u00e9 Carlos Gomez villamandos (vocal)<\/li>\n
        • Fernando anibal Vasquez fernandez (vocal)<\/li>\n
        • Luis Lujan lerma (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n

           <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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