{"id":56069,"date":"2018-03-09T22:43:47","date_gmt":"2018-03-09T22:43:47","guid":{"rendered":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/sin-categoria\/organization-of-phage-phi29-dna-replication-role-of-protein-p16-7\/"},"modified":"2018-03-09T22:43:47","modified_gmt":"2018-03-09T22:43:47","slug":"organization-of-phage-phi29-dna-replication-role-of-protein-p16-7","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.deberes.net\/tesis\/bioquimica-molecular\/organization-of-phage-phi29-dna-replication-role-of-protein-p16-7\/","title":{"rendered":"Organization of phage phi29 dna replication: role of protein p16.7."},"content":{"rendered":"<h2>Tesis doctoral de <strong> Daniel Mu\u00f1oz Espin <\/strong><\/h2>\n<p>Organization of phage phi29 dna replication: role of protein p16.7   se conoce poco sobre la organizaci\u00f3n in vivo de la replicaci\u00f3n del adn procari\u00f3tico asociada a la membrana. En la presente tesis, se ha estudiado este proceso fundamental utilizando el fago phi29 (cuyo hospedador es bacillus subtilis) como sistema modelo. La prote\u00edna de membrana p16.7, codificada por el fago phi29, es una de las pocas prote\u00ednas conocidas que est\u00e1 implicada en la asociaci\u00f3n de la replicaci\u00f3n del adn en la membrana. Los resultados obtenidos mostraron que p16.7 es una prote\u00edna modular compuesta por tres dominios independientes; un dominio transmembrana n-terminal, un dominio intermedio \u00abcoiled-coil\u00bb y un dominio funcional c-terminal que es responsable de la dimerizaci\u00f3n, de la oligomerizaci\u00f3n y de la uni\u00f3n al adn y a la prote\u00edna terminal por parte de la prote\u00edna. Aunque la estructura secundaria del domino funcional de p16.7, p16.7c. Es muy similar a la de los homeodominios eucari\u00f3ticos de uni\u00f3n al adn, sus estructuras terciarias son fundamentalmente diferentes, la resoluci\u00f3n de la estructura tridimensional de p16.7c por medio de t\u00e9cnicas de rmn y de rayos-x revel\u00f3 que p16.7c forma un nuevo tipo de plegamiento dim\u00e9rico de seis h\u00e9lices. Adem\u00e1s, la estructura cristalina de p16.7c en complejo con el adn de cadena doble determin\u00f3 los modos de oligomerizaci\u00f3n y de uni\u00f3n al adn, proporcionando un mayor conocimiento en la organizaci\u00f3n del genoma del fago en la membrana de la c\u00e9lula infectada. As\u00ed, tres d\u00edmeros de p16.7c se ordenan cara a cara formando una cavidad profunda en la que se une el adn. Este ordenamiento constituye una unidad funcional de uni\u00f3n al adn. La estructura de p16,7c permiti\u00f3 la identificaci\u00f3n de residuos y de regiones susceptibles de estar implicadas en la dimerizaci\u00f3n de p16.7c y en la funcionalidad. Se utilizaron mutantes puntuales y de deleci\u00f3n para poder determinar estas predicciones. Estos estudios mostraron que tanto el trp-116 como la extensi\u00f3n c-terminal (residuos 122-130) de p16.7c son cruciales para su dimerizaci\u00f3n y funcionalidad. El amino\u00e1cido trp-116 forma parte de un nuevo tipo de caja arom\u00e1tica de dimerizaci\u00f3n que hemos denominado \u00abcaja de prolinas\u00bb. Mientras que el residuo asn-120 juega un papel minoritario en la dimerizaci\u00f3n de p16.7c, resulta esencial para la oligomerizaci\u00f3n y la uni\u00f3n al adn, proporcionando as\u00ed una evidencia de que la oligomerizaci\u00f3n y la uni\u00f3n al adn por parte de p16.7c son procesos que est\u00e1n acoplados, finalmente, se estudi\u00f3 la localizaci\u00f3n in vivo de varios componentes de la maquinaria de replicaci\u00f3n del fago phi29 por medio de t\u00e9cnicas de microscop\u00eda de fluorescencia. De esta forma, se determin\u00f3 que p16.7, el adn gen\u00f3mico y la adn polimerasa de phi29 tienen una distribuci\u00f3n helicoidal en c\u00e9lulas infectadas de b. Subtilis. Interesantemente, la distribuci\u00f3n helicoidal de p16.7, el adn gen\u00f3mico y la adn polimerasa de phi29 es dependiente de las prote\u00ednas citoesquel\u00e9ticas mreb, mbl y mrebh de b. Subtilis. Adem\u00e1s, la replicaci\u00f3n del adn del fago phi29 se vio severamente afectada en c\u00e9lulas mutantes para estas prote\u00ednas del citoesqueleto. En conjunto, estos resultados indican fuertemente que el citoesqueleto bacteriano sirve de andamio para la organizaci\u00f3n de la replicaci\u00f3n del fago phi29 asociada a la membrana. Adem\u00e1s, los resultados son compatibles con un modelo en el que p16.7 forma parte de un complejo que conecta el adn de phi29 con el citoesqueleto bacteriano.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Datos acad\u00e9micos de la tesis doctoral \u00ab<strong>Organization of phage phi29 dna replication: role of protein p16.7.<\/strong>\u00ab<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>T\u00edtulo de la tesis:<\/strong>\u00a0 Organization of phage phi29 dna replication: role of protein p16.7. <\/li>\n<li><strong>Autor:<\/strong>\u00a0 Daniel Mu\u00f1oz Espin <\/li>\n<li><strong>Universidad:<\/strong>\u00a0 Aut\u00f3noma de Madrid<\/li>\n<li><strong>Fecha de lectura de la tesis:<\/strong>\u00a0 14\/12\/2006<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<h3>Direcci\u00f3n y tribunal<\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Director de la tesis<\/strong>\n<ul>\n<li>Johannes Jozef Meijer Wilhelmus<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<li><strong>Tribunal<\/strong>\n<ul>\n<li>Presidente del tribunal: jose Lopez carrascosa <\/li>\n<li>rut Carballido lopez (vocal)<\/li>\n<li>Rafael Giraldo suarez (vocal)<\/li>\n<li>Luis Menendez arias (vocal)<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p>&nbsp;<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Tesis doctoral de Daniel Mu\u00f1oz Espin Organization of phage phi29 dna replication: role of protein p16.7 se conoce poco sobre 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